人(ren)脂(zhi)肪(fang)細(xi)胞(bao)

人(ren)脂(zhi)肪(fang)細(xi)胞(bao)需(xu)要準備好細(xi)胞(bao)所(suo)要(yao)用到的(de)培(pei)養(yang)基和(he)相(xiang)關試(shi)劑，雖然所(suo)有(you)的(de)貼(tie)壁(bi)，半貼(tie)壁(bi)或者(zhe)懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)處(chu)理方(fang)式差不多(duo)，但(dan)是(shi)不同(tong)的(de)實(shi)驗(yan)室培(pei)養(yang)條件(jian)和處(chu)理力度(du)還有試(shi)劑的批(pi)間(jian)差這(zhe)些(xie)問(wen)題(ti)存在(zai)，也(ye)會導致(zhi)對細(xi)胞(bao)處(chu)理不當(dang)，  或者(zhe)環境的(de)不適(shi)應(ying)而造成細(xi)胞(bao)的(de)死(si)亡。
人(ren)脂(zhi)肪(fang)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)物的生(sheng)理環境(jing)不同(tong)時定義(yi)為其物理化學(xue)環(huan)境中，更(geng)好(hao)地(di)理解血(xue)清的組件(jian)，所(suo)必需(xu)的增(zeng)殖的(de)生(sheng)長(chang)因子的(de)鑒定，並(bing)更(geng)好(hao)地(di)理解細(xi)胞(bao)在(zai)培(pei)養(yang)的微環境（即，細(xi)胞(bao) - 細(xi)胞(bao)相(xiang)互(hu)作用，氣(qi)體的(de)擴散，與基質(zhi)相(xiang)互作用）現(xian)在(zai)允(yun)許(xu)在(zai)無(wu)血(xue)清培養(yang)基中(zhong)某(mou)些細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)培(pei)養(yang)。
培(pei)養(yang)物的主要(yao)優(you)點(dian)是操縱(zong)物理化學(xue)（即(ji)，溫(wen)度(du)，pH，滲(shen)透壓(ya)，O2和CO2張(zhang)力）和生(sheng)理環境(jing)（即(ji)，激素和營養(yang)物濃(nong)度(du)），其中所(suo)述(shu)細(xi)胞(bao)繁(fan)殖(zhi)的(de)能力。除(chu)溫(wen)度(du)，將(jiang)培(pei)養(yang)環境是由(you)生(sheng)長(chang)培養(yang)基進(jin)行(xing)控(kong)制(zhi)。
對於培養(yang)，只要(yao)我們細(xi)心(xin)操作，註(zhu)意(yi)細(xi)節(jie)，並(bing)不是(shi)大家說的(de)那樣(yang)困難(nan)。對於有經(jing)驗(yan)和有(you)條(tiao)件(jian)的客戶，建議由(you)公(gong)司代(dai)為培養(yang)細(xi)胞(bao)及(ji)進(jin)行(xing)後(hou)續研(yan)究(jiu)。

細(xi)胞(bao)概(gai)述(shu)

細(xi)胞(bao)(英(ying)文名: cell) 並沒(mei)有統(tong)壹(yi)的定義(yi)，比較普遍(bian)的提法是:細(xi)胞(bao)是(shi)生(sheng)物體基本(ben)的結構(gou)和功(gong)能(neng)單(dan)位。已知除(chu)病毒(du)之(zhi)外的所(suo)有(you)生(sheng)物均由(you)細(xi)胞(bao)所(suo)組成，但(dan)病毒(du)生(sheng)命活動也(ye)必須在(zai)細(xi)胞(bao)中(zhong)才能(neng)體(ti)現(xian)。壹般來說， 細(xi)菌等絕(jue)大部分微(wei)生(sheng)物以及(ji)原(yuan)生(sheng)動物由(you)壹(yi)個(ge)細(xi)胞(bao)組成，即(ji)單(dan)細(xi)胞(bao)生(sheng)物，高等(deng)植(zhi)物與高(gao)等動物則(ze)是(shi)多(duo)細(xi)胞(bao)生(sheng)物。細(xi)胞(bao)可(ke)分為原(yuan)核(he)細(xi)胞(bao)、真(zhen)核(he)細(xi)胞(bao)兩(liang)類(lei)，但(dan)也(ye)有人(ren)提出應(ying)分為三類(lei)，即(ji)把原(yuan)屬(shu)於原(yuan)核(he)細(xi)胞(bao)的(de)古(gu)核(he)細(xi)胞(bao)獨(du)立出來作為與之(zhi)並列(lie)的(de)壹(yi) 類(lei)。研(yan)究(jiu)細(xi)胞(bao)的(de)學(xue)科(ke)稱(cheng)為細(xi)胞(bao)生(sheng)物學。細(xi)胞(bao)體(ti)形極(ji)微(wei)，在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)始能(neng)窺(kui)見(jian)，形狀多(duo)種(zhong)多(duo)樣(yang)。主要(yao)由(you)細(xi)胞(bao)核(he)與細(xi)胞(bao)質(zhi)構(gou)成，表面有(you)細(xi)胞(bao)膜。高等植物細(xi)胞(bao)膜外有細(xi)胞(bao)壁(bi)，細(xi)胞(bao)質(zhi)中(zhong)常(chang)有質(zhi)體(ti)，體內有

