人脈(mai)絡膜血(xue)管(guan)細胞

人脈(mai)絡膜血(xue)管(guan)細胞需要(yao)準備好細胞所要(yao)用(yong)到的培養(yang)基和相關(guan)試(shi)劑，雖(sui)然所(suo)有的貼(tie)壁，半貼(tie)壁或(huo)者懸浮細胞處理方式(shi)差(cha)不(bu)多，但是不(bu)同的實驗(yan)室培(pei)養(yang)條件(jian)和處(chu)理力度(du)還(hai)有試(shi)劑的批(pi)間差(cha)這(zhe)些問題(ti)存(cun)在(zai)，也(ye)會導(dao)致(zhi)對細胞處理不(bu)當(dang)，  或(huo)者環境(jing)的不(bu)適應而(er)造(zao)成細胞的死亡。
人脈(mai)絡膜血(xue)管(guan)細胞培養(yang)物(wu)的生理環境(jing)不(bu)同時定(ding)義(yi)為(wei)其(qi)物(wu)理化(hua)學(xue)環(huan)境(jing)中(zhong)，更(geng)好地(di)理解血(xue)清(qing)的組件(jian)，所必需的增殖(zhi)的生長(chang)因(yin)子(zi)的鑒(jian)定(ding)，並(bing)更(geng)好地(di)理解細胞在(zai)培養(yang)的微環(huan)境(jing)（即(ji)，細胞 - 細胞相互(hu)作(zuo)用(yong)，氣(qi)體的擴散(san)，與基質(zhi)相互(hu)作(zuo)用(yong)）現在(zai)允(yun)許(xu)在(zai)無血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基中(zhong)某些細胞系(xi)的培養(yang)。
培養(yang)物(wu)的主要(yao)優點(dian)是操縱物(wu)理化(hua)學(xue)（即(ji)，溫度，pH，滲(shen)透(tou)壓(ya)，O2和CO2張力）和生(sheng)理環境(jing)（即(ji)，激素(su)和營養(yang)物(wu)濃度(du)），其(qi)中(zhong)所述(shu)細胞繁殖(zhi)的能(neng)力。除(chu)溫度(du)，將(jiang)培(pei)養(yang)環境(jing)是由生長(chang)培(pei)養(yang)基進行(xing)控制(zhi)。
對於(yu)培養(yang)，只要(yao)我(wo)們細心操作(zuo)，註意(yi)細節(jie)，並(bing)不(bu)是大(da)家(jia)說(shuo)的那樣困(kun)難。對於(yu)有經(jing)驗(yan)和有條(tiao)件的客戶，建(jian)議(yi)由公司(si)代(dai)為(wei)培(pei)養(yang)細胞及進行(xing)後續(xu)研(yan)究(jiu)。

細胞概述(shu)

細胞(英文(wen)名(ming): cell) 並(bing)沒有統(tong)壹的定(ding)義(yi)，比較普(pu)遍(bian)的提法(fa)是:細胞是生物(wu)體(ti)基本的結構和功(gong)能(neng)單位(wei)。已知除(chu)病毒(du)之(zhi)外的所有生(sheng)物(wu)均由細胞所組成(cheng)，但病毒(du)生命(ming)活(huo)動(dong)也(ye)必須在(zai)細胞中(zhong)才能(neng)體現(xian)。壹般(ban)來說(shuo)， 細菌等絕大(da)部(bu)分微(wei)生(sheng)物(wu)以(yi)及原生動(dong)物(wu)由壹個(ge)細胞組成(cheng)，即(ji)單細胞生物(wu)，高(gao)等植物(wu)與高等動(dong)物(wu)則(ze)是多細胞生物(wu)。細胞可(ke)分為(wei)原核細胞、真核細胞兩類(lei)，但也(ye)有人提出(chu)應分為(wei)三(san)類(lei)，即(ji)把(ba)原屬於原核細胞的古核(he)細胞獨立出(chu)來(lai)作(zuo)為(wei)與之(zhi)並列(lie)的壹 類(lei)。研究(jiu)細胞的學科(ke)稱為(wei)細胞生物(wu)學(xue)。細胞體形(xing)極微(wei)，在(zai)顯(xian)微鏡下始(shi)能(neng)窺(kui)見，形狀(zhuang)多種(zhong)多樣。主(zhu)要(yao)由細胞核與細胞質(zhi)構成，表面(mian)有細胞膜。高(gao)等植物(wu)細胞膜外(wai)有細胞壁，細胞質(zhi)中(zhong)常有質(zhi)體(ti)，體(ti)內(nei)有

