人(ren)脂(zhi)肪(fang)間充質幹細(xi)胞

人(ren)脂肪間(jian)充質幹細(xi)胞

我(wo)司產(chan)品齊全，因上(shang)架(jia)數量(liang)有限，未能全部上(shang)架(jia)，如需(xu)訂(ding)購(gou)或者(zhe)產(chan)品詳情請直(zhi)接(jie)聯系(xi)我(wo)司銷售！

細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)步(bu)驟

1) 培(pei)養(yang)基(ji)及(ji)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)條(tiao)件(jian)準(zhun)備：

1. 準(zhun)備(bei) McCOY's 5A 培(pei)養(yang)基(ji)(McCOY's 5A，SIGMA,貨號(hao) M4892，添加 NaHC03 2.2g/L)，90%;you質胎牛血(xue)清，10%。

2. 培(pei)養(yang)條件：氣相：空(kong)氣，95%;碳，5%。溫度(du)：37攝氏(shi)度(du)，培(pei)養(yang)箱濕度(du)為(wei)70%-80%。

3. 凍(dong)存(cun)液(ye)：90%培(pei)養(yang)基(ji)，10%DMSO,現(xian)用現(xian)配。液(ye)氮(dan)儲存(cun)。

2) 細(xi)胞(bao)處(chu)理：

復蘇細(xi)胞(bao)：將含有(you) lmL 細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在 37°C 水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia) 入(ru) 4mL 培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻(yun)。在 1000RPM 條件(jian)下離心(xin) 4分鐘，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，補(bu) 加 l-2mL 培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將所有(you)細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜（或將 細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入 l〇cm皿中(zhong)，加入(ru)約 8ml 培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。隔(ge)天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞密度。

細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態良(liang)好時，可進行(xing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)。貼壁細胞(bao)凍(dong)存(cun)時(shi)，先(xian)要(yao)消(xiao)化(hua)處(chu)理並(bing)進(jin)行細(xi)胞計(ji)數。消(xiao)化(hua)方(fang)法按(an)照(zhao)細胞(bao)傳(chuan)代(dai)方法步(bu)驟進(jin)行， 重(zhong)懸液(ye)使(shi)用血(xue)清。懸浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接計(ji)數後(hou)離心(xin)，用血(xue)清重(zhong)懸浮，加(jia) DMSO 至(zhi)最(zui)終濃度(du)為(wei)10%。加入 DMSO 後迅(xun)速(su)混(hun)勻(yun)，按(an)每 lml 的(de)數量(liang)分配到(dao)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)。本公司按(an)每個凍(dong)存(cun)管(guan)細胞數目大於 1X106個細(xi)胞凍(dong)存(cun)。

細(xi)胞(bao)接(jie)受後的(de)處理：

1. 收(shou)到(dao)細胞後，請檢(jian)查是(shi)否(fou)漏(lou)液(ye)，如果(guo)漏液(ye)，請拍照(zhao)片發(fa)給我(wo)們。

2. 請先(xian)在顯微(wei)鏡下確(que)認(ren)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態，去(qu)掉封口膜(mo)並(bing)將 T25瓶(ping)置(zhi)於 37°C 培(pei)養(yang)約 2-3h〇

3. 棄(qi)去(qu) T25瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，添加 6ml 本公司附帶的(de)培(pei)養(yang)基(ji)。

4. 如果(guo)細胞(bao)長滿(man)（90%以上(shang)）請及(ji)時進(jin)行細(xi)胞(bao)傳代，傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)用 6ml 本公司附帶的(de)培(pei)養(yang)基(ji)。

5. 接(jie)到(dao)細胞次日(ri)，請檢(jian)查細(xi)胞是(shi)否(fou)汙(wu)染(ran)，若(ruo)發(fa)現(xian)汙染(ran)或疑(yi)似(si)汙(wu)染(ran)，請及(ji)時與(yu)我(wo)們取(qu)得(de)聯系(xi)。

人(ren)脂(zhi)肪(fang)間充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞

培(pei)養(yang)方法：

收(shou)到(dao)細胞後，在倒(dao)置顯微鏡下觀察(cha)整(zheng)個細(xi)胞生(sheng)長情(qing)況：

如果(guo)細胞(bao)未(wei)長滿(man)，用(yong)75%酒(jiu)精(jing)噴(pen)灑(sa)整(zheng)個瓶(ping)消(xiao)毒(du)後放到(dao)超菌(jun)臺(tai)內，嚴格(ge)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)，打開(kai)細胞培(pei)養(yang)瓶(ping)，留(liu)10ml培(pei)養(yang)液(ye)繼(ji)續培(pei)養(yang)。

如果(guo)細胞(bao)已(yi)長滿(man)（達80-90%）。即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代，具體(ti)步(bu)驟如下：

a，棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong)PBS洗1-2次。

b，向(xiang)瓶(ping)內加入1.0-2.0ml酶液(ye)，在倒(dao)置顯微鏡下觀察(cha)細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分變圓(yuan)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，吸取(qu)酶(mei)，加(jia)含有(you)6ml 含10%血(xue)清的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，輕(qing)輕吹(chui)打細胞。

c，加(jia)入(ru)等量(liang)的(de)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，輕(qing)輕吹(chui)打混勻(yun)後(hou)吸出(chu)壹(yi)半(ban)，分(fen)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)

d，傳(chuan)代(dai)比(bi)例：1:2-1:3

對(dui)於懸浮細(xi)胞(bao)，傳(chuan)代(dai)可參考以下方法：

方(fang)法壹(yi)：收(shou)集細胞，1000RPM，常(chang)溫(wen)條(tiao)件(jian)下離心(xin) 5分鐘，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，補(bu)加 l-2mL 培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)句，將細胞(bao)懸液(ye)按(an) 1: 2到(dao) 1: 5的(de)比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含 8ml 培(pei) 養(yang)基(ji)的(de) 新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

