兔血清總(zong)補體(CH50)ELISA試劑盒

兔血(xue)清總(zong)補體(CH50)ELISA試劑盒

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ELISA法(fa)是(shi)免(mian)疫(yi)診(zhen)斷中(zhong)的(de)壹(yi)項(xiang)新技(ji)術(shu)，現(xian)已(yi)成(cheng)功(gong)地(di)應(ying)用於(yu)多種(zhong)病(bing)原(yuan)微生物所引(yin)起(qi)的(de)傳染病(bing)、寄生蟲(chong)病(bing)及非傳染病(bing)等(deng)方(fang)面(mian)的免(mian)疫(yi)診(zhen)斷。也(ye)已(yi)應用於(yu)大分子抗(kang)原(yuan)和小(xiao)分子抗(kang)原(yuan)的定(ding)量(liang)測定(ding)，根(gen)據(ju)已(yi)經(jing)使(shi)用的(de)結(jie)果，認為ELISA法(fa)具(ju)有靈敏(min)、特(te)異、簡單(dan)、快速、穩(wen)定(ding)及易(yi)於(yu)自(zi)動化(hua)操(cao)作(zuo)等(deng)特(te)點(dian)。不僅(jin)適用於(yu)臨(lin)床(chuang)標本的檢查(zha)，而(er)且由於壹天之(zhi)內可(ke)以(yi)檢查(zha)幾(ji)百甚(shen)至(zhi)上(shang)千(qian)份標本,因(yin)此，也(ye)適合於血(xue)清流行病學(xue)調(tiao)查(zha)。本法不僅(jin)可(ke)以(yi)用來(lai)測定(ding)抗(kang)ti，而(er)且(qie)也(ye)可(ke)用於(yu)測定(ding)體液(ye)中(zhong)的循(xun)環抗原(yuan)，所以(yi)也(ye)是(shi)壹(yi)種早(zao)期診斷的(de)良(liang)好(hao)方法。因(yin)此ELISA法(fa)在生物醫學(xue)各(ge)領(ling)域的(de)應(ying)用範(fan)圍(wei)日(ri)益(yi)擴大，

組(zu)成(cheng)結(jie)構(gou)

1、血(xue)清：操(cao)作(zuo)過程(cheng)中(zhong)避免(mian)任何細(xi)胞(bao)刺(ci)激。使(shi)用不含(han)熱原(yuan)和內du素(su)的試管。收(shou)集血(xue)液(ye)後(hou)，1000×g離(li)心(xin)10分鐘(zhong)將血(xue)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速小(xiao)心地(di)分離(li)。

2、2、血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)suan鹽、肝素(su)血漿(jiang)可(ke)用於(yu)檢測。1000×g離(li)心(xin)30分鐘(zhong)去除顆(ke)粒。

3、細(xi)胞(bao)上(shang)清液(ye)：1000×g離(li)心(xin)10分鐘(zhong)去除顆(ke)粒和聚(ju)合物。

4、組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加入(ru)適量(liang)生理(li)鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。1000×g離(li)心(xin)10分鐘(zhong)，取上(shang)清液(ye)。

5、保(bao)存(cun)：如(ru)果樣(yang)品不立即(ji)使用，應(ying)將(jiang)其(qi)分成(cheng)小(xiao)部分-70℃保(bao)存(cun)，避免(mian)反復冷凍。盡(jin)可(ke)能(neng)的不要(yao)使(shi)用溶(rong)血(xue)。如(ru)果血(xue)清中(zhong)大量(liang)顆(ke)粒，檢測前先離(li)心(xin)或(huo)過濾。不要(yao)在37℃或(huo)更高(gao)的(de)溫(wen)度(du)加熱解凍。應(ying)在室溫(wen)下(xia)解凍並(bing)確保(bao)樣(yang)品均勻地(di)充(chong)分解凍。

兔(tu)血(xue)清總(zong)補體(CH50)ELISA試劑盒

操作(zuo)步驟：

1、使用前(qian)，將(jiang)所(suo)有試劑充(chong)分混勻。不要(yao)使(shi)液(ye)體產(chan)生大量(liang)的(de)泡沫，以(yi)免(mian)加樣(yang)時(shi)加入(ru)大量(liang)的(de)氣(qi)泡，產(chan)生加樣(yang)上(shang)的(de)誤差(cha)。

2、根據(ju)待(dai)測樣(yang)品數(shu)量(liang)加上(shang)標(biao)準(zhun)品的(de)數(shu)量(liang)決(jue)定(ding)所(suo)需(xu)的板(ban)條數(shu)。每個(ge)標(biao)準(zhun)品和(he)空(kong)白(bai)孔(kong)建(jian)議(yi)做(zuo)復孔。每個(ge)樣(yang)品根據自(zi)己的(de)數(shu)量(liang)來(lai)定(ding)，能(neng)使(shi)用復孔的盡量(liang)做(zuo)復孔。

3、加入(ru)稀釋好(hao)後的標準(zhun)品50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔、加入(ru)待(dai)測樣(yang)品50ul於反應(ying)孔(kong)內。立即(ji)加入(ru)50ul標記的(de)抗體。蓋(gai)上(shang)膜(mo)板(ban)，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻，37℃溫(wen)育(yu)45分鐘(zhong)。

