人髓母(mu)細(xi)胞瘤(liu)組(zu)織(zhi)源(yuan)細胞(bao)

人髓母(mu)細(xi)胞瘤(liu)組(zu)織(zhi)源(yuan)細胞(bao)需要準備(bei)好細(xi)胞所(suo)要用(yong)到(dao)的(de)培(pei)養基和相關(guan)試劑(ji)，雖(sui)然所有的(de)貼壁，半(ban)貼壁或(huo)者(zhe)懸浮(fu)細(xi)胞(bao)處(chu)理(li)方(fang)式差(cha)不(bu)多，但是(shi)不(bu)同(tong)的(de)實驗室(shi)培養條(tiao)件(jian)和處理力(li)度(du)還有(you)試劑(ji)的(de)批間(jian)差(cha)這(zhe)些問題(ti)存(cun)在(zai)，也(ye)會(hui)導(dao)致對細胞處(chu)理不(bu)當，  或(huo)者(zhe)環境(jing)的(de)不(bu)適應(ying)而造成細(xi)胞(bao)的(de)死亡(wang)。
人髓母(mu)細(xi)胞瘤(liu)組(zu)織(zhi)源(yuan)細胞(bao)培養物(wu)的(de)生(sheng)理環境(jing)不同(tong)時(shi)定(ding)義(yi)為其物(wu)理化(hua)學環境(jing)中(zhong)，更(geng)好(hao)地(di)理(li)解(jie)血清(qing)的(de)組(zu)件，所必(bi)需的(de)增(zeng)殖(zhi)的(de)生(sheng)長因子(zi)的(de)鑒定(ding)，並更(geng)好(hao)地(di)理(li)解(jie)細(xi)胞(bao)在(zai)培(pei)養的(de)微(wei)環境(jing)（即，細胞(bao) - 細(xi)胞相互作(zuo)用(yong)，氣體的(de)擴(kuo)散(san)，與(yu)基質相互作(zuo)用(yong)）現(xian)在(zai)允許(xu)在(zai)無(wu)血清(qing)培養基中(zhong)某些細(xi)胞(bao)系的(de)培(pei)養。
培養物(wu)的(de)主要優(you)點是(shi)操(cao)縱物理化(hua)學（即，溫(wen)度(du)，pH，滲透壓，O2和CO2張力(li)）和生(sheng)理環境(jing)（即，激素(su)和營養物(wu)濃(nong)度(du)），其中(zhong)所述(shu)細胞(bao)繁殖的(de)能力(li)。除溫(wen)度(du)，將(jiang)培(pei)養環境(jing)是(shi)由生(sheng)長培(pei)養基進行控制。
對於培養，只(zhi)要我們細心(xin)操作(zuo)，註意(yi)細節，並(bing)不(bu)是(shi)大(da)家(jia)說(shuo)的(de)那(na)樣困(kun)難。對於有經(jing)驗(yan)和有條(tiao)件(jian)的(de)客戶，建議由公(gong)司代(dai)為培養細(xi)胞(bao)及(ji)進行後續研(yan)究(jiu)。

細(xi)胞(bao)概(gai)述(shu)

細(xi)胞(bao)(英(ying)文(wen)名: cell) 並沒(mei)有(you)統(tong)壹的(de)定(ding)義(yi)，比較(jiao)普遍(bian)的(de)提(ti)法是(shi):細(xi)胞(bao)是(shi)生(sheng)物體(ti)基本的(de)結(jie)構和功能單(dan)位。已(yi)知除病(bing)毒(du)之(zhi)外(wai)的(de)所(suo)有生(sheng)物均(jun)由細胞(bao)所(suo)組成，但(dan)病(bing)毒(du)生(sheng)命活(huo)動(dong)也(ye)必(bi)須(xu)在(zai)細(xi)胞(bao)中(zhong)才(cai)能體(ti)現(xian)。壹般(ban)來(lai)說(shuo)， 細(xi)菌等絕(jue)大部分微(wei)生(sheng)物以(yi)及原生(sheng)動(dong)物(wu)由壹個(ge)細胞組成，即單細(xi)胞(bao)生(sheng)物，高等植物(wu)與(yu)高等動(dong)物(wu)則(ze)是(shi)多細胞(bao)生(sheng)物。細(xi)胞可(ke)分(fen)為原核(he)細胞(bao)、真核(he)細胞兩類(lei)，但(dan)也有人提(ti)出應(ying)分為三(san)類(lei)，即把原(yuan)屬(shu)於原(yuan)核細胞的(de)古(gu)核細胞(bao)獨(du)立出來(lai)作(zuo)為與(yu)之(zhi)並列(lie)的(de)壹 類(lei)。研(yan)究(jiu)細(xi)胞的(de)學(xue)科(ke)稱(cheng)為細胞(bao)生(sheng)物學(xue)。細胞體形極微，在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)始(shi)能窺(kui)見，形(xing)狀多種(zhong)多樣。主要由細胞(bao)核(he)與(yu)細胞(bao)質(zhi)構成，表面有細(xi)胞膜。高等植物(wu)細(xi)胞膜外(wai)有(you)細胞(bao)壁(bi)，細(xi)胞質(zhi)中(zhong)常有(you)質(zhi)體，體(ti)內有

