人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞(bao)

人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞(bao)

我司產品齊全(quan)，因上(shang)架(jia)數(shu)量有(you)限(xian)，未(wei)能全(quan)部上(shang)架(jia)，如需訂購或者產品詳(xiang)情請(qing)直(zhi)接聯系(xi)我(wo)司銷售！

細(xi)胞培(pei)養步(bu)驟

1) 培(pei)養基(ji)及(ji)培養凍存(cun)條(tiao)件準(zhun)備(bei)：

1. 準(zhun)備 McCOY's 5A 培(pei)養基(ji)(McCOY's 5A，SIGMA,貨(huo)號(hao) M4892，添(tian)加(jia) NaHC03 2.2g/L)，90%;you質胎(tai)牛血清(qing)，10%。

2. 培(pei)養條(tiao)件：氣相(xiang)：空氣，95%;碳(tan)，5%。溫度：37攝氏度(du)，培(pei)養箱(xiang)濕(shi)度為70%-80%。

3. 凍存(cun)液(ye)：90%培養基(ji)，10%DMSO,現用現配(pei)。液氮(dan)儲存(cun)。

2) 細(xi)胞處(chu)理：

復蘇(su)細(xi)胞(bao)：將(jiang)含(han)有 lmL 細(xi)胞懸(xuan)液的凍存(cun)管在(zai) 37°C 水(shui)浴中迅速搖晃解凍，加(jia) 入 4mL 培養基(ji)混合(he)均勻(yun)。在(zai) 1000RPM 條(tiao)件下(xia)離(li)心 4分鐘，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補(bu) 加(jia) l-2mL 培(pei)養基(ji)後吹勻。然(ran)後將所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入培養瓶中(zhong)培養過(guo)夜（或將(jiang) 細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入 l〇cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約(yue) 8ml 培(pei)養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜）。隔天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度。

細(xi)胞凍存(cun)：

待(dai)細胞(bao)生(sheng)長狀態良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進行細胞凍存(cun)。貼壁(bi)細胞(bao)凍存(cun)時(shi)，先(xian)要(yao)消化(hua)處(chu)理並(bing)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數(shu)。消化(hua)方法(fa)按照(zhao)細胞傳代(dai)方(fang)法步驟進(jin)行， 重(zhong)懸液(ye)使(shi)用血(xue)清。懸(xuan)浮細胞直(zhi)接計數(shu)後離(li)心，用血(xue)清重(zhong)懸浮，加(jia) DMSO 至最終濃度為10%。加(jia)入 DMSO 後迅速混勻(yun)，按(an)每(mei) lml 的數(shu)量分配(pei)到(dao)凍存(cun)管中。本(ben)公司按每(mei)個凍存(cun)管細胞(bao)數(shu)目大(da)於(yu) 1X106個(ge)細(xi)胞凍存(cun)。

細(xi)胞接受(shou)後的處(chu)理：

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後，請(qing)檢(jian)查是(shi)否(fou)漏(lou)液(ye)，如果(guo)漏(lou)液(ye)，請(qing)拍(pai)照片(pian)發給(gei)我們(men)。

2. 請(qing)先在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)確認(ren)細(xi)胞生長(chang)狀態，去掉封(feng)口(kou)膜(mo)並(bing)將(jiang) T25瓶置(zhi)於(yu) 37°C 培(pei)養約(yue) 2-3h〇

3. 棄(qi)去 T25瓶中(zhong)的培養基(ji)，添(tian)加(jia) 6ml 本(ben)公司附帶(dai)的培養基(ji)。

4. 如果(guo)細(xi)胞(bao)長滿(man)（90%以(yi)上(shang)）請(qing)及(ji)時(shi)進(jin)行(xing)細胞(bao)傳代(dai)，傳代(dai)培(pei)養用(yong) 6ml 本(ben)公司附帶(dai)的培養基(ji)。

5. 接到(dao)細胞(bao)次日(ri)，請(qing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)是(shi)否(fou)汙染，若(ruo)發(fa)現汙染或疑似汙染，請(qing)及(ji)時(shi)與我(wo)們(men)取(qu)得聯系(xi)。

人(ren)羊(yang)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞(bao)

培(pei)養方(fang)法(fa)：

收(shou)到(dao)細胞(bao)後，在(zai)倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察整(zheng)個(ge)細(xi)胞(bao)生長情況(kuang)：

如果(guo)細(xi)胞(bao)未長(chang)滿(man)，用(yong)75%酒(jiu)精(jing)噴灑(sa)整(zheng)個(ge)瓶消毒後放到(dao)超(chao)菌(jun)臺(tai)內，嚴(yan)格無(wu)菌(jun)操作(zuo)，打開細(xi)胞(bao)培養瓶，留(liu)10ml培養液(ye)繼(ji)續培養。

