人YI腺(xian)星(xing)狀(zhuang)細胞

人YI腺(xian)星狀(zhuang)細胞

我司產(chan)品齊全，因(yin)上架數(shu)量(liang)有限(xian)，未(wei)能全部(bu)上架，如需(xu)訂購(gou)或(huo)者(zhe)產(chan)品詳情(qing)請(qing)直(zhi)接(jie)聯(lian)系(xi)我(wo)司銷售！

細胞培養(yang)步(bu)驟(zhou)

1) 培養(yang)基(ji)及(ji)培養凍存(cun)條件(jian)準備(bei)：

1. 準備(bei) McCOY's 5A 培養(yang)基(McCOY's 5A，SIGMA,貨(huo)號 M4892，添(tian)加 NaHC03 2.2g/L)，90%;you質(zhi)胎牛(niu)血清(qing)，10%。

2. 培養(yang)條件(jian)：氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%;碳(tan)，5%。溫(wen)度(du)：37攝(she)氏(shi)度(du)，培養箱濕(shi)度(du)為70%-80%。

3. 凍存(cun)液(ye)：90%培養(yang)基，10%DMSO,現用現配(pei)。液(ye)氮儲存(cun)。

2) 細胞處理(li)：

復(fu)蘇(su)細胞：將含有 lmL 細胞懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37°C 水浴中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加 入(ru) 4mL 培(pei)養基(ji)混(hun)合(he)均勻。在(zai) 1000RPM 條件(jian)下離心 4分鐘，棄(qi)去上清(qing)液，補 加 l-2mL 培養(yang)基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所有細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜（或(huo)將(jiang) 細胞懸(xuan)液(ye)加入(ru) l〇cm皿中(zhong)，加入(ru)約(yue) 8ml 培(pei)養基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。隔(ge)天換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細胞密度(du)。

細胞凍存(cun)：

待(dai)細胞生(sheng)長狀(zhuang)態良好時，可(ke)進行(xing)細胞凍存(cun)。貼(tie)壁(bi)細胞凍存(cun)時，先(xian)要(yao)消(xiao)化處理(li)並進行(xing)細胞計(ji)數(shu)。消(xiao)化方法按(an)照(zhao)細胞傳(chuan)代(dai)方法步(bu)驟(zhou)進行(xing)， 重(zhong)懸(xuan)液(ye)使用(yong)血清(qing)。懸(xuan)浮(fu)細胞直(zhi)接(jie)計(ji)數(shu)後(hou)離心，用(yong)血清(qing)重(zhong)懸(xuan)浮(fu)，加 DMSO 至最終濃度(du)為(wei)10%。加入(ru) DMSO 後(hou)迅(xun)速混(hun)勻(yun)，按每 lml 的數(shu)量(liang)分配(pei)到(dao)凍存(cun)管(guan)中(zhong)。本公司按每個凍存(cun)管(guan)細胞數(shu)目大於(yu) 1X106個細胞凍存(cun)。

細胞接(jie)受後(hou)的(de)處理(li)：

1. 收(shou)到細胞後，請(qing)檢(jian)查(zha)是(shi)否(fou)漏(lou)液(ye)，如果(guo)漏(lou)液(ye)，請(qing)拍(pai)照(zhao)片(pian)發給(gei)我們。

2. 請(qing)先在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)確(que)認細胞生(sheng)長狀(zhuang)態，去掉封(feng)口膜並將(jiang) T25瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37°C 培(pei)養約(yue) 2-3h〇

3. 棄去 T25瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)基，添(tian)加 6ml 本公司附帶(dai)的培養(yang)基(ji)。

4. 如果(guo)細胞長滿（90%以上）請(qing)及時進行(xing)細胞傳(chuan)代(dai)，傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)用 6ml 本公司附帶(dai)的培養(yang)基(ji)。

5. 接(jie)到細胞次日(ri)，請(qing)檢(jian)查(zha)細胞是(shi)否(fou)汙染，若(ruo)發現汙染或(huo)疑(yi)似(si)汙染，請(qing)及時與(yu)我們取(qu)得聯(lian)系(xi)。

人YI腺(xian)星(xing)狀(zhuang)細胞

培養(yang)方法：

收(shou)到細胞後，在(zai)倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察整(zheng)個細胞生(sheng)長情況：

如果(guo)細胞未(wei)長滿，用(yong)75%酒精噴(pen)灑(sa)整(zheng)個(ge)瓶(ping)消毒(du)後放(fang)到(dao)超(chao)菌(jun)臺(tai)內(nei)，嚴(yan)格(ge)無(wu)菌(jun)操作(zuo)，打(da)開(kai)細胞培養(yang)瓶(ping)，留(liu)10ml培(pei)養(yang)液繼續(xu)培養。

