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          ELISA法(fa)是(shi)免疫(yi)診斷(duan)中的壹項(xiang)新技(ji)術,現(xian)已(yi)成功(gong)地(di)應用於(yu)多(duo)種(zhong)病(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)所引起(qi)的傳染病(bing)、寄生(sheng)蟲病(bing)及非(fei)傳(chuan)染病(bing)等(deng)方(fang)面(mian)的免疫(yi)診斷(duan)。也已(yi)應用於(yu)大(da)分子抗(kang)原和小(xiao)分子抗(kang)原的定量(liang)測定(ding),根(gen)據(ju)已(yi)經使(shi)用的結果(guo),認(ren)為(wei)ELISA法(fa)具(ju)有靈敏(min)、特(te)異、簡(jian)單(dan)、快(kuai)速、穩(wen)定(ding)及易於(yu)自(zi)動(dong)化(hua)操作(zuo)等(deng)特點(dian)。不僅(jin)適用於(yu)臨床(chuang)標(biao)本(ben)的檢查(zha),而(er)且由(you)於(yu)壹天(tian)之內可(ke)以(yi)檢(jian)查(zha)幾(ji)百甚至(zhi)上千份標(biao)本(ben),因此,也(ye)適合(he)於(yu)血(xue)清流行(xing)病(bing)學調查(zha)。本(ben)法(fa)不(bu)僅(jin)可以用來測定(ding)ti,而(er)且也(ye)可(ke)用於(yu)測定(ding)體液中的循(xun)環(huan)抗原(yuan),所以也(ye)是(shi)壹種早(zao)期(qi)診斷(duan)的良好方(fang)法(fa)。因此ELISA法(fa)在(zai)生(sheng)物(wu)醫(yi)學(xue)各(ge)領(ling)域(yu)的應用範圍(wei)日(ri)益(yi)擴大(da),

          組成(cheng)結(jie)構

          1、血(xue)清:操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避免任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激。使(shi)用不含熱(re)原和(he)內du素(su)的試管(guan)。收(shou)集血(xue)液後,1000×g離心(xin)10分鐘將(jiang)血(xue)紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速(su)小(xiao)心地(di)分離。

          2、2、血(xue)漿:EDTA、檸(ning)檬suan鹽、肝(gan)素血(xue)漿可(ke)用於(yu)檢測(ce)。1000×g離(li)心(xin)30分鐘去除(chu)顆(ke)粒。

          3、細(xi)胞上(shang)清(qing)液(ye):1000×g離心10分鐘去除(chu)顆(ke)粒和(he)聚合(he)物。

          4、組織勻漿:將(jiang)組織加入(ru)適量(liang)生(sheng)理(li)鹽水搗(dao)碎(sui)。1000×g離(li)心10分鐘,取(qu)上清(qing)液。

          5、保存:如(ru)果(guo)樣(yang)品(pin)不(bu)立(li)即(ji)使(shi)用,應將(jiang)其(qi)分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍(dong)。盡(jin)可(ke)能的不要使(shi)用溶(rong)血(xue)。如(ru)果(guo)血(xue)清中大(da)量(liang)顆(ke)粒,檢(jian)測(ce)前先離(li)心(xin)或過(guo)濾(lv)。不要在(zai)37℃或更高的溫(wen)度(du)加熱(re)解凍(dong)。應在室(shi)溫(wen)下解(jie)凍(dong)並確(que)保樣(yang)品(pin)均(jun)勻地(di)充分解凍。

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          小鼠肝(gan)炎病(bing)毒(du)(MHV)elisa試劑(ji)盒(he)

          操作(zuo)步(bu)驟(zhou):

          1、使(shi)用前,將(jiang)所有試(shi)劑(ji)充分混勻。不要使(shi)液體產生(sheng)大(da)量(liang)的泡沫(mo),以免加樣時加入大(da)量(liang)的氣泡,產生(sheng)加(jia)樣上的誤差(cha)。

          2、根(gen)據(ju)待(dai)測(ce)樣品(pin)數(shu)量加(jia)上標(biao)準品(pin)的數(shu)量決(jue)定(ding)所需的板(ban)條(tiao)數(shu)。每個(ge)標(biao)準品(pin)和(he)空(kong)白孔建(jian)議(yi)做(zuo)復孔。每個(ge)樣(yang)品(pin)根(gen)據(ju)自(zi)己(ji)的數(shu)量來定,能(neng)使(shi)用復孔(kong)的盡量(liang)做(zuo)復孔。

          3、加(jia)入(ru)稀(xi)釋(shi)好後的標(biao)準品(pin)50ul於(yu)反應孔、加入待測樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反應孔內。立(li)即(ji)加入50ul標(biao)記的抗體。蓋(gai)上(shang)膜(mo)板(ban),輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻,37℃溫(wen)育(yu)45分鐘。

          4、甩(shuai)去孔(kong)內液(ye)體,每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye),振(zhen)蕩(dang)30秒,甩(shuai)去洗(xi)滌液(ye),用吸水紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復(fu)此操作(zuo)4次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌,洗(xi)滌次數(shu)增加壹次。

          5、每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)100ul的親和(he)鏈酶素-HRP,輕(qing)輕振(zhen)蕩(dang)混勻,37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。

          6、甩(shuai)去孔(kong)內液(ye)體,每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye),振(zhen)蕩(dang)30秒,甩(shuai)去洗(xi)滌液(ye),用吸水紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復(fu)此操作(zuo)4次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌,洗(xi)滌次數(shu)增加壹次。

