土壤(rang)酸(suan)性轉(zhuan)化酶(AI)elisa檢(jian)測試劑盒

土壤(rang)酸(suan)性轉(zhuan)化酶(AI)elisa檢(jian)測試劑盒

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ELISA法是免(mian)疫診(zhen)斷中(zhong)的壹項新技(ji)術，現已成功地(di)應(ying)用於(yu)多種(zhong)病原(yuan)微生(sheng)物(wu)所(suo)引起(qi)的(de)傳染(ran)病、寄生(sheng)蟲(chong)病及非傳染(ran)病等方(fang)面(mian)的免(mian)疫診(zhen)斷。也已應用於(yu)大(da)分(fen)子抗(kang)原(yuan)和小(xiao)分(fen)子抗(kang)原(yuan)的定(ding)量測定，根據(ju)已經(jing)使用(yong)的結(jie)果(guo)，認為(wei)ELISA法具(ju)有(you)靈(ling)敏(min)、特(te)異(yi)、簡(jian)單、快(kuai)速、穩(wen)定及(ji)易(yi)於(yu)自動(dong)化(hua)操作(zuo)等特(te)點。不僅適用於(yu)臨(lin)床標本的(de)檢(jian)查，而(er)且(qie)由於(yu)壹(yi)天之(zhi)內可以檢(jian)查幾(ji)百甚(shen)至上千份(fen)標本,因此(ci)，也適(shi)合於(yu)血清流(liu)行病學調查(zha)。本(ben)法不(bu)僅(jin)可以(yi)用(yong)來測定抗(kang)ti，而(er)且(qie)也可用於(yu)測定體液(ye)中(zhong)的循環(huan)抗(kang)原(yuan)，所以(yi)也(ye)是壹種(zhong)早(zao)期(qi)診(zhen)斷的良好方(fang)法。因(yin)此(ci)ELISA法在(zai)生物(wu)醫學各領(ling)域的應(ying)用(yong)範(fan)圍(wei)日益擴大(da)，

組成結構(gou)

1、血清(qing)：操作(zuo)過程中(zhong)避免(mian)任何細(xi)胞刺激(ji)。使用(yong)不含(han)熱(re)原(yuan)和內du素的試管。收集血(xue)液(ye)後(hou)，1000×g離(li)心(xin)10分鐘(zhong)將(jiang)血紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速小(xiao)心(xin)地(di)分(fen)離(li)。

2、2、血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬suan鹽(yan)、肝素(su)血漿(jiang)可用(yong)於(yu)檢(jian)測。1000×g離(li)心(xin)30分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)。

3、細(xi)胞上清液(ye)：1000×g離(li)心(xin)10分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。

4、組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組織(zhi)加(jia)入適(shi)量生(sheng)理鹽水(shui)搗碎(sui)。1000×g離(li)心(xin)10分鐘(zhong)，取(qu)上清液(ye)。

5、保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣品不(bu)立(li)即(ji)使用(yong)，應將(jiang)其分(fen)成小部(bu)分-70℃保(bao)存(cun)，避免(mian)反(fan)復(fu)冷凍(dong)。盡可能(neng)的(de)不(bu)要(yao)使用(yong)溶血(xue)。如(ru)果(guo)血清(qing)中(zhong)大(da)量顆(ke)粒(li)，檢(jian)測前(qian)先離(li)心(xin)或過(guo)濾(lv)。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或更(geng)高(gao)的溫(wen)度加熱解凍(dong)。應(ying)在(zai)室溫(wen)下解凍(dong)並(bing)確(que)保樣品均(jun)勻地(di)充(chong)分解凍(dong)。

土壤(rang)酸(suan)性轉(zhuan)化酶(AI)elisa檢(jian)測試劑盒

操作(zuo)步驟：

1、使用(yong)前(qian)，將(jiang)所有(you)試劑充(chong)分混勻(yun)。不(bu)要(yao)使液(ye)體(ti)產(chan)生(sheng)大(da)量的(de)泡(pao)沫，以(yi)免(mian)加樣時加(jia)入大(da)量的(de)氣(qi)泡(pao)，產生(sheng)加樣上的誤(wu)差(cha)。

2、根據(ju)待測樣品數量加(jia)上標準品的(de)數量決定(ding)所(suo)需的(de)板條(tiao)數。每個(ge)標準品和(he)空(kong)白(bai)孔建議(yi)做(zuo)復(fu)孔。每個(ge)樣品根據(ju)自己(ji)的(de)數量來定(ding)，能(neng)使用(yong)復孔的盡量做(zuo)復(fu)孔。

3、加(jia)入稀(xi)釋好後(hou)的標準品50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔、加入待測樣品50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔內。立(li)即(ji)加入(ru)50ul標記的抗(kang)體。蓋(gai)上膜板(ban)，輕輕振蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)45分鐘(zhong)。