方(fang)法二(er)：可選擇(ze)半(ban)數換(huan)液(ye)方(fang)式，棄(qi)去(qu)半(ban)數培(pei)養(yang)基(ji)後，將剩余細胞懸起，將細 胞(bao)懸 液(ye)按(an) 1: 2到(dao) 1: 3的(de)比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含 8ml 培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

操(cao)作(zuo)要點(dian)：

1）將培(pei)養(yang)基(ji)在37℃水浴(yu)鍋(guo)預熱；準(zhun)備壹(yi)個15mL無(wu)菌(jun)的(de)離心(xin)管(guan)，加入8mL預熱培(pei)養(yang)基(ji)。

2）將凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)從液(ye)氮(dan)罐中(zhong)取(qu)出(chu)，快速(su)放(fang)入(ru)37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)中(zhong)復溫（可準備(bei)壹(yi)潔(jie)凈的(de)燒杯(bei)，裝(zhuang)滿(man)37℃的(de)水，細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)取(qu)出(chu)後(hou)迅(xun)速(su)放(fang)入(ru)燒(shao)杯(bei)內，再逐步(bu)轉(zhuan)移到(dao)水浴(yu)鍋(guo)中(zhong)）。輕輕(qing)晃動(dong)凍(dong)存(cun)管(guan)，使細胞能在1~2min內解凍(dong)，使(shi)細(xi)胞(bao)能盡快通過(guo)易受損(sun)的(de)溫度(du)段(duan)（-5~0℃）。註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)管(guan)口不能沒入水(shui)中(zhong)，避免(mian)引起汙染(ran)。

3）用(yong)75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)凍(dong)存(cun)管(guan)後再置於超凈臺(tai)內，將管(guan)內細胞轉(zhuan)移至(zhi)準(zhun)備(bei)好的(de)離心(xin)管(guan)內，輕輕吹(chui)打液(ye)體(ti)，使細胞(bao)均勻(yun)分(fen)散，吹(chui)打時避免(mian)產(chan)生(sheng)氣泡(pao)。用(yong)新(xin)鮮培(pei)養(yang)基(ji)洗管(guan)壁2次，均轉(zhuan)移至(zhi)離心(xin)管(guan)內。

4）800rpm離心(xin)5min，棄(qi)上清，加(jia)入新(xin)鮮的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，吹(chui)打制成(cheng)細(xi)胞(bao)懸液(ye)。

5）將細胞(bao)懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi)T25細(xi)胞(bao)瓶(ping)內，補加適量(liang)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，輕輕晃動(dong)細胞(bao)瓶(ping)使(shi)細胞分布(bu)均(jun)勻(yun)，放(fang)入溫(wen)箱內培(pei)養(yang)。

6）隔(ge)天(tian)觀(guan)察(cha)細胞(bao)貼壁生(sheng)長情(qing)況，換(huan)新(xin)鮮培(pei)養(yang)基(ji)以去(qu)除死(si)細(xi)胞。繼續培(pei)養(yang)，待細胞長至(zhi)80~90%匯合(he)時正常(chang)傳(chuan)代(dai)。壹(yi)般(ban)剛復蘇的(de)細胞(bao)需(xu)經過(guo)2~3次傳代，細胞(bao)活(huo)力(li)恢復後才(cai)能進行(xing)後(hou)續的(de)實(shi)驗(yan)。

友(you)情(qing)提(ti)示(shi)註意(yi)以下幾點(dian)：

1、收(shou)到(dao)細胞後請盡快更換(huan)為(wei)含15%血(xue)清的(de)新(xin)鮮培(pei)養(yang)基(ji)，如因(yin)特殊(shu)情況需(xu)要繼續(xu)使(shi)用(yong)原(yuan)瓶(ping)，請在原(yuan)瓶(ping)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)額(e)外添加10%的(de)血(xue)清

2、貼壁細胞(bao)收到(dao)當(dang)天(tian)切(qie)忌(ji)立刻消(xiao)化(hua)，請將細胞(bao)換(huan)液(ye)後(hou)放置(zhi)培(pei)養(yang)箱孵育到(dao)隔(ge)天(tian)再做消(xiao)化(hua)傳(chuan)代，請優先選擇(ze)直徑6cm的(de)培(pei)養(yang)皿進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)

3、如簽收時(shi)出(chu)現(xian)培(pei)養(yang)瓶(ping)壁破(po)裂(lie)，漏液(ye)等情況請及(ji)時做好照(zhao)片記錄(lu)並(bing)聯(lian)系(xi)實(shi)驗(yan)室(shi)

細(xi)胞(bao)用(yong)途：僅(jin)供(gong)科研(yan)使用(yong)。