人(ren)胰島細胞

人(ren)胰島細胞

我司(si)產(chan)品齊(qi)全，因(yin)上架(jia)數量有(you)限(xian)，未能(neng)全(quan)部上架(jia)，如(ru)需訂購(gou)或者(zhe)產(chan)品詳(xiang)情請(qing)直(zhi)接(jie)聯(lian)系我司銷售(shou)！

細(xi)胞培(pei)養步驟(zhou)

1) 培(pei)養基(ji)及培(pei)養凍(dong)存條件準(zhun)備(bei)：

1. 準(zhun)備(bei) McCOY's 5A 培(pei)養基(ji)(McCOY's 5A，SIGMA,貨號 M4892，添加 NaHC03 2.2g/L)，90%;you質(zhi)胎(tai)牛血(xue)清，10%。

2. 培(pei)養條件：氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%;碳(tan)，5%。溫(wen)度(du)：37攝氏度(du)，培(pei)養箱濕(shi)度(du)為(wei)70%-80%。

3. 凍(dong)存液：90%培(pei)養基(ji)，10%DMSO,現(xian)用(yong)現(xian)配(pei)。液氮(dan)儲(chu)存。

2) 細(xi)胞處理：

復(fu)蘇細(xi)胞：將(jiang)含有(you) lmL 細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管(guan)在 37°C 水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加 入 4mL 培(pei)養基(ji)混合(he)均勻。在 1000RPM 條件下(xia)離(li)心(xin) 4分(fen)鐘，棄去(qu)上清(qing)液，補 加(jia) l-2mL 培(pei)養基(ji)後吹(chui)勻。然後將(jiang)所有細胞懸(xuan)液加入培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或將(jiang) 細胞懸(xuan)液加入 l〇cm皿中(zhong)，加入約(yue) 8ml 培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜(ye)）。隔天換(huan)液並(bing)檢(jian)查細胞密(mi)度(du)。

細(xi)胞凍(dong)存：

待細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時，可(ke)進行細胞凍(dong)存。貼壁細胞凍(dong)存時(shi)，先要消化處理並(bing)進行細胞計數。消化方法(fa)按照(zhao)細胞傳(chuan)代(dai)方法(fa)步驟(zhou)進行， 重(zhong)懸(xuan)液使用(yong)血(xue)清。懸(xuan)浮細胞直(zhi)接(jie)計數後離(li)心(xin)，用(yong)血(xue)清重(zhong)懸(xuan)浮，加 DMSO 至最(zui)終濃度(du)為(wei)10%。加(jia)入 DMSO 後迅(xun)速混(hun)勻，按每(mei) lml 的(de)數量分(fen)配到(dao)凍(dong)存管(guan)中(zhong)。本公司按每(mei)個凍(dong)存管(guan)細胞數目大於(yu) 1X106個(ge)細胞凍(dong)存。

細(xi)胞接(jie)受後的(de)處理：

1. 收(shou)到(dao)細胞後，請(qing)檢(jian)查是(shi)否漏液，如(ru)果漏液，請(qing)拍(pai)照片發給我(wo)們(men)。

2. 請(qing)先在顯(xian)微(wei)鏡下確認細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)，去(qu)掉封口(kou)膜(mo)並(bing)將(jiang) T25瓶置(zhi)於 37°C 培(pei)養約(yue) 2-3h〇

3. 棄(qi)去(qu) T25瓶中(zhong)的(de)培(pei)養基(ji)，添加 6ml 本公司附帶(dai)的(de)培(pei)養基(ji)。

4. 如(ru)果細(xi)胞長(chang)滿(man)（90%以(yi)上）請(qing)及時(shi)進(jin)行細胞傳(chuan)代(dai)，傳代(dai)培(pei)養用(yong) 6ml 本公司附帶(dai)的(de)培(pei)養基(ji)。

5. 接(jie)到(dao)細胞次(ci)日(ri)，請(qing)檢(jian)查細胞是(shi)否汙染(ran)，若(ruo)發現(xian)汙(wu)染(ran)或疑似汙染(ran)，請(qing)及時(shi)與(yu)我(wo)們(men)取(qu)得(de)聯(lian)系。

人(ren)胰島細胞

培(pei)養方法(fa)：

收(shou)到(dao)細胞後，在倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀察(cha)整(zheng)個(ge)細(xi)胞生(sheng)長(chang)情況：

如(ru)果細(xi)胞未長(chang)滿(man)，用(yong)75%酒(jiu)精(jing)噴(pen)灑(sa)整個(ge)瓶消毒後放到(dao)超菌(jun)臺內(nei)，嚴(yan)格無(wu)菌(jun)操作(zuo)，打(da)開(kai)細(xi)胞培(pei)養瓶，留10ml培(pei)養液繼續培(pei)養。