4、甩去(qu)孔內液(ye)體(ti)，每(mei)孔加滿洗滌(di)液(ye)，振蕩30秒，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye)，用(yong)吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍幹。重(zhong)復此(ci)操作(zuo)4次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗滌(di)次數增加(jia)壹(yi)次。

5、每(mei)孔加入100ul的親(qin)和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。

6、甩去(qu)孔內液(ye)體(ti)，每(mei)孔加滿洗滌(di)液(ye)，振蕩30秒，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye)，用(yong)吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍幹。重(zhong)復此(ci)操作(zuo)4次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗滌(di)次數增加(jia)壹(yi)次。

7、每(mei)孔加入底(di)物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育(yu)5分鐘(zhong)。避免(mian)光(guang)照。

8、取(qu)出酶標板，迅(xun)速加(jia)入(ru)50ul終(zhong)止液(ye)，加(jia)入(ru)終(zhong)止液(ye)後(hou)應立(li)即(ji)測定結果(guo)。

9、在(zai)450nm波長(chang)處測定各孔的OD值。

操作(zuo)註意事項：

1、試(shi)劑應按(an)標簽說(shuo)明書(shu)儲(chu)存(cun)，使用(yong)前(qian)恢(hui)復(fu)到(dao)室(shi)溫。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的標準品應(ying)丟(diu)棄(qi)，不(bu)可(ke)保(bao)存(cun)

2、實(shi)驗(yan)中(zhong)不用的(de)板條(tiao)應立(li)即(ji)放回(hui)包裝袋(dai)中(zhong)，密封(feng)保存，以(yi)免(mian)變質(zhi)。

3、不(bu)用的其它(ta)試(shi)劑(ji)應(ying)包裝好或蓋(gai)好。不(bu)同(tong)批號的試(shi)劑不(bu)要(yao)混用(yong)。保(bao)質(zhi)前(qian)使用(yong)。

4、使用(yong)壹次(ci)性的(de)吸頭(tou)以免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)，吸(xi)取終(zhong)止液(ye)和(he)底(di)物A、B液(ye)時，避免(mian)使用(yong)帶金(jin)屬(shu)部分(fen)的(de)加(jia)樣器(qi)。

5、使用(yong)幹凈的塑料容器(qi)配置洗(xi)滌(di)液(ye)。使用(yong)前(qian)充(chong)分混勻(yun)試(shi)劑盒(he)裏(li)的各種(zhong)成份及(ji)樣品。

6、底(di)物A應(ying)揮發，避免(mian)長(chang)時間(jian)打開蓋(gai)子。底(di)物B對光(guang)敏(min)感(gan)，避免(mian)長(chang)時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)光(guang)下。避免(mian)用手(shou)接(jie)觸，有毒。實(shi)驗(yan)完成後(hou)應立(li)即(ji)讀取(qu)OD值。

7、加(jia)入試劑(ji)的順序應壹致(zhi)，以保證所有反(fan)應(ying)板孔溫育(yu)的時間(jian)壹樣。按(an)照說(shuo)明(ming)書中(zhong)標明的(de)時間(jian)、加液(ye)的(de)量及(ji)順序進行溫育(yu)操作(zuo)。

壹(yi)般來講(jiang)，96T能(neng)檢(jian)測90個(ge)樣本，48T能檢(jian)測42個(ge)樣本，這裏(li)面(mian)需要(yao)用標樣來做(zuo)標準曲(qu)線，所(suo)以(yi)各位需要(yao)做(zuo)實(shi)驗(yan)的老(lao)師(shi)們(men)，請在(zai)購買(mai)ELISA試劑(ji)盒的(de)時候(hou)註意，需要(yao)做(zuo)多少(shao)個(ge)樣本，在(zai)決定(ding)買(mai)多大(da)規(gui)格的(de)試(shi)劑盒，以(yi)免(mian)做(zuo)實(shi)驗(yan)時出(chu)現試劑(ji)盒不(bu)夠用(yong)或者浪費！

原(yuan)理：將(jiang)特異(yi)性抗(kang)體包(bao)被於(yu)固(gu)相載體表(biao)面(mian)，經(jing)洗滌(di)後(hou)分成兩組(zu)：壹(yi)組加(jia)酶標記抗(kang)原(yuan)和被(bei)測抗(kang)原(yuan)的混合(he)液(ye)，另(ling)壹(yi)組(zu)只(zhi)加(jia)酶標記抗(kang)原(yuan)，經(jing)孵育(yu)洗滌(di)後(hou)加底(di)物顯色，這兩組(zu)底(di)物降(jiang)解量之(zhi)差(cha)，即(ji)為(wei)所要(yao)測定的未知(zhi)抗(kang)原(yuan)的量。

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