人(ren)尿(niao)道(dao)上皮細(xi)胞(bao)

人尿(niao)道(dao)上皮細(xi)胞(bao)需要準(zhun)備好(hao)細(xi)胞(bao)所要用(yong)到(dao)的培(pei)養基和(he)相關試劑(ji)，雖然所有的(de)貼(tie)壁，半貼壁或(huo)者(zhe)懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)處(chu)理方(fang)式(shi)差不(bu)多(duo)，但(dan)是(shi)不(bu)同(tong)的(de)實(shi)驗室(shi)培(pei)養條(tiao)件和(he)處(chu)理力度(du)還(hai)有(you)試(shi)劑(ji)的批間(jian)差這(zhe)些問(wen)題(ti)存(cun)在，也會(hui)導(dao)致對(dui)細(xi)胞(bao)處(chu)理不(bu)當(dang)，  或(huo)者(zhe)環境的(de)不(bu)適(shi)應而造(zao)成(cheng)細(xi)胞(bao)的(de)死亡(wang)。
人尿(niao)道(dao)上皮細(xi)胞(bao)培(pei)養物(wu)的(de)生(sheng)理環境不(bu)同(tong)時定義為(wei)其物(wu)理化學環境中，更(geng)好(hao)地(di)理解血(xue)清的(de)組(zu)件(jian)，所必需的增(zeng)殖的生長(chang)因子的鑒(jian)定，並更(geng)好(hao)地(di)理解細(xi)胞(bao)在培(pei)養的(de)微(wei)環境（即(ji)，細(xi)胞(bao) - 細(xi)胞(bao)相互作用(yong)，氣體(ti)的擴(kuo)散，與基質相互作用(yong)）現(xian)在允許在無血(xue)清培(pei)養基中某(mou)些細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)培(pei)養。
培(pei)養物(wu)的(de)主(zhu)要優(you)點(dian)是(shi)操(cao)縱物(wu)理化學（即(ji)，溫度(du)，pH，滲(shen)透(tou)壓(ya)，O2和(he)CO2張力(li)）和(he)生(sheng)理環境（即(ji)，激(ji)素和(he)營養物(wu)濃(nong)度(du)），其(qi)中所述細(xi)胞(bao)繁(fan)殖的能力。除(chu)溫度(du)，將(jiang)培(pei)養環境是(shi)由(you)生(sheng)長(chang)培(pei)養基進行(xing)控(kong)制(zhi)。
對(dui)於培(pei)養，只(zhi)要我(wo)們細(xi)心(xin)操(cao)作，註(zhu)意(yi)細(xi)節(jie)，並不(bu)是(shi)大家(jia)說的那(na)樣困難(nan)。對(dui)於有經驗(yan)和(he)有(you)條(tiao)件的(de)客戶，建議由(you)公(gong)司(si)代為(wei)培(pei)養細(xi)胞(bao)及(ji)進(jin)行後(hou)續(xu)研(yan)究(jiu)

細(xi)胞(bao)概(gai)述(shu)

細(xi)胞(bao)(英文(wen)名(ming): cell) 並沒(mei)有統壹(yi)的定義，比(bi)較普(pu)遍的提法是(shi):細(xi)胞(bao)是(shi)生(sheng)物(wu)體(ti)基本(ben)的結構(gou)和(he)功(gong)能單位。已(yi)知(zhi)除(chu)病毒之(zhi)外的所有生(sheng)物(wu)均(jun)由(you)細(xi)胞(bao)所組(zu)成(cheng)，但(dan)病毒生(sheng)命(ming)活(huo)動(dong)也必須(xu)在細(xi)胞(bao)中才(cai)能體(ti)現(xian)。壹(yi)般來說， 細(xi)菌(jun)等(deng)絕(jue)大部(bu)分微(wei)生物(wu)以及原生動(dong)物(wu)由(you)壹(yi)個(ge)細(xi)胞(bao)組(zu)成(cheng)，即(ji)單細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)，高等(deng)植(zhi)物(wu)與高等(deng)動(dong)物(wu)則是多細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)。細(xi)胞(bao)可分為(wei)原核(he)細(xi)胞(bao)、真(zhen)核(he)細(xi)胞(bao)兩(liang)類(lei)，但(dan)也(ye)有人提出應分為(wei)三類(lei)，即(ji)把原屬於原核(he)細(xi)胞(bao)的(de)古(gu)核(he)細(xi)胞(bao)獨立(li)出來作(zuo)為(wei)與之並列的(de)壹(yi) 類。研(yan)究(jiu)細(xi)胞(bao)的(de)學(xue)科(ke)稱為(wei)細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學(xue)。細(xi)胞(bao)體(ti)形極(ji)微(wei)，在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)始(shi)能窺見(jian)，形狀(zhuang)多種多樣。主要(yao)由(you)細(xi)胞(bao)核(he)與細(xi)胞(bao)質(zhi)構(gou)成，表面(mian)有細(xi)胞(bao)膜(mo)。高等(deng)植(zhi)物(wu)細(xi)胞(bao)膜(mo)外(wai)有細(xi)胞(bao)壁，細(xi)胞(bao)質(zhi)中常(chang)有(you)質(zhi)體(ti)，體(ti)內(nei)有(you)

葉(ye)綠(lv)體(ti)和(he)液(ye)泡，還(hai)有(you)線粒體(ti)。動(dong)物(wu)細(xi)胞(bao)無(wu)細(xi)胞(bao)壁,細(xi)胞(bao)質(zhi)中常(chang)有(you)中心(xin)體(ti)，而高等(deng)植(zhi)物(wu)細(xi)胞(bao)中則無。細(xi)胞(bao)有(you)運動(dong)、營養和(he)繁(fan)殖等(deng)機(ji)能。

細(xi)胞(bao)特(te)性(xing):

1)組(zu)織(zhi)來源(yuan)於實(shi)驗動(dong)物(wu)的(de)正(zheng)常(chang)胃組(zu)織(zhi)。

2)細(xi)胞(bao)鑒(jian)定：廣譜（PCK）或(huo)細(xi)胞(bao)-19（CK-19）免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)染(ran)色(se)為(wei)陽(yang)性。經鑒(jian)定細(xi)胞(bao)純(chun)度(du)高於90%。

3)不(bu)含有(you) HIV-1、 HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真(zhen)菌(jun)。

4)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)方(fang)式(shi)：鋪路石狀細(xi)胞(bao)，不(bu)規(gui)則細(xi)胞(bao)，貼(tie)壁培(pei)養。

產品規格(ge)：>5×105細(xi)胞(bao)數(shu)

包裝規格：1ml凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或(huo)T-25培(pei)養瓶(ping)

操(cao)作要(yao)點(dian)：

1）將(jiang)培(pei)養基在37℃水(shui)浴鍋預(yu)熱(re)；準(zhun)備壹(yi)個(ge)15mL無菌(jun)的離(li)心(xin)管(guan)，加入(ru)8mL預熱(re)培(pei)養基。

2）將(jiang)凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)從(cong)液氮(dan)罐中取出，快速放入37℃水(shui)浴鍋中復(fu)溫（可準備