兔子皮質酮(tong)/腎上腺(xian)酮(tong)(CORT)ELISA試劑盒

兔(tu)子皮質酮(tong)/腎上腺(xian)酮(tong)(CORT)ELISA試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中(zhong)的壹項新技(ji)術，現已(yi)成(cheng)功地應用(yong)於多種病原(yuan)微(wei)生(sheng)物(wu)所(suo)引(yin)起(qi)的傳(chuan)染病、寄(ji)生(sheng)蟲(chong)病及(ji)非傳(chuan)染病等方面的免疫診斷。也(ye)已應用(yong)於大分子抗原(yuan)和(he)小分子抗原(yuan)的定量測(ce)定，根據已(yi)經使(shi)用(yong)的結(jie)果(guo)，認(ren)為(wei)ELISA法具(ju)有靈(ling)敏、特異(yi)、簡(jian)單(dan)、快(kuai)速、穩定及(ji)易(yi)於自(zi)動(dong)化(hua)操作等特點(dian)。不僅(jin)適(shi)用(yong)於臨床標本(ben)的檢查(zha)，而且由於壹(yi)天(tian)之(zhi)內(nei)可(ke)以(yi)檢查(zha)幾(ji)百甚(shen)至(zhi)上(shang)千(qian)份(fen)標本(ben),因此，也適(shi)合(he)於(yu)血(xue)清流(liu)行(xing)病學調(tiao)查(zha)。本(ben)法不僅(jin)可(ke)以(yi)用(yong)來測定抗ti，而且也可用(yong)於測定體液中的循環(huan)抗原(yuan)，所(suo)以(yi)也(ye)是(shi)壹(yi)種(zhong)早(zao)期(qi)診斷的良好方(fang)法。因此(ci)ELISA法在生(sheng)物(wu)醫學各領(ling)域的應用(yong)範圍(wei)日益(yi)擴(kuo)大，

組成(cheng)結(jie)構

1、血(xue)清：操作過程(cheng)中避(bi)免任何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)。使(shi)用(yong)不含(han)熱原(yuan)和(he)內(nei)du素(su)的試管。收集血(xue)液後，1000×g離(li)心(xin)10分鐘將(jiang)血(xue)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速小(xiao)心地分(fen)離(li)。

2、2、血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬suan鹽(yan)、肝(gan)素(su)血(xue)漿(jiang)可(ke)用(yong)於檢測(ce)。1000×g離(li)心(xin)30分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆粒。

3、細(xi)胞(bao)上(shang)清液：1000×g離心(xin)10分(fen)鐘去除顆粒和(he)聚合(he)物。

4、組織(zhi)勻(yun)漿：將組織(zhi)加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理鹽(yan)水搗碎(sui)。1000×g離(li)心10分鐘，取(qu)上(shang)清液。

5、保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣品(pin)不立(li)即(ji)使(shi)用(yong)，應將(jiang)其(qi)分(fen)成小(xiao)部(bu)分-70℃保(bao)存(cun)，避(bi)免反復冷(leng)凍(dong)。盡(jin)可(ke)能的不要(yao)使(shi)用(yong)溶血(xue)。如(ru)果(guo)血(xue)清中大(da)量(liang)顆粒，檢測(ce)前(qian)先離(li)心或過濾。不(bu)要在37℃或更高的溫度加(jia)熱解(jie)凍(dong)。應在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地充分解(jie)凍(dong)。

兔子皮質酮(tong)/腎上腺(xian)酮(tong)(CORT)ELISA試劑盒

操作步(bu)驟(zhou)：

1、使(shi)用(yong)前(qian)，將所(suo)有(you)試劑充分混(hun)勻(yun)。不要使(shi)液體產(chan)生(sheng)大(da)量的泡沫，以(yi)免加(jia)樣(yang)時(shi)加(jia)入(ru)大(da)量(liang)的氣(qi)泡，產(chan)生(sheng)加(jia)樣(yang)上(shang)的誤差(cha)。

2、根據待測樣(yang)品(pin)數(shu)量加(jia)上(shang)標準(zhun)品(pin)的數(shu)量決(jue)定所(suo)需(xu)的板條(tiao)數(shu)。每(mei)個(ge)標準(zhun)品(pin)和空白(bai)孔建議做(zuo)復孔(kong)。每(mei)個(ge)樣品(pin)根(gen)據自(zi)己(ji)的數(shu)量來(lai)定，能使(shi)用(yong)復孔的盡(jin)量(liang)做(zuo)復孔(kong)。

3、加(jia)入(ru)稀釋好後(hou)的標準(zhun)品(pin)50ul於反(fan)應孔(kong)、加(jia)入(ru)待測樣(yang)品(pin)50ul於反應孔(kong)內(nei)。立(li)即(ji)加(jia)入(ru)50ul標記(ji)的抗體。蓋(gai)上(shang)膜板(ban)，輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育45分鐘。