葉綠體和(he)液泡，還有線粒體。動(dong)物細(xi)胞(bao)無(wu)細(xi)胞(bao)壁(bi),細(xi)胞(bao)質(zhi)中(zhong)常(chang)有中心(xin)體，而(er)高(gao)等植物細(xi)胞(bao)中(zhong)則(ze)無(wu)。細(xi)胞(bao)有(you)運(yun)動(dong)、營養(yang)和繁殖等機能。

細(xi)胞(bao)特(te)性:

1)組織來源於實(shi)驗(yan)動物的正(zheng)常(chang)胃組織。

2)細(xi)胞(bao)鑒(jian)定：廣(guang)譜(pu)（PCK）或細(xi)胞(bao)-19（CK-19）免(mian)疫熒光(guang)染(ran)色(se)為陽(yang)性。經(jing)鑒(jian)定細(xi)胞(bao)純度(du)高於90%。

3)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌。

4)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)方(fang)式：鋪路(lu)石(shi)狀(zhuang)細(xi)胞(bao)，不規(gui)則(ze)細(xi)胞(bao)，貼(tie)壁(bi)培(pei)養(yang)。

產品規(gui)格：>5×105細(xi)胞(bao)數

包(bao)裝(zhuang)規(gui)格：1ml凍存細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或T-25培養(yang)瓶

操作要點(dian)：

1）將(jiang)培(pei)養(yang)基在(zai)37℃水(shui)浴鍋(guo)預(yu)熱；準備壹個(ge)15mL無菌的離(li)心(xin)管，加(jia)入(ru)8mL預(yu)熱培(pei)養(yang)基。

2）將(jiang)凍存細(xi)胞(bao)從液氮(dan)罐中取(qu)出，快速放(fang)入37℃水(shui)浴鍋(guo)中復溫(wen)（可(ke)準備壹潔(jie)凈(jing)的燒杯，裝(zhuang)滿(man)37℃的水(shui)，細(xi)胞(bao)凍存管取(qu)出後(hou)迅速放(fang)入燒(shao)杯(bei)內，再逐步轉(zhuan)移(yi)到水(shui)浴鍋(guo)中）。輕(qing)輕(qing)晃動凍存管，使(shi)細(xi)胞(bao)能(neng)在(zai)1~2min內解凍，使(shi)細(xi)胞(bao)能(neng)盡(jin)快通(tong)過(guo)易受損(sun)的溫(wen)度(du)段（-5~0℃）。註(zhu)意(yi)凍存管管口(kou)不能(neng)沒(mei)入水(shui)中，避免(mian)引(yin)起汙染(ran)。

3）用75%酒(jiu)精擦拭凍存管後(hou)再置(zhi)於超凈臺內，將(jiang)管內細(xi)胞(bao)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)準備好的(de)離心(xin)管內，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)液體(ti)，使細(xi)胞(bao)均(jun)勻(yun)分散(san)，吹(chui)打(da)時避免(mian)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡。用新鮮培養(yang)基洗(xi)管壁(bi)2次，均(jun)轉移(yi)至(zhi)離心管內。

4）800rpm離心5min，棄(qi)上(shang)清，加(jia)入(ru)新鮮的培養(yang)基，吹(chui)打(da)制(zhi)成細(xi)胞(bao)懸(xuan)液。

5）將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi)T25細(xi)胞(bao)瓶內，補加(jia)適(shi)量(liang)的(de)培(pei)養(yang)基，輕(qing)輕(qing)晃動細(xi)胞(bao)瓶使細(xi)胞(bao)分布(bu)均(jun)勻(yun)，放(fang)入溫(wen)箱(xiang)內培養(yang)。

6）第(di)二(er)天(tian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)生(sheng)長(chang)情況(kuang)，換新鮮培養(yang)基以(yi)去(qu)除(chu)死(si)細(xi)胞(bao)。繼(ji)續培養(yang)，待細(xi)胞(bao)長(chang)至80~90%匯(hui)合時正常(chang)傳代(dai)。壹般剛復蘇的(de)細(xi)胞(bao)需(xu)經(jing)過(guo)2~3次傳代(dai)，細(xi)胞(bao)活(huo)力恢復後才能(neng)進(jin)行(xing)後(hou)續的實(shi)驗(yan)。

細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1）復蘇細(xi)胞(bao)：將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存管在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖(yao)晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄去上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適量(liang)培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2）細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代(dai)培養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上(shang)清，用不含鈣、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液於培養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定），然後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分變圓並脫落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操作臺，輕(qing)敲幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例分到新的含8 mL培養(yang)基的(de)新皿中或者(zhe)瓶中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。