4、甩(shuai)去孔(kong)內液(ye)體，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，振蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液(ye)，用吸水紙拍幹(gan)。重(zhong)復此操作(zuo)4次。如果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增加壹(yi)次。

5、每孔(kong)加入(ru)100ul的親和(he)鏈酶(mei)素(su)-HRP，輕輕(qing)振蕩混(hun)勻，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。

6、甩(shuai)去孔(kong)內液(ye)體，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，振蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液(ye)，用吸水紙拍幹(gan)。重(zhong)復此操作(zuo)4次。如果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增加壹(yi)次。

7、每孔(kong)加入(ru)底物A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻，37℃溫(wen)育(yu)5分鐘(zhong)。避免(mian)光照。

8、取出(chu)酶(mei)標(biao)板(ban)，迅速加入(ru)50ul終止(zhi)液(ye)，加入(ru)終止(zhi)液(ye)後(hou)應(ying)立即(ji)測定(ding)結(jie)果。

9、在450nm波(bo)長處測定(ding)各(ge)孔(kong)的(de)OD值。

操作(zuo)註意事項(xiang)：

1、試劑應(ying)按(an)標簽說(shuo)明書儲(chu)存(cun)，使(shi)用前(qian)恢(hui)復到室溫(wen)。稀稀過後的標(biao)準(zhun)品應(ying)丟(diu)棄(qi)，不可(ke)保(bao)存(cun)

2、實驗(yan)中不用的(de)板(ban)條應(ying)立即(ji)放(fang)回(hui)包裝袋(dai)中，密(mi)封保(bao)存(cun)，以(yi)免(mian)變(bian)質。

3、不用的(de)其(qi)它(ta)試劑應(ying)包(bao)裝好(hao)或(huo)蓋(gai)好(hao)。不同(tong)批(pi)號(hao)的(de)試劑不要(yao)混(hun)用。保(bao)質前使用。

4、使用壹(yi)次(ci)性(xing)的吸頭以(yi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)，吸取終(zhong)止(zhi)液(ye)和(he)底(di)物A、B液時(shi)，避免(mian)使用帶(dai)金(jin)屬部分的加樣(yang)器(qi)。

5、使用幹(gan)凈(jing)的(de)塑料(liao)容(rong)器(qi)配(pei)置(zhi)洗(xi)滌(di)液(ye)。使(shi)用前(qian)充(chong)分混勻試劑盒裏的各(ge)種(zhong)成(cheng)份(fen)及樣(yang)品。

6、底物A應揮(hui)發(fa)，避免(mian)長時(shi)間打開蓋(gai)子。底(di)物B對光敏感，避免(mian)長時(shi)間暴露(lu)於光下(xia)。避免(mian)用手接觸(chu)，有毒(du)。實驗(yan)完成(cheng)後(hou)應(ying)立即(ji)讀取(qu)OD值。

7、加入(ru)試劑的(de)順序(xu)應壹(yi)致(zhi)，以(yi)保(bao)證所(suo)有(you)反應(ying)板(ban)孔(kong)溫(wen)育(yu)的時(shi)間壹樣(yang)。按(an)照說(shuo)明書中(zhong)標(biao)明的時(shi)間、加液(ye)的量(liang)及順序(xu)進行(xing)溫(wen)育(yu)操作(zuo)。

壹般來(lai)講(jiang)，96T能檢測90個(ge)樣(yang)本，48T能檢測42個(ge)樣(yang)本，這(zhe)裏面(mian)需(xu)要(yao)用標(biao)樣(yang)來(lai)做(zuo)標準(zhun)曲線(xian)，所(suo)以(yi)各(ge)位(wei)需(xu)要(yao)做(zuo)實驗(yan)的老(lao)師(shi)們，請在購買ELISA試劑盒的時(shi)候註意，需(xu)要(yao)做(zuo)多少(shao)個(ge)樣(yang)本，在決定(ding)買多大規格的試劑盒，以免(mian)做(zuo)實驗(yan)時(shi)出(chu)現(xian)試劑盒不夠(gou)用或(huo)者浪(lang)費！

原(yuan)理：將(jiang)特異(yi)性(xing)抗體包(bao)被於固(gu)相(xiang)載(zai)體表(biao)面(mian)，經(jing)洗(xi)滌(di)後(hou)分成(cheng)兩組(zu)：壹組(zu)加酶(mei)標(biao)記(ji)抗(kang)原(yuan)和被測抗原(yuan)的混(hun)合液(ye)，另壹組(zu)只(zhi)加酶(mei)標(biao)記(ji)抗(kang)原(yuan)，經(jing)孵育(yu)洗(xi)滌(di)後(hou)加底(di)物顯(xian)色，這(zhe)兩組(zu)底物降解量(liang)之(zhi)差(cha)，即(ji)為所(suo)要(yao)測定(ding)的(de)未知(zhi)抗(kang)原(yuan)的量(liang)。

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大豆β-乳(ru)球(qiu)蛋白(β-LG)elisa檢測試劑盒

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