          7、每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)底(di)物A、B各(ge)50ul,輕輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻,37℃溫(wen)育(yu)5分鐘。避免光照(zhao)。

          8、取(qu)出(chu)酶標(biao)板(ban),迅(xun)速(su)加入50ul終(zhong)止(zhi)液,加(jia)入終(zhong)止(zhi)液後應立(li)即(ji)測定結(jie)果(guo)。

          9、在(zai)450nm波長處測(ce)定各(ge)孔的OD值。

          操作(zuo)註(zhu)意事項:

          1、試(shi)劑(ji)應按標(biao)簽(qian)說(shuo)明(ming)書(shu)儲(chu)存(cun),使(shi)用前恢復(fu)到室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後的標(biao)準品(pin)應丟棄,不可保存(cun)

          2、實(shi)驗中不(bu)用的板(ban)條(tiao)應立(li)即(ji)放回(hui)包(bao)裝袋(dai)中,密(mi)封保存(cun),以(yi)免變(bian)質(zhi)。

          3、不(bu)用的其(qi)它試(shi)劑(ji)應包(bao)裝好或蓋(gai)好。不同(tong)批(pi)號(hao)的試劑(ji)不要混(hun)用。保質(zhi)前使(shi)用。

          4、使(shi)用壹次性的吸頭以免交(jiao)叉(cha)汙染,吸取(qu)終(zhong)止(zhi)液和(he)底(di)物A、B液(ye)時,避免使(shi)用帶金(jin)屬部(bu)分的加樣(yang)器。

          5、使(shi)用幹(gan)凈(jing)的塑(su)料(liao)容器配置洗(xi)滌液(ye)。使(shi)用前充分混勻試劑(ji)盒(he)裏(li)的各種(zhong)成份(fen)及樣品(pin)。

          6、底(di)物A應揮(hui)發,避免長時間打(da)開蓋(gai)子。底(di)物B對光敏感(gan),避免長時間暴(bao)露於(yu)光下。避免用手接(jie)觸(chu),有毒(du)。實(shi)驗完(wan)成後應立(li)即(ji)讀取(qu)OD值。

          7、加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)的順序(xu)應壹致,以保證所有反(fan)應板(ban)孔(kong)溫(wen)育(yu)的時間壹(yi)樣。按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)中標(biao)明(ming)的時間、加(jia)液的量及順序(xu)進(jin)行(xing)溫(wen)育(yu)操作(zuo)。

          壹(yi)般(ban)來講,96T能(neng)檢(jian)測(ce)90個(ge)樣本(ben),48T能(neng)檢(jian)測(ce)42個(ge)樣(yang)本(ben),這(zhe)裏(li)面(mian)需(xu)要用標(biao)樣來做(zuo)標(biao)準曲(qu)線(xian),所以各(ge)位(wei)需要做(zuo)實(shi)驗的老(lao)師們(men),請(qing)在購買ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的時候(hou)註意(yi),需要做(zuo)多(duo)少(shao)個樣(yang)本(ben),在(zai)決(jue)定(ding)買多(duo)大(da)規(gui)格的試劑(ji)盒(he),以(yi)免做(zuo)實(shi)驗時出(chu)現(xian)試劑(ji)盒(he)不(bu)夠(gou)用或者(zhe)浪費!

          原(yuan)理(li):將(jiang)特異性抗(kang)體包(bao)被於(yu)固相(xiang)載(zai)體表(biao)面(mian),經(jing)洗(xi)滌後分成兩組:壹(yi)組加(jia)酶標(biao)記抗(kang)原(yuan)和被(bei)測抗原的混合(he)液,另(ling)壹組只(zhi)加(jia)酶標(biao)記抗(kang)原(yuan),經孵育(yu)洗(xi)滌後加底(di)物顯(xian)色,這兩(liang)組底(di)物降(jiang)解量(liang)之差(cha),即(ji)為(wei)所要測(ce)定的未知(zhi)抗(kang)原的量。

          小(xiao)鼠(shu)繁(fan)殖(zhi)與(yu)呼吸綜合(he)征病(bing)毒(du)抗體(PRRSV-Ab)elisa試劑(ji)盒(he)

          小(xiao)鼠(shu)甘(gan)油(you)三酯(zhi)水解(jie)酶(TGH)elisa試劑(ji)盒(he)

          小(xiao)鼠(shu)幹(gan)擾素(su)誘導鳥(niao)苷酸結(jie)合(he)蛋白1(GBP1)elisa試劑(ji)盒(he)

          小(xiao)鼠(shu)黑(hei)素(su)皮質素受(shou)體4(MC4R)elisa試劑(ji)盒(he)

          小(xiao)鼠(shu)角(jiao)化(hua)細(xi)胞內分泌因子(KAF)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          小(xiao)鼠(shu)抗(kang)L型(xing)鈣通道(dao)蛋白抗體(Anti-CACH2)elisa試劑(ji)盒(he)

          小(xiao)鼠(shu)美(mei)金(jin)剛胺(Memantine)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          小(xiao)鼠(shu)生(sheng)長(chang)激素(su)抑(yi)制激素(su)(GHIH)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          小(xiao)鼠(shu)嗜(shi)酸粒(li)細(xi)胞趨(qu)化(hua)蛋(dan)白Eotaxin 1(Eotaxin 1)elisa試劑(ji)盒(he)

          小(xiao)鼠(shu)鼠(shu)泰(tai)澤病(bing)原體(Tyzzer's Organism)elisa試劑(ji)盒(he)









































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