3）細(xi)胞(bao)凍存：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態良好時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍存。下(xia)面 T25 瓶為例；

a、收集(ji)細(xi)胞(bao)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄去上(shang)清液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根據細(xi)胞(bao)數量(liang)加(jia)入(ru)無血清細(xi)胞(bao)凍存液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支凍存管凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍存管做(zuo)好標識。

c、將(jiang)凍存管放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌儲存。記錄凍存管位置(zhi)以便(bian)下(xia)次拿取(qu)。

產品的(de)運(yun)輸和保存：

視(shi)天(tian)氣(qi)狀況(kuang)和運輸距離(li)遠(yuan)近，公(gong)司與客戶協商後選擇下(xia)述(shu)方(fang)式中(zhong)的壹(yi)種(zhong)進(jin)行(xing)。

1)1mL凍存細(xi)胞(bao)懸(xuan)液裝(zhuang)於1.8ml的凍存管中(zhong)，置(zhi)於裝滿(man)幹(gan)冰的泡沫保溫(wen)盒中(zhong)進(jin)行(xing)運(yun)輸；收到細(xi)胞(bao)後(hou)請盡快解凍復(fu)蘇細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)，如(ru)無(wu)法立刻進行(xing)復(fu)蘇操作，凍存細(xi)胞(bao)可(ke)在(zai)-80℃的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)保(bao)存1個(ge)月。

2)T-25培養(yang)瓶充滿(man)培養(yang)基後(hou)進(jin)行(xing)常(chang)溫(wen)運(yun)輸；收到細(xi)胞(bao)後(hou)請鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態，如(ru)鋪瓶率超(chao)過(guo)85%請立即進行(xing)傳代(dai)操作，如(ru)懸(xuan)浮的(de)細(xi)胞(bao)較多，請將(jiang)培(pei)養(yang)瓶至於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)靜置(zhi)過(guo)夜(ye)以幫助(zhu)未(wei)死(si)亡的(de)懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)能(neng)夠(gou)再(zai)次貼(tie)壁(bi)。

友情提示(shi)註(zhu)意(yi)以(yi)下(xia)幾點(dian)：

1、收到細(xi)胞(bao)後(hou)請盡快更(geng)換(huan)為含15%血清的(de)新鮮培養(yang)基，如(ru)因(yin)特殊(shu)情(qing)況需(xu)要繼(ji)續使用原(yuan)瓶，請在(zai)原(yuan)瓶培養(yang)基中(zhong)額(e)外(wai)添加(jia)10%的(de)血清

2、貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)收(shou)到當(dang)天(tian)切(qie)忌立刻消化，請將(jiang)細(xi)胞(bao)換(huan)液後(hou)放(fang)置(zhi)培養(yang)箱(xiang)孵育到第(di)二(er)天(tian)再(zai)做消(xiao)化(hua)傳代(dai)，請優先(xian)選擇直(zhi)徑6cm的培(pei)養(yang)皿進行(xing)傳代(dai)培養(yang)

3、如(ru)簽(qian)收時出現(xian)培養(yang)瓶壁(bi)破裂(lie)，漏(lou)液等(deng)情況請及時做好(hao)照片記錄並(bing)聯系(xi)實(shi)驗(yan)室

深圳瑞(rui)清(qing)生(sheng)物信息科(ke)技有限(xian)公(gong)司經(jing)過(guo)數年的努(nu)力發展(zhan)已(yi)迅(xun)速成為集(ji)產品(pin)研(yan)發(fa)、經(jing)營(ying)為壹體(ti)的(de)專業(ye)化(hua)生(sheng)物工程(cheng)公(gong)司。公(gong)司具(ju)有完(wan)善(shan)的(de)實(shi)驗(yan)技術(shu)開(kai)發(fa)平臺，成熟的抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體(ti)研(yan)發(fa)系統，熟練掌(zhang)握各(ge)種(zhong)酶(mei)聯(lian)技術(shu)，結合公司的(de)研(yan)發(fa)團隊(dui)，可以(yi)有效的(de)保(bao)證公(gong)司產(chan)品強(qiang)的穩定性和(he)高(gao)的準確性，同(tong)時又(you)具(ju)有(you)競(jing)爭力的價格。 公(gong)司主營(ying)ELISA試(shi)劑盒，目(mu)前(qian)可以提供(gong)生(sheng)化試(shi)劑、分子生(sheng)物學試(shi)劑及試(shi)劑盒，各(ge)種(zhong)抗(kang)體(ti)及(ji)免疫學試(shi)劑盒、實(shi)驗(yan)耗(hao)材(cai)等多門(men)類(lei)上(shang)萬種(zhong)產(chan)品(pin)，產品涉及(ji)分子生(sheng)物學、細(xi)胞(bao)生(sheng)物學、免(mian)疫學等生(sheng)命科(ke)學(xue)的各個(ge)領域。