土壤(rang)總(zong)蛋白(bai)酶(t-Pro)elisa檢(jian)測試(shi)劑盒

土壤(rang)總(zong)蛋白(bai)酶(t-Pro)elisa檢(jian)測試(shi)劑盒

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ELISA法(fa)是免(mian)疫診斷(duan)中的(de)壹項新技(ji)術(shu)，現已成功地(di)應(ying)用(yong)於多種(zhong)病(bing)原(yuan)微(wei)生(sheng)物(wu)所(suo)引(yin)起的傳染病(bing)、寄(ji)生(sheng)蟲(chong)病及(ji)非(fei)傳染病等(deng)方(fang)面的免疫診斷(duan)。也已應(ying)用(yong)於大分(fen)子(zi)抗(kang)原(yuan)和小分子抗(kang)原(yuan)的定量測定，根(gen)據已經使用的(de)結(jie)果，認為ELISA法(fa)具(ju)有靈敏(min)、特異、簡(jian)單、快(kuai)速、穩(wen)定及(ji)易於自(zi)動化操作等特(te)點。不(bu)僅適用(yong)於臨(lin)床標本的(de)檢(jian)查(zha)，而(er)且(qie)由於壹天(tian)之內可(ke)以檢(jian)查(zha)幾(ji)百甚(shen)至上千份標本,因(yin)此(ci)，也適合於血(xue)清(qing)流行(xing)病(bing)學調查(zha)。本(ben)法不(bu)僅可(ke)以用(yong)來測定抗(kang)ti，而(er)且(qie)也可(ke)用於測定體(ti)液(ye)中(zhong)的循環抗(kang)原(yuan)，所(suo)以(yi)也是壹(yi)種早(zao)期(qi)診斷(duan)的良(liang)好(hao)方法(fa)。因此ELISA法(fa)在(zai)生(sheng)物(wu)醫(yi)學(xue)各領(ling)域的(de)應(ying)用(yong)範(fan)圍(wei)日(ri)益擴大，

組成(cheng)結(jie)構(gou)

1、血(xue)清(qing)：操(cao)作過程中避免任何(he)細胞(bao)刺激(ji)。使用不(bu)含熱(re)原(yuan)和內du素(su)的試管。收集血(xue)液(ye)後，1000×g離(li)心(xin)10分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)紅細(xi)胞(bao)迅(xun)速小心地(di)分離(li)。

2、2、血(xue)漿：EDTA、檸檬(meng)suan鹽(yan)、肝素(su)血漿可(ke)用於檢(jian)測。1000×g離(li)心(xin)30分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒。

3、細(xi)胞(bao)上清液：1000×g離(li)心10分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒和聚合物。

4、組織(zhi)勻(yun)漿：將組織(zhi)加入適量生(sheng)理鹽(yan)水搗(dao)碎。1000×g離心(xin)10分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)液。

5、保存：如果樣(yang)品(pin)不(bu)立(li)即使用，應(ying)將(jiang)其(qi)分(fen)成(cheng)小部分-70℃保存，避免(mian)反(fan)復(fu)冷(leng)凍(dong)。盡可(ke)能(neng)的不(bu)要使用溶(rong)血(xue)。如果血(xue)清(qing)中(zhong)大量顆粒，檢(jian)測前(qian)先(xian)離心或(huo)過濾。不(bu)要在(zai)37℃或(huo)更(geng)高(gao)的(de)溫度加熱解(jie)凍(dong)。應(ying)在(zai)室溫下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確保樣(yang)品(pin)均勻地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。

土壤(rang)總(zong)蛋白(bai)酶(t-Pro)elisa檢(jian)測試(shi)劑盒

操(cao)作步驟(zhou)：

1、使用前(qian)，將(jiang)所(suo)有試劑充分(fen)混勻(yun)。不(bu)要使液體(ti)產(chan)生(sheng)大量的泡沫，以(yi)免(mian)加樣(yang)時(shi)加入大量的氣(qi)泡，產生(sheng)加樣(yang)上(shang)的(de)誤差。

2、根(gen)據待(dai)測樣(yang)品(pin)數量加上標準品(pin)的(de)數量決定所(suo)需的板條(tiao)數。每(mei)個(ge)標準品(pin)和空白(bai)孔建議(yi)做復(fu)孔。每(mei)個(ge)樣(yang)品(pin)根(gen)據自(zi)己(ji)的數量來定，能(neng)使用復(fu)孔的(de)盡(jin)量做復(fu)孔。

3、加入稀(xi)釋(shi)好(hao)後的(de)標準品(pin)50ul於反應(ying)孔、加入待(dai)測樣(yang)品(pin)50ul於反應(ying)孔內。立(li)即加入50ul標記的(de)抗(kang)體(ti)。蓋(gai)上(shang)膜板，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫育(yu)45分鐘(zhong)。