如(ru)果細(xi)胞已(yi)長(chang)滿(man)（達(da)80-90%）。即(ji)可進行傳代，具體步驟(zhou)如(ru)下(xia)：

a，棄(qi)去(qu)培(pei)養液，用(yong)PBS洗1-2次(ci)。

b，向(xiang)瓶內加(jia)入1.0-2.0ml酶液，在倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀察(cha)細(xi)胞消化情況，若(ruo)細(xi)胞大部分(fen)變(bian)圓，迅(xun)速拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，吸(xi)取(qu)酶(mei)，加(jia)含有(you)6ml 含10%血(xue)清的(de)培(pei)養液，輕輕吹(chui)打細(xi)胞。

c，加(jia)入等量的(de)的(de)培(pei)養液，輕輕吹(chui)打混(hun)勻後吸(xi)出(chu)壹半(ban)，分(fen)到(dao)新的(de)培(pei)養

d，傳(chuan)代比例(li)：1:2-1:3

對(dui)於懸(xuan)浮細胞，傳(chuan)代可參(can)考以(yi)下(xia)方法(fa)：

方法(fa)壹：收(shou)集(ji)細(xi)胞，1000RPM，常(chang)溫條件下(xia)離(li)心(xin) 5分(fen)鐘，棄去(qu)上清(qing)液，補加(jia) l-2mL 培(pei)養液後吹(chui)句，將(jiang)細胞懸(xuan)液按 1: 2到(dao) 1: 5的(de)比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含 8ml 培(pei) 養基(ji)的(de) 新皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

方法(fa)二：可選擇半(ban)數換液方式(shi)，棄(qi)去(qu)半(ban)數培(pei)養基(ji)後，將(jiang)剩余細(xi)胞懸(xuan)起(qi)，將(jiang)細 胞懸(xuan) 液按 1: 2到(dao) 1: 3的(de)比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含 8ml 培(pei)養基(ji)的(de)新皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

操作(zuo)要(yao)點：

1）將(jiang)培(pei)養基(ji)在37℃水(shui)浴鍋預熱；準備(bei)壹個(ge)15mL無(wu)菌(jun)的(de)離(li)心(xin)管(guan)，加入8mL預熱(re)培(pei)養基(ji)。

2）將(jiang)凍(dong)存細(xi)胞從(cong)液氮(dan)罐(guan)中(zhong)取(qu)出(chu)，快速(su)放(fang)入37℃水(shui)浴鍋中(zhong)復溫（可準備(bei)壹潔(jie)凈(jing)的(de)燒杯，裝(zhuang)滿(man)37℃的(de)水(shui)，細胞凍(dong)存管(guan)取(qu)出(chu)後迅(xun)速放(fang)入燒杯內(nei)，再逐步轉(zhuan)移(yi)到(dao)水(shui)浴鍋中(zhong)）。輕輕晃動(dong)凍(dong)存管(guan)，使細胞能(neng)在(zai)1~2min內(nei)解(jie)凍(dong)，使細(xi)胞能(neng)盡(jin)快通(tong)過易(yi)受損的(de)溫度(du)段（-5~0℃）。註意(yi)凍(dong)存管(guan)管(guan)口(kou)不能(neng)沒(mei)入水(shui)中(zhong)，避免引(yin)起汙染(ran)。

3）用(yong)75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)凍(dong)存管(guan)後再置於超(chao)凈(jing)臺(tai)內，將(jiang)管(guan)內細胞轉(zhuan)移(yi)至準備(bei)好(hao)的(de)離(li)心(xin)管(guan)內，輕輕吹(chui)打液體，使(shi)細(xi)胞均勻分(fen)散(san)，吹(chui)打時(shi)避免產(chan)生(sheng)氣泡(pao)。用(yong)新鮮(xian)培(pei)養基(ji)洗管(guan)壁2次(ci)，均轉(zhuan)移(yi)至離(li)心(xin)管(guan)內。

4）800rpm離(li)心(xin)5min，棄(qi)上清(qing)，加(jia)入新鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)，吹(chui)打制(zhi)成(cheng)細胞懸(xuan)液。

5）將(jiang)細胞懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至T25細胞瓶(ping)內(nei)，補加(jia)適(shi)量的(de)培(pei)養基(ji)，輕輕晃動(dong)細胞瓶(ping)使(shi)細胞分(fen)布均勻，放入溫箱內(nei)培(pei)養。

6）隔(ge)天觀(guan)察(cha)細(xi)胞貼壁生長(chang)情況，換(huan)新(xin)鮮(xian)培(pei)養基(ji)以去(qu)除死(si)細(xi)胞。繼(ji)續培(pei)養，待細胞長(chang)至80~90%匯(hui)合(he)時正常(chang)傳代。壹般(ban)剛復(fu)蘇的(de)細胞需經過2~3次(ci)傳代(dai)，細(xi)胞活(huo)力(li)恢復(fu)後才(cai)能(neng)進(jin)行後續的(de)實驗(yan)。

友(you)情提示(shi)註意(yi)以(yi)下(xia)幾(ji)點：

1、收(shou)到(dao)細胞後請(qing)盡(jin)快更(geng)換為(wei)含(han)15%血(xue)清的(de)新鮮(xian)培(pei)養基(ji)，如(ru)因(yin)特(te)殊情況需要(yao)繼(ji)續使(shi)用(yong)原瓶(ping)，請(qing)在(zai)原(yuan)瓶(ping)培(pei)養基(ji)中(zhong)額(e)外添加10%的(de)血(xue)清

2、貼壁細胞收(shou)到(dao)當(dang)天切(qie)忌立(li)刻消化，請(qing)將(jiang)細胞換(huan)液後放置培(pei)養箱孵(fu)育(yu)到(dao)隔天再(zai)做(zuo)消化傳(chuan)代，請(qing)優(you)先選擇直徑6cm的(de)培(pei)養皿進(jin)行傳代培(pei)養

3、如(ru)簽(qian)收(shou)時(shi)出(chu)現(xian)培(pei)養瓶壁(bi)破(po)裂(lie)，漏液等情況請(qing)及時(shi)做(zuo)好(hao)照片(pian)記錄(lu)並(bing)聯系實驗室

細(xi)胞用(yong)途(tu)：僅(jin)供科(ke)研使用(yong)。