人二肽基肽酶(mei)Ⅳ(DPP4)elisa試劑盒

人二肽基肽酶(mei)Ⅳ(DPP4)elisa試劑盒

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規(gui)格：96T/48T

包(bao)裝(zhuang)：盒

檢測原理(li)：采用雙抗(kang)夾(jia)心法

保(bao)質期：六個(ge)月(yue)

產(chan)品(pin)保存條(tiao)件(jian)：2-8°C

應(ying)用範圍(wei)：僅供科(ke)研研究實驗使(shi)用

樣(yang)品(pin)形式：血清/血漿/組(zu)織勻漿/細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上清/其它生物液體(ti)（具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)請咨詢）

標(biao)本的(de)采集及保存

1.血清：室(shi)溫(wen)血液(ye)自然凝(ning)固10-20分(fen)鐘(zhong)後，離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔(zai)細(xi)收集上清。保存過(guo)程(cheng)中如有沈(chen)澱(dian)形成，應(ying)再次離心(xin)。

2.血漿：應(ying)根據標本(ben)的(de)要(yao)求選擇(ze)EDTA、檸檬酸(suan)鈉或(huo)肝(gan)素(su)作(zuo)為抗(kang)凝(ning)劑(ji)，混(hun)合(he)10-20分(fen)鐘(zhong)後，離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔(zai)細(xi)收集上清。保存過(guo)程(cheng)中如有沈(chen)澱(dian)形成，應(ying)再次離心(xin)。

3.尿(niao)液：用無菌(jun)管收集。離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔(zai)細(xi)收集上清。保存過(guo)程(cheng)中如有沈(chen)澱(dian)形成，應(ying)再次離心(xin)。胸(xiong)腹(fu)水(shui)、腦脊液參照此實(shi)行(xing)。

4.細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上清：檢測分(fen)泌性(xing)的(de)成份(fen)時，用無菌(jun)管收集。離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/ 分(fen)）。仔(zai)細(xi)收集上清。檢測細(xi)胞(bao)內(nei)的(de)成份(fen)時，用PBS（PH7.2-7.4）稀(xi)釋細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，細(xi)胞(bao)濃(nong)度(du)達到100萬/ml左右。通(tong)過(guo)反復(fu)凍融(rong)，以(yi)使(shi)細胞(bao)破(po)壞(huai)並 放出細(xi)胞(bao)內(nei)成份(fen)。離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔(zai)細(xi)收集上清。保存過(guo)程(cheng)中如有沈(chen)澱(dian)形成，應(ying)再次離心(xin)。

5.組(zu)織標本(ben)：切(qie)割標(biao)本(ben)後，稱取(qu)重量(liang)。加(jia)入壹定量(liang)的(de)PBS，PH7.4。用液氮(dan)迅速冷(leng)凍保(bao)存備(bei)用。標本(ben)融化後仍然保(bao)持(chi)2-8℃的(de)溫(wen)度(du)。加(jia)入壹定量(liang)的(de)PBS（PH7.4），用手工或(huo)勻漿器(qi)將標本勻漿充(chong)分(fen)。離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔(zai)細(xi)收集上清。分(fen)裝(zhuang)後壹份(fen)待(dai)檢測，其余(yu)冷(leng)凍備(bei)用。

標(biao)本要求(qiu)：

1．標(biao)本采集後盡(jin)早(zao)進(jin)行(xing)提取(qu)，提取(qu)按相(xiang)關(guan)文(wen)獻進行，提取(qu)後應盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實(shi)驗。若不(bu)能馬(ma)上進(jin)行試驗(yan)，可將(jiang)標(biao)本(ben)放於-20℃保存，但(dan)應(ying)避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)

2．不(bu)能檢測含(han)NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因NaN3抑(yi)制辣(la)根過(guo)氧化物酶的(de)（HRP）活(huo)性(xing)。

試(shi)劑盒組(zu)成：

48孔(kong)配(pei)制：

1.說明書(shu):1份(fen)

2.封(feng)板(ban)膜:2片(pian)（48）

3.密封(feng)袋:1個(ge)

4.酶(mei)標包(bao)被板(ban):1×48 (2-8℃保(bao)存)

5.標(biao)準品(pin):0.5ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

6.標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye):1.5ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

7.酶(mei)標試劑(ji):3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

8.樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液(ye):3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

9.顯色劑(ji)A液：3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

10.顯色劑(ji)B液(ye)：3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

11.終(zhong)止(zhi)液(ye)：3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

12.濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液：（20ml×20倍(bei)）×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

96孔(kong)配(pei)置(zhi)：

1.說明書(shu):1份(fen)