4、甩去孔內(nei)液體，每(mei)孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌液，振蕩(dang)30秒，甩去洗(xi)滌液，用(yong)吸(xi)水紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復(fu)此(ci)操作4次(ci)。如果(guo)用(yong)洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌，洗(xi)滌次(ci)數(shu)增加(jia)壹(yi)次(ci)。

5、每(mei)孔加(jia)入(ru)100ul的親和(he)鏈酶(mei)素-HRP，輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育30分鐘。

6、甩去孔內(nei)液體，每(mei)孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌液，振蕩(dang)30秒，甩去洗(xi)滌液，用(yong)吸(xi)水紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復(fu)此(ci)操作4次(ci)。如果(guo)用(yong)洗(xi)板(ban)機洗(xi)滌，洗(xi)滌次(ci)數(shu)增加(jia)壹(yi)次(ci)。

7、每(mei)孔加(jia)入(ru)底(di)物(wu)A、B各(ge)50ul，輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫育5分鐘。避(bi)免光照。

8、取出酶(mei)標板，迅速加(jia)入(ru)50ul終止液，加(jia)入(ru)終止液後應立(li)即(ji)測(ce)定結(jie)果(guo)。

9、在450nm波(bo)長處(chu)測(ce)定各孔(kong)的OD值。

操作註(zhu)意事(shi)項：

1、試劑應按標簽說明書儲存(cun)，使(shi)用(yong)前(qian)恢復到(dao)室(shi)溫。稀稀過後(hou)的標準(zhun)品(pin)應丟(diu)棄，不(bu)可(ke)保(bao)存(cun)

2、實(shi)驗(yan)中(zhong)不(bu)用(yong)的板條(tiao)應立(li)即(ji)放(fang)回包(bao)裝(zhuang)袋中(zhong)，密封(feng)保(bao)存(cun)，以(yi)免變質。

3、不用(yong)的其(qi)它(ta)試劑應包(bao)裝(zhuang)好或蓋(gai)好。不(bu)同(tong)批號的試劑不要(yao)混(hun)用(yong)。保(bao)質前(qian)使(shi)用(yong)。

4、使(shi)用(yong)壹次(ci)性(xing)的吸(xi)頭(tou)以(yi)免交叉(cha)汙(wu)染，吸(xi)取(qu)終止液和底(di)物(wu)A、B液時，避(bi)免使(shi)用(yong)帶金屬部(bu)分的加(jia)樣(yang)器。

5、使(shi)用(yong)幹凈(jing)的塑(su)料(liao)容(rong)器配置(zhi)洗(xi)滌液。使(shi)用(yong)前(qian)充分混(hun)勻(yun)試劑盒裏(li)的各種(zhong)成份(fen)及(ji)樣品。

6、底(di)物(wu)A應揮(hui)發(fa)，避(bi)免長時間(jian)打(da)開蓋(gai)子。底(di)物(wu)B對(dui)光(guang)敏感(gan)，避(bi)免長時間(jian)暴(bao)露於(yu)光下(xia)。避(bi)免用(yong)手接觸(chu)，有(you)毒(du)。實(shi)驗(yan)完成後應立(li)即(ji)讀(du)取(qu)OD值(zhi)。

7、加(jia)入(ru)試劑的順序應壹(yi)致(zhi)，以(yi)保(bao)證(zheng)所(suo)有(you)反應板(ban)孔(kong)溫育的時間(jian)壹樣(yang)。按照(zhao)說明書中標明的時間(jian)、加(jia)液的量及(ji)順序進(jin)行(xing)溫育操作。

壹般來講(jiang)，96T能檢測(ce)90個(ge)樣本(ben)，48T能檢測(ce)42個(ge)樣本(ben)，這裏(li)面(mian)需要(yao)用(yong)標樣來做(zuo)標準(zhun)曲線(xian)，所(suo)以(yi)各(ge)位需(xu)要(yao)做(zuo)實(shi)驗(yan)的老師(shi)們，請在(zai)購(gou)買(mai)ELISA試劑盒的時候註(zhu)意，需(xu)要(yao)做(zuo)多少(shao)個(ge)樣本(ben)，在決定買多(duo)大規(gui)格的試劑盒，以(yi)免做(zuo)實(shi)驗(yan)時(shi)出(chu)現試劑盒不夠(gou)用(yong)或者浪費！

原(yuan)理：將特異(yi)性(xing)抗體包(bao)被於固相(xiang)載體表面，經洗(xi)滌後分成兩(liang)組：壹(yi)組加(jia)酶(mei)標記(ji)抗原(yuan)和(he)被測抗原(yuan)的混(hun)合(he)液，另壹(yi)組只(zhi)加(jia)酶(mei)標記(ji)抗原(yuan)，經孵(fu)育洗(xi)滌後加(jia)底(di)物(wu)顯(xian)色(se)，這兩(liang)組底(di)物(wu)降(jiang)解量(liang)之(zhi)差(cha)，即(ji)為(wei)所(suo)要(yao)測定的未知(zhi)抗原(yuan)的量。

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