如果(guo)細胞已(yi)長滿（達(da)80-90%）。即可(ke)進行(xing)傳(chuan)代(dai)，具(ju)體(ti)步(bu)驟(zhou)如下(xia)：

a，棄去培養(yang)液，用(yong)PBS洗(xi)1-2次。

b，向(xiang)瓶(ping)內(nei)加入(ru)1.0-2.0ml酶液(ye)，在(zai)倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞大部(bu)分變圓(yuan)，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，吸(xi)取(qu)酶，加含有6ml 含10%血清(qing)的培(pei)養(yang)液(ye)，輕輕吹(chui)打(da)細胞。

c，加入(ru)等(deng)量的(de)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，輕輕吹(chui)打(da)混(hun)勻(yun)後吸出壹(yi)半，分到新的培養(yang)

d，傳(chuan)代(dai)比(bi)例(li)：1:2-1:3

對於(yu)懸(xuan)浮(fu)細胞，傳(chuan)代(dai)可(ke)參(can)考(kao)以下方法：

方法壹(yi)：收(shou)集(ji)細胞，1000RPM，常溫(wen)條件(jian)下離心 5分鐘，棄(qi)去上清(qing)液，補加 l-2mL 培養(yang)液後(hou)吹(chui)句，將細胞懸(xuan)液(ye)按 1: 2到(dao) 1: 5的比(bi)例(li)分到新的含 8ml 培 養(yang)基(ji)的 新皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

方法二(er)：可(ke)選擇半數(shu)換(huan)液方式，棄去半數(shu)培(pei)養基(ji)後，將(jiang)剩余(yu)細胞懸(xuan)起(qi)，將細 胞懸(xuan) 液按(an) 1: 2到 1: 3的(de)比(bi)例(li)分到新的含 8ml 培養(yang)基(ji)的新皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

操作(zuo)要(yao)點(dian)：

1）將培(pei)養(yang)基(ji)在(zai)37℃水浴鍋(guo)預熱；準備(bei)壹(yi)個15mL無(wu)菌(jun)的離心管(guan)，加入(ru)8mL預熱培養(yang)基。

2）將凍存(cun)細胞從(cong)液氮罐中(zhong)取出，快速放(fang)入(ru)37℃水浴鍋(guo)中(zhong)復(fu)溫(wen)（可(ke)準(zhun)備(bei)壹(yi)潔凈的(de)燒(shao)杯，裝滿(man)37℃的水，細胞凍存(cun)管(guan)取出後(hou)迅(xun)速放(fang)入(ru)燒(shao)杯內(nei)，再逐步(bu)轉(zhuan)移(yi)到(dao)水浴鍋(guo)中(zhong)）。輕輕晃(huang)動凍存(cun)管(guan)，使細胞能在(zai)1~2min內(nei)解凍，使細胞能盡(jin)快通(tong)過(guo)易(yi)受損的溫(wen)度(du)段（-5~0℃）。註(zhu)意凍存(cun)管(guan)管(guan)口不能(neng)沒(mei)入(ru)水中(zhong)，避免引(yin)起汙染。

3）用75%酒精擦(ca)拭凍存(cun)管(guan)後再置(zhi)於(yu)超(chao)凈臺(tai)內(nei)，將管(guan)內(nei)細胞轉移(yi)至(zhi)準備(bei)好的離心管(guan)內(nei)，輕輕吹(chui)打(da)液(ye)體，使(shi)細胞均勻(yun)分散(san)，吹(chui)打(da)時避(bi)免產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao)。用(yong)新鮮培養(yang)基(ji)洗管(guan)壁2次，均轉(zhuan)移至(zhi)離心管(guan)內(nei)。

4）800rpm離心5min，棄(qi)上清(qing)，加入(ru)新鮮的培(pei)養(yang)基，吹(chui)打(da)制(zhi)成(cheng)細胞懸(xuan)液(ye)。

5）將細胞懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至T25細胞瓶(ping)內(nei)，補加適量(liang)的培(pei)養(yang)基，輕輕晃(huang)動細胞瓶(ping)使細胞分布(bu)均勻，放(fang)入(ru)溫(wen)箱內(nei)培養。

6）隔(ge)天觀(guan)察細胞貼(tie)壁(bi)生(sheng)長情況，換新鮮培養(yang)基(ji)以去除死(si)細胞。繼續(xu)培養，待(dai)細胞長至80~90%匯合時正(zheng)常傳(chuan)代(dai)。壹(yi)般(ban)剛(gang)復(fu)蘇(su)的細胞需經過(guo)2~3次傳(chuan)代(dai)，細胞活力恢(hui)復(fu)後才(cai)能(neng)進行(xing)後續(xu)的實(shi)驗。

友(you)情提示註(zhu)意以下幾點(dian)：

1、收(shou)到細胞後請(qing)盡(jin)快更(geng)換為(wei)含15%血清(qing)的新鮮培養(yang)基(ji)，如因(yin)特殊情況需要(yao)繼(ji)續(xu)使用原瓶(ping)，請(qing)在(zai)原(yuan)瓶(ping)培養基(ji)中(zhong)額外添(tian)加10%的血清(qing)

2、貼(tie)壁(bi)細胞收(shou)到當(dang)天切(qie)忌立(li)刻(ke)消(xiao)化，請(qing)將細胞換液(ye)後(hou)放(fang)置(zhi)培(pei)養(yang)箱孵育到(dao)隔(ge)天再做消(xiao)化(hua)傳(chuan)代(dai)，請(qing)優(you)先選擇直(zhi)徑6cm的培(pei)養(yang)皿進行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)

3、如簽(qian)收(shou)時出(chu)現培(pei)養瓶(ping)壁破(po)裂，漏(lou)液(ye)等情(qing)況請(qing)及時做好照(zhao)片(pian)記(ji)錄(lu)並(bing)聯(lian)系(xi)實(shi)驗室(shi)

細胞用途(tu)：僅供(gong)科(ke)研(yan)使用(yong)。