葉(ye)綠體和液泡，還有(you)線粒(li)體(ti)。動(dong)物(wu)細(xi)胞(bao)無細(xi)胞(bao)壁(bi),細(xi)胞(bao)質中(zhong)常有(you)中(zhong)心(xin)體，而高等植物(wu)細(xi)胞中(zhong)則(ze)無。細(xi)胞有(you)運動(dong)、營(ying)養和繁殖等機(ji)能。

細(xi)胞(bao)特性(xing):

1)組(zu)織(zhi)來源(yuan)於實驗動(dong)物(wu)的(de)正(zheng)常胃(wei)組(zu)織(zhi)。

2)細(xi)胞(bao)鑒定(ding)：廣(guang)譜(pu)（PCK）或(huo)細胞(bao)-19（CK-19）免疫熒(ying)光染(ran)色(se)為陽性(xing)。經(jing)鑒定(ding)細胞(bao)純(chun)度(du)高於90%。

3)不(bu)含(han)有(you) HIV-1、 HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵母(mu)和真菌。

4)細(xi)胞(bao)生(sheng)長方(fang)式：鋪(pu)路(lu)石狀(zhuang)細(xi)胞(bao)，不規則(ze)細胞(bao)，貼壁培(pei)養。

產(chan)品(pin)規格：>5×105細(xi)胞(bao)數

包裝規(gui)格(ge)：1ml凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)或(huo)T-25培養瓶(ping)

操(cao)作(zuo)要點：

1）將(jiang)培(pei)養基在37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)預熱；準備(bei)壹個(ge)15mL無菌的(de)離(li)心(xin)管，加入8mL預熱培養基。

2）將(jiang)凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)從(cong)液(ye)氮罐(guan)中(zhong)取出，快(kuai)速放入37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)中(zhong)復(fu)溫(wen)（可(ke)準備(bei)壹潔(jie)凈的(de)燒(shao)杯，裝滿(man)37℃的(de)水(shui)，細胞(bao)凍(dong)存(cun)管取出後迅(xun)速放入燒杯內，再(zai)逐(zhu)步轉(zhuan)移到水(shui)浴(yu)鍋(guo)中(zhong)）。輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)凍(dong)存(cun)管，使細(xi)胞能在(zai)1~2min內(nei)解(jie)凍(dong)，使(shi)細胞能盡(jin)快(kuai)通(tong)過(guo)易受損(sun)的(de)溫(wen)度(du)段（-5~0℃）。註意(yi)凍(dong)存(cun)管管口不(bu)能沒(mei)入水(shui)中(zhong)，避(bi)免引起(qi)汙染(ran)。

3）用(yong)75%酒精(jing)擦拭(shi)凍(dong)存(cun)管後再(zai)置(zhi)於(yu)超凈臺內，將(jiang)管內細(xi)胞轉(zhuan)移至準備(bei)好的(de)離(li)心(xin)管內，輕(qing)輕(qing)吹打(da)液體，使細(xi)胞均(jun)勻分(fen)散(san)，吹打(da)時(shi)避(bi)免產生(sheng)氣泡。用(yong)新(xin)鮮(xian)培(pei)養基洗(xi)管壁2次，均轉(zhuan)移至離(li)心(xin)管內。

4）800rpm離(li)心(xin)5min，棄(qi)上清(qing)，加入新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基，吹打(da)制成細(xi)胞(bao)懸液(ye)。

5）將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液轉(zhuan)移至T25細胞瓶內(nei)，補(bu)加(jia)適量的(de)培(pei)養基，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)細(xi)胞(bao)瓶(ping)使細(xi)胞(bao)分(fen)布(bu)均勻，放入溫(wen)箱(xiang)內培(pei)養。

6）第二(er)天(tian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)貼壁生(sheng)長情況(kuang)，換新(xin)鮮(xian)培(pei)養基以(yi)去(qu)除死細(xi)胞(bao)。繼(ji)續培養，待細胞長至80~90%匯(hui)合(he)時(shi)正(zheng)常傳代(dai)。壹般(ban)剛復(fu)蘇(su)的(de)細(xi)胞需經(jing)過(guo)2~3次傳代(dai)，細胞(bao)活力(li)恢復(fu)後才(cai)能進行後續的(de)實驗。

細(xi)胞(bao)培養操(cao)作(zuo)

1）復(fu)蘇(su)細胞：將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養基混合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基後吹勻。然後將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸液(ye)加(jia)入含(han)適量培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約8 mL培養基，培養過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換液(ye)並檢(jian)查細胞(bao)密度(du)。