2.封(feng)板(ban)膜:2片(pian)（96）

3.密封(feng)袋: 1個(ge)

4.酶(mei)標包(bao)被板(ban):1×96 (2-8℃保(bao)存)

5.標(biao)準品(pin):0.5ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

6.標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye):1.5ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

7.酶(mei)標試劑(ji):3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

8.樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液(ye):3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

9.顯色劑(ji)A液：3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

10.顯色劑(ji)B液：3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

11.終(zhong)止(zhi)液(ye)：3ml×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

12.濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液：（20ml×20倍(bei)）×1瓶(ping)(2-8℃保(bao)存)

人二肽基肽酶(mei)Ⅳ(DPP4)elisa試劑盒

需要自備(bei)的(de)試(shi)劑和器材(cai)

1.37℃恒溫(wen)箱(xiang)。

2.標(biao)準規(gui)格酶標(biao)儀(yi)。

3.精(jing)密移(yi)液器及壹次性(xing)吸頭

4.蒸(zheng)餾水(shui)，

5.壹次性(xing)試(shi)管

6.吸水(shui)紙

操(cao)作(zuo)步驟

1、標(biao)準品(pin)的(de)稀(xi)釋：在(zai)酶標包(bao)被板(ban)上設(she)標準品(pin)孔10孔(kong)，在第(di)壹、第(di)二孔(kong)中分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)100μl，然後在第(di)壹、第(di)二孔(kong)中加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻；然後從第(di)壹孔、第(di)二孔(kong)中各(ge)取(qu)100μl分(fen)別(bie)加(jia)到第(di)三孔(kong)和第(di)四(si)孔(kong)，再在(zai)第(di)三、第(di)四(si)孔(kong)分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻；然後在第(di)三孔(kong)和第(di)四(si)孔(kong)中先各(ge)取(qu)50μl棄掉(diao)，再各(ge)取(qu)50μl分(fen)別(bie)加(jia)到第(di)五(wu)、第(di)六孔(kong)中，再在(zai)第(di)五(wu)、第(di)六孔(kong)中分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50ul，混勻；混(hun)勻後從第(di)五(wu)、第(di)六孔(kong)中各(ge)取(qu)50μl分(fen)別(bie)加(jia)到第(di)七、第(di)八孔(kong)中，再在(zai)第(di)七、第(di)八孔(kong)中分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻後從第(di)七、第(di)八孔(kong)中分(fen)別(bie)取(qu)50μl加(jia)到第(di)九(jiu)、第(di)十孔(kong)中，再在(zai)第(di)九(jiu)第(di)十孔(kong)分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋液(ye)50μl，混勻後從第(di)九(jiu)第(di)十孔(kong)中各(ge)取(qu)50μl棄掉(diao)。（稀(xi)釋後各(ge)孔加(jia)樣量(liang)都(dou)為50μl，濃(nong)度(du)分(fen)別(bie)為9mmol/L，6 mmol/L，3 mmol/L，1.5mmol/L， 0.75 mmol/L）。

2、加(jia)樣：分(fen)別(bie)設空白孔（空白對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣品(pin)及酶標(biao)試(shi)劑(ji)，其余(yu)各(ge)步操作(zuo)相同(tong)）、待測樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶標包(bao)被板(ban)上待(dai)測樣(yang)品(pin)孔中先加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋液(ye)40μl，然後再加(jia)待測樣(yang)品(pin)10μl（樣品(pin)最終(zhong)稀(xi)釋度(du)為5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔壁，輕輕晃(huang)動(dong)混勻。

3、溫(wen)育：用封板(ban)膜封板(ban)後置(zhi)37℃溫育30分(fen)鐘(zhong)。

4、配(pei)液：將(jiang)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液用蒸餾(liu)水(shui)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋後備(bei)用。

5、洗(xi)滌：小心揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜，棄去液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液，靜置(zhi)30秒後棄去，如(ru)此重復5次，拍(pai)幹(gan)。

6、加(jia)酶：每孔(kong)加(jia)入酶(mei)標(biao)試劑(ji)50μl，空(kong)白孔除外(wai)。

7、溫(wen)育：操作(zuo)同(tong)3。

8、洗(xi)滌：操作(zuo)同(tong)5。

9、顯色：每孔(kong)先加(jia)入顯色劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩混勻，37℃避光顯色15分(fen)鐘(zhong).