葉綠(lv)體(ti)和液(ye)泡，還有線(xian)粒體(ti)。動(dong)物(wu)細胞無細胞壁,細胞質(zhi)中(zhong)常有中(zhong)心體(ti)，而高等植物(wu)細胞中(zhong)則(ze)無。細胞有運動(dong)、營養(yang)和繁殖(zhi)等機能(neng)。

細胞特性(xing):

1)組織來源(yuan)於(yu)實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)的正常胃組織。

2)細胞鑒(jian)定(ding)：廣(guang)譜（PCK）或(huo)細胞-19（CK-19）免疫(yi)熒(ying)光(guang)染(ran)色(se)為(wei)陽(yang)性(xing)。經鑒(jian)定(ding)細胞純度高於(yu)90%。

3)不(bu)含(han)有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母(mu)和真菌。

4)細胞生長(chang)方(fang)式(shi)：鋪(pu)路石(shi)狀(zhuang)細胞，不(bu)規(gui)則(ze)細胞，貼(tie)壁培養(yang)。

產品(pin)規格(ge)：>5×105細胞數(shu)

包裝規格(ge)：1ml凍存(cun)細胞懸液(ye)或(huo)T-25培(pei)養(yang)瓶

操作(zuo)要(yao)點(dian)：

1）將(jiang)培(pei)養(yang)基在(zai)37℃水浴鍋(guo)預(yu)熱；準備壹個(ge)15mL無菌(jun)的離心(xin)管(guan)，加入(ru)8mL預(yu)熱培養(yang)基。

2）將(jiang)凍(dong)存(cun)細胞從液(ye)氮罐(guan)中(zhong)取(qu)出，快(kuai)速放(fang)入(ru)37℃水浴鍋(guo)中(zhong)復溫(wen)（可(ke)準備壹潔凈(jing)的燒杯，裝滿(man)37℃的水，細胞凍存(cun)管(guan)取(qu)出後(hou)迅速放(fang)入(ru)燒杯內，再逐步轉移(yi)到水(shui)浴鍋(guo)中(zhong)）。輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)凍(dong)存(cun)管(guan)，使(shi)細胞能(neng)在(zai)1~2min內解(jie)凍，使(shi)細胞能(neng)盡快(kuai)通過(guo)易受損的溫度(du)段(duan)（-5~0℃）。註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)管(guan)口(kou)不(bu)能(neng)沒入(ru)水中(zhong)，避免(mian)引起汙(wu)染(ran)。

3）用(yong)75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)凍(dong)存(cun)管(guan)後(hou)再(zai)置於超凈臺(tai)內，將(jiang)管(guan)內(nei)細胞轉移(yi)至準備好的離心(xin)管(guan)內(nei)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打液體，使細胞均勻(yun)分散(san)，吹打時避(bi)免產生氣(qi)泡。用(yong)新鮮培養(yang)基洗管(guan)壁(bi)2次(ci)，均轉移(yi)至離心管(guan)內(nei)。

4）800rpm離心(xin)5min，棄(qi)上(shang)清，加入(ru)新鮮的培養(yang)基，吹打(da)制(zhi)成(cheng)細胞懸液(ye)。

5）將(jiang)細胞懸液(ye)轉移(yi)至T25細胞瓶內(nei)，補(bu)加適量的培養(yang)基，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)細胞瓶使(shi)細胞分布(bu)均勻(yun)，放入(ru)溫箱(xiang)內培養(yang)。

6）第二(er)天觀(guan)察(cha)細胞貼(tie)壁生長情(qing)況，換新鮮培養(yang)基以去(qu)除(chu)死細胞。繼續(xu)培(pei)養(yang)，待細胞長至80~90%匯(hui)合時正常傳代(dai)。壹般(ban)剛復(fu)蘇(su)的細胞需經(jing)過(guo)2~3次傳代(dai)，細胞活(huo)力恢(hui)復後(hou)才(cai)能(neng)進行(xing)後續(xu)的實驗(yan)。

細胞培養(yang)操作(zuo)

1）復蘇(su)細胞：將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸液(ye)的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞懸液(ye)加入(ru)含(han)適量培(pei)養(yang)基的培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸液(ye)加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二(er)天換(huan)液並(bing)檢查(zha)細胞密度(du)。

2）細胞傳代(dai)：如果細胞密度(du)達80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使消化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況而定(ding)），然(ran)後在(zai)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細胞消化(hua)情(qing)況，若細胞大(da)部(bu)分變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基終(zhong)止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到新的含(han)8 mL培養(yang)基的新皿中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。