4、甩(shuai)去(qu)孔內液(ye)體(ti)，每(mei)孔加滿洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液，用吸(xi)水紙拍幹(gan)。重復(fu)此(ci)操(cao)作4次。如果用(yong)洗(xi)板機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數增(zeng)加壹次。

5、每(mei)孔加入100ul的(de)親(qin)和鏈(lian)酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。

6、甩(shuai)去(qu)孔內液(ye)體(ti)，每(mei)孔加滿洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液，用吸(xi)水紙拍幹(gan)。重復(fu)此(ci)操(cao)作4次。如果用(yong)洗(xi)板機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數增(zeng)加壹次。

7、每(mei)孔加入底(di)物(wu)A、B各50ul，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫育(yu)5分鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光(guang)照。

8、取(qu)出(chu)酶標板，迅(xun)速加入50ul終止液，加入終止液後應(ying)立(li)即測定結(jie)果。

9、在(zai)450nm波長處測定各孔的(de)OD值(zhi)。

操(cao)作註意(yi)事項(xiang)：

1、試(shi)劑應(ying)按標簽說明書儲(chu)存，使用前(qian)恢(hui)復(fu)到(dao)室溫。稀(xi)稀(xi)過後的(de)標準品(pin)應(ying)丟(diu)棄(qi)，不(bu)可(ke)保存

2、實驗中(zhong)不(bu)用(yong)的板(ban)條(tiao)應(ying)立(li)即放回包(bao)裝袋中，密(mi)封(feng)保存，以免(mian)變(bian)質。

3、不(bu)用(yong)的其(qi)它(ta)試(shi)劑應(ying)包(bao)裝好(hao)或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)的試劑不(bu)要混(hun)用。保質前(qian)使用。

4、使用壹(yi)次性(xing)的(de)吸(xi)頭以免交叉汙染(ran)，吸(xi)取終止液和底物(wu)A、B液(ye)時(shi)，避(bi)免(mian)使用帶金(jin)屬(shu)部分的加樣(yang)器(qi)。

5、使用幹(gan)凈的(de)塑料(liao)容(rong)器(qi)配(pei)置(zhi)洗(xi)滌(di)液。使用前(qian)充(chong)分混勻(yun)試劑盒裏(li)的各種(zhong)成(cheng)份及(ji)樣(yang)品(pin)。

6、底(di)物(wu)A應(ying)揮(hui)發(fa)，避免(mian)長(chang)時(shi)間打(da)開蓋(gai)子(zi)。底物B對(dui)光(guang)敏感(gan)，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間暴(bao)露於光(guang)下(xia)。避免(mian)用手接(jie)觸，有毒(du)。實驗完(wan)成(cheng)後應(ying)立(li)即讀取(qu)OD值。

7、加入試(shi)劑的順序應(ying)壹(yi)致(zhi)，以(yi)保證所(suo)有反應(ying)板(ban)孔溫育(yu)的時(shi)間壹(yi)樣(yang)。按照說明書中標明的(de)時(shi)間、加液的(de)量及順序進(jin)行(xing)溫育(yu)操作。

壹(yi)般來(lai)講(jiang)，96T能(neng)檢(jian)測90個(ge)樣(yang)本(ben)，48T能(neng)檢(jian)測42個(ge)樣(yang)本(ben)，這裏(li)面需要用(yong)標樣(yang)來(lai)做(zuo)標準曲(qu)線，所(suo)以(yi)各位需要做(zuo)實驗的(de)老師(shi)們，請(qing)在(zai)購買ELISA試(shi)劑盒的(de)時(shi)候註意(yi)，需要做(zuo)多少(shao)個(ge)樣(yang)本(ben)，在(zai)決定買多大規(gui)格(ge)的(de)試(shi)劑盒，以(yi)免做(zuo)實驗時(shi)出(chu)現試劑盒不(bu)夠(gou)用或(huo)者浪(lang)費(fei)！

原(yuan)理：將特(te)異性抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)於固(gu)相載體(ti)表面，經洗(xi)滌(di)後分(fen)成(cheng)兩組：壹(yi)組加酶標記抗(kang)原(yuan)和被(bei)測抗(kang)原(yuan)的混(hun)合液，另壹組只加酶標記抗(kang)原(yuan)，經孵(fu)育(yu)洗(xi)滌(di)後加底物(wu)顯色(se)，這兩(liang)組底(di)物(wu)降解(jie)量之差(cha)，即為所(suo)要測定的(de)未(wei)知(zhi)抗(kang)原(yuan)的量。

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