2）細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如果(guo)細胞(bao)密度(du)達80%-90%，即可(ke)進行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化液(ye)浸潤所有(you)細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情況(kuang)而(er)定(ding)），然後在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大部分變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養基終止消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。

3）細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時(shi)，可(ke)進行細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例；

a、收(shou)集(ji)細胞，裝入無菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細胞(bao)計數。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數量加(jia)入無血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好(hao)標識。

c、將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入液氮灌儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以(yi)便下(xia)次拿(na)取。

產(chan)品(pin)的(de)運(yun)輸和保存(cun)：

視天(tian)氣狀況(kuang)和運輸距離(li)遠近(jin)，公(gong)司與(yu)客戶協商後選(xuan)擇下(xia)述(shu)方(fang)式中(zhong)的(de)壹種(zhong)進行。

1)1mL凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)裝於(yu)1.8ml的(de)凍(dong)存(cun)管中(zhong)，置(zhi)於(yu)裝滿(man)幹冰的(de)泡(pao)沫(mo)保溫(wen)盒中(zhong)進行運輸(shu)；收到細胞後請盡快(kuai)解(jie)凍(dong)復(fu)蘇(su)細胞進行培養，如(ru)無(wu)法(fa)立刻(ke)進行復(fu)蘇(su)操作(zuo)，凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)可(ke)在(zai)-80℃的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)保(bao)存(cun)1個(ge)月。

2)T-25培(pei)養瓶(ping)充(chong)滿(man)培養基後進行常溫(wen)運輸；收到細胞後請鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)，如鋪(pu)瓶(ping)率(lv)超過(guo)85%請立即進行傳代(dai)操作(zuo)，如懸浮(fu)的(de)細(xi)胞較(jiao)多，請將(jiang)培(pei)養瓶(ping)至於培養箱(xiang)中(zhong)靜(jing)置(zhi)過(guo)夜以(yi)幫(bang)助未(wei)死亡(wang)的(de)懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)能夠(gou)再(zai)次貼壁。

友(you)情提(ti)示註意(yi)以(yi)下(xia)幾(ji)點：

1、收(shou)到(dao)細胞後請盡快(kuai)更(geng)換為含(han)15%血清(qing)的(de)新(xin)鮮(xian)培(pei)養基，如因特殊情況(kuang)需(xu)要繼(ji)續使用(yong)原(yuan)瓶(ping)，請在原(yuan)瓶培(pei)養基中(zhong)額(e)外(wai)添加(jia)10%的(de)血清(qing)

2、貼壁細(xi)胞(bao)收到當(dang)天(tian)切忌立刻(ke)消化，請將(jiang)細(xi)胞(bao)換液(ye)後放置(zhi)培(pei)養箱(xiang)孵育(yu)到(dao)第二(er)天(tian)再做(zuo)消(xiao)化傳代(dai)，請優先(xian)選(xuan)擇直(zhi)徑6cm的(de)培(pei)養皿(min)進行傳代(dai)培養

3、如(ru)簽收時(shi)出現(xian)培(pei)養瓶(ping)壁(bi)破裂，漏(lou)液(ye)等(deng)情況(kuang)請及時(shi)做(zuo)好(hao)照片記錄並(bing)聯(lian)系實驗室(shi)

深(shen)圳(zhen)瑞(rui)清(qing)生(sheng)物信息(xi)科(ke)技(ji)有限公(gong)司經(jing)過(guo)數年的(de)努力(li)發(fa)展已(yi)迅(xun)速成為集產(chan)品研(yan)發(fa)、經(jing)營(ying)為壹體的(de)專(zhuan)業化生(sheng)物工程公(gong)司。公(gong)司具(ju)有(you)完(wan)善(shan)的(de)實驗技(ji)術(shu)開(kai)發(fa)平臺，成熟(shu)的(de)抗(kang)原、抗(kang)體研(yan)發(fa)系統(tong)，熟(shu)練(lian)掌握各種(zhong)酶聯(lian)技(ji)術(shu)，結(jie)合公(gong)司的(de)研(yan)發(fa)團(tuan)隊(dui)，可(ke)以(yi)有效(xiao)的(de)保(bao)證公(gong)司產(chan)品(pin)強(qiang)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)和高的(de)準確(que)性(xing)，同時(shi)又具(ju)有(you)競(jing)爭力(li)的(de)價格。 公(gong)司主營(ying)ELISA試劑(ji)盒，目(mu)前(qian)可(ke)以(yi)提(ti)供(gong)生(sheng)化試劑(ji)、分子(zi)生(sheng)物學(xue)試劑(ji)及試劑(ji)盒，各種(zhong)抗(kang)體及(ji)免疫學(xue)試劑(ji)盒、實驗耗(hao)材(cai)等多門類(lei)上(shang)萬種(zhong)產品(pin)，產(chan)品涉及分子(zi)生(sheng)物學(xue)、細胞生(sheng)物學(xue)、免疫學(xue)等(deng)生(sheng)命科(ke)學(xue)的(de)各個(ge)領(ling)域。