3）細胞凍存(cun)：待細胞生長(chang)狀(zhuang)態良好時，可(ke)進行(xing)細胞凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；

a、收集(ji)細胞，裝入(ru)無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計數(shu)。

b、根據(ju)細胞數(shu)量加入(ru)無血(xue)清(qing)細胞凍存(cun)液，使(shi)細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細胞懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好標(biao)識。

c、將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液氮灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置以便(bian)下(xia)次拿取(qu)。

產品(pin)的運輸(shu)和保存(cun)：

視天(tian)氣(qi)狀(zhuang)況和運輸(shu)距離(li)遠近(jin)，公司(si)與客戶協(xie)商(shang)後選(xuan)擇(ze)下(xia)述(shu)方式(shi)中(zhong)的壹種(zhong)進行(xing)。

1)1mL凍存(cun)細胞懸液(ye)裝(zhuang)於(yu)1.8ml的凍存(cun)管(guan)中(zhong)，置於裝(zhuang)滿(man)幹冰(bing)的泡沫(mo)保溫盒中(zhong)進行(xing)運輸(shu)；收(shou)到細胞後請盡快解凍(dong)復蘇(su)細胞進行(xing)培養(yang)，如無法(fa)立刻(ke)進行(xing)復蘇(su)操(cao)作(zuo)，凍(dong)存(cun)細胞可(ke)在(zai)-80℃的條件(jian)下保存(cun)1個(ge)月。

2)T-25培養(yang)瓶充(chong)滿(man)培養(yang)基後進行(xing)常溫運輸(shu)；收(shou)到細胞後請鏡下觀(guan)察(cha)細胞生長(chang)狀(zhuang)態，如鋪(pu)瓶率(lv)超過(guo)85%請立即(ji)進行(xing)傳代(dai)操作(zuo)，如懸(xuan)浮的細胞較多，請將(jiang)培(pei)養(yang)瓶至於培養(yang)箱中(zhong)靜置過(guo)夜(ye)以幫(bang)助(zhu)未(wei)死亡的懸浮(fu)細胞能(neng)夠再(zai)次貼(tie)壁。

友情(qing)提示(shi)註意(yi)以(yi)下幾(ji)點(dian)：

1、收到細胞後請盡快更(geng)換為(wei)含(han)15%血(xue)清(qing)的新鮮培養(yang)基，如因(yin)特(te)殊情(qing)況需要(yao)繼(ji)續(xu)使(shi)用(yong)原瓶，請在(zai)原瓶培(pei)養(yang)基中(zhong)額(e)外(wai)添(tian)加10%的血(xue)清(qing)

2、貼(tie)壁細胞收到當(dang)天切忌立刻(ke)消化(hua)，請將(jiang)細胞換液(ye)後(hou)放(fang)置培養(yang)箱孵(fu)育(yu)到第(di)二天再(zai)做(zuo)消化(hua)傳代(dai)，請優先選(xuan)擇(ze)直(zhi)徑6cm的培養(yang)皿進行(xing)傳代(dai)培養(yang)

3、如簽(qian)收時出(chu)現培養(yang)瓶壁(bi)破(po)裂(lie)，漏液等情況請及時做(zuo)好照(zhao)片(pian)記錄(lu)並聯(lian)系(xi)實(shi)驗(yan)室

深圳(zhen)瑞(rui)清生(sheng)物(wu)信(xin)息(xi)科(ke)技有限(xian)公司(si)經過(guo)數(shu)年的努(nu)力發(fa)展(zhan)已迅速成(cheng)為(wei)集(ji)產品(pin)研發、經營為(wei)壹(yi)體的專業(ye)化(hua)生(sheng)物(wu)工(gong)程公司(si)。公司(si)具有完(wan)善的實驗(yan)技術開發平臺，成熟的抗原、抗體(ti)研(yan)發系(xi)統(tong)，熟練(lian)掌握(wo)各種(zhong)酶(mei)聯(lian)技術，結合公司(si)的研發(fa)團隊，可(ke)以(yi)有效(xiao)的保證公司(si)產品(pin)強(qiang)的穩定(ding)性(xing)和高(gao)的準確(que)性(xing)，同時又(you)具有競(jing)爭(zheng)力的價格(ge)。 公司(si)主營ELISA試(shi)劑盒，目(mu)前可(ke)以(yi)提供生化(hua)試(shi)劑、分子(zi)生物(wu)學(xue)試(shi)劑及試(shi)劑盒，各(ge)種(zhong)抗(kang)體及免(mian)疫(yi)學試(shi)劑盒、實(shi)驗(yan)耗材等多門(men)類(lei)上萬種(zhong)產(chan)品，產(chan)品(pin)涉(she)及分子(zi)生物(wu)學(xue)、細胞生物(wu)學(xue)、免疫(yi)學(xue)等生命科學的各個(ge)領域。