如果(guo)細(xi)胞(bao)已長滿(man)（達80-90%）。即(ji)可(ke)進行傳代(dai)，具體(ti)步驟如下(xia)：

a，棄(qi)去培養液(ye)，用(yong)PBS洗(xi)1-2次(ci)。

b，向(xiang)瓶內(nei)加(jia)入1.0-2.0ml酶液(ye)，在(zai)倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓，迅速拿回操作(zuo)臺，吸(xi)取(qu)酶(mei)，加(jia)含(han)有6ml 含(han)10%血清(qing)的培養液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞。

c，加(jia)入等(deng)量(liang)的的培養液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打混勻(yun)後吸(xi)出(chu)壹半(ban)，分到(dao)新(xin)的培養

d，傳代(dai)比例：1:2-1:3

對(dui)於(yu)懸(xuan)浮(fu)細胞，傳代(dai)可(ke)參考以(yi)下(xia)方法(fa)：

方(fang)法壹：收(shou)集(ji)細胞(bao)，1000RPM，常(chang)溫條(tiao)件下(xia)離(li)心 5分鐘，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia) l-2mL 培(pei)養液(ye)後吹句(ju)，將細(xi)胞(bao)懸液按 1: 2到(dao) 1: 5的比例分到(dao)新(xin)的含(han) 8ml 培 養基(ji)的 新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)。 

方(fang)法二(er)：可(ke)選擇半(ban)數(shu)換(huan)液(ye)方式，棄(qi)去半(ban)數(shu)培養基(ji)後，將剩余(yu)細(xi)胞懸(xuan)起(qi)，將(jiang)細 胞(bao)懸 液(ye)按 1: 2到(dao) 1: 3的比例分到(dao)新(xin)的含(han) 8ml 培養基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)。

操作(zuo)要點：

1）將(jiang)培養基(ji)在(zai)37℃水(shui)浴鍋(guo)預(yu)熱；準備(bei)壹個(ge)15mL無菌(jun)的離(li)心管，加(jia)入8mL預(yu)熱培養基(ji)。

2）將(jiang)凍存(cun)細(xi)胞從液(ye)氮(dan)罐中(zhong)取(qu)出(chu)，快(kuai)速(su)放(fang)入37℃水(shui)浴鍋(guo)中(zhong)復溫（可(ke)準備壹潔凈(jing)的燒杯(bei)，裝(zhuang)滿(man)37℃的水(shui)，細胞凍存(cun)管取出(chu)後迅速放入燒杯(bei)內，再逐步轉(zhuan)移到(dao)水(shui)浴鍋(guo)中(zhong)）。輕(qing)輕(qing)晃(huang)動凍存(cun)管，使(shi)細胞(bao)能在(zai)1~2min內(nei)解凍，使(shi)細胞(bao)能盡(jin)快(kuai)通(tong)過(guo)易(yi)受(shou)損(sun)的溫度段(duan)（-5~0℃）。註意(yi)凍存(cun)管管口不能沒入水(shui)中，避(bi)免(mian)引起(qi)汙染。

3）用(yong)75%酒(jiu)精(jing)擦拭凍存(cun)管後再置(zhi)於(yu)超(chao)凈臺(tai)內，將管內細(xi)胞(bao)轉移至準備好(hao)的離(li)心管內，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打液體(ti)，使(shi)細胞(bao)均勻(yun)分散(san)，吹(chui)打(da)時(shi)避(bi)免(mian)產生(sheng)氣泡(pao)。用新(xin)鮮培(pei)養基(ji)洗(xi)管壁(bi)2次，均轉(zhuan)移至離(li)心管內。

4）800rpm離(li)心5min，棄(qi)上(shang)清(qing)，加(jia)入新(xin)鮮的培養基(ji)，吹(chui)打制(zhi)成細胞懸液(ye)。

5）將(jiang)細胞(bao)懸液轉(zhuan)移至T25細胞瓶內(nei)，補加(jia)適(shi)量的培養基(ji)，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動細(xi)胞瓶使(shi)細胞(bao)分布均勻(yun)，放入溫箱(xiang)內培養。

6）隔天(tian)觀察細胞(bao)貼壁(bi)生長(chang)情況(kuang)，換(huan)新(xin)鮮培(pei)養基(ji)以(yi)去除(chu)死(si)細胞(bao)。繼續培養，待(dai)細胞(bao)長(chang)至80~90%匯(hui)合(he)時(shi)正(zheng)常傳代(dai)。壹般(ban)剛(gang)復蘇(su)的細胞(bao)需經過(guo)2~3次(ci)傳代(dai)，細(xi)胞活力恢復後才能進(jin)行後續的實驗(yan)。

友情提示註意(yi)以(yi)下(xia)幾(ji)點：

1、收(shou)到(dao)細胞(bao)後請(qing)盡(jin)快(kuai)更(geng)換(huan)為(wei)含(han)15%血(xue)清的新(xin)鮮培(pei)養基(ji)，如因特殊情況(kuang)需要繼(ji)續使(shi)用原瓶，請(qing)在(zai)原瓶培(pei)養基(ji)中(zhong)額外(wai)添(tian)加(jia)10%的血清(qing)

2、貼壁(bi)細胞(bao)收(shou)到(dao)當天(tian)切(qie)忌立(li)刻消化(hua)，請(qing)將細胞換(huan)液(ye)後放置(zhi)培(pei)養箱(xiang)孵育到(dao)隔天(tian)再(zai)做(zuo)消化(hua)傳代(dai)，請(qing)優先選擇直(zhi)徑6cm的培養皿(min)進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養

3、如簽(qian)收(shou)時(shi)出(chu)現培養瓶壁(bi)破(po)裂(lie)，漏(lou)液(ye)等(deng)情況(kuang)請(qing)及(ji)時(shi)做(zuo)好(hao)照片(pian)記錄並(bing)聯(lian)系(xi)實(shi)驗(yan)室

細(xi)胞用(yong)途：僅(jin)供(gong)科(ke)研使(shi)用。