10、終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)（此時藍色立轉黃色(se)）。

11、測定(ding)：以(yi)空(kong)白空調零(ling)，450nm波長(chang)依(yi)序(xu)測量(liang)各(ge)孔的(de)吸光度(du)（OD值）。 測定(ding)應(ying)在(zai)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)後15分(fen)鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行。

洗(xi)板(ban)方(fang)法(fa)

手(shou)工洗(xi)板(ban)方(fang)法(fa)：甩(shuai)掉(diao)酶標板(ban)內(nei)的(de)液(ye)體；在實驗(yan)臺(tai)上鋪(pu)墊幾(ji)層吸水(shui)紙，酶(mei)標板(ban)朝(chao)下(xia)用力拍幾(ji)次；將(jiang)稀(xi)釋後的(de)洗(xi)滌液至少(shao)0.35ml註(zhu)入孔內(nei)，浸泡1-2分(fen)鐘(zhong)。根(gen)據需要，重復此過(guo)程(cheng)數次。

自動(dong)洗(xi)板(ban)：如(ru)果(guo)有自動(dong)洗(xi)板(ban)機(ji)，應(ying)在(zai)熟(shu)練使(shi)用後再用到正(zheng)式(shi)實驗過(guo)程中。

註(zhu)意事項：

試(shi)劑盒從(cong)冷(leng)藏(zang)環境中取(qu)出應(ying)在(zai)室(shi)溫(wen)平衡15-30分(fen)鐘(zhong)後方可(ke)使(shi)用，酶標(biao)包(bao)被板(ban)開封(feng)後如未用完，板(ban)條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入密封(feng)袋中保存。

濃(nong)洗(xi)滌液可能(neng)會(hui)有結(jie)晶析出，稀(xi)釋時可在(zai)水(shui)浴(yu)中加(jia)溫助(zhu)溶(rong)，洗(xi)滌時不影響(xiang)結(jie)果。

各(ge)步加(jia)樣均應使(shi)用加(jia)樣器(qi)，並經常校對(dui)其準確性(xing)，以(yi)避免(mian)試(shi)驗(yan)誤(wu)差。壹次加(jia)樣時間(jian)最好控(kong)制(zhi)在(zai)5分(fen)鐘(zhong)內(nei)，如標(biao)本(ben)數量(liang)多(duo)，推薦使(shi)用排槍(qiang)加(jia)樣。

請每次測定(ding)的(de)同(tong)時做標準曲(qu)線(xian)，最(zui)好做復孔(kong)。如標本中待測物質含(han)量(liang)過(guo)高(gao)（樣(yang)本(ben)OD值(zhi)大(da)於標(biao)準品(pin)孔第(di)壹孔的(de)OD值(zhi)），請先用樣品(pin)稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋壹定倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）後再測定(ding)，計(ji)算(suan)時請最後乘(cheng)以(yi)總(zong)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)（×n×5）。

封(feng)板(ban)膜只(zhi)限(xian)壹次性(xing)使(shi)用，以(yi)避免(mian)交(jiao)叉汙染。

底(di)物請避光保(bao)存。

嚴格按照(zhao)說明書(shu)的(de)操(cao)作(zuo)進行(xing)，試驗(yan)結(jie)果判定必須以(yi)酶(mei)標儀(yi)讀數(shu)為準.

所(suo)有樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌液和各(ge)種廢棄物都(dou)應按(an)傳染物處理(li)。

本(ben)試劑不(bu)同(tong)批號(hao)組分(fen)不(bu)得(de)混用。

如(ru)與英(ying)文說明書(shu)有異(yi)，以(yi)英(ying)文說明書(shu)為準。

計(ji)算(suan)：

以(yi)標(biao)準物的(de)濃(nong)度(du)為橫(heng)坐標(biao)，OD值(zhi)為縱(zong)坐(zuo)標，    

在(zai)坐標紙(zhi)上繪(hui)出標(biao)準曲(qu)線(xian)，根(gen)據樣品(pin)的(de)OD      

值(zhi)由標準曲(qu)線(xian)查(zha)出相(xiang)應(ying)的(de)濃(nong)度(du)；再乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋      

倍(bei)數(shu)；或(huo)用標準物的(de)濃(nong)度(du)與OD值(zhi)計算(suan)出標(biao)      

準曲(qu)線(xian)的(de)直線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程(cheng)式，將樣品(pin)的(de)OD值(zhi)      

代(dai)入方程(cheng)式(shi)，計算(suan)出樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)，再乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋      

倍(bei)數(shu)，即為樣(yang)品(pin)的(de)實(shi)際(ji)濃(nong)度(du)。  

檢測範(fan)圍(wei)、 OD值(zhi)：

具(ju)體(ti)請咨詢在線(xian)客(ke)服(fu)，或(huo)者來(lai)電(dian)索要詳(xiang)細說明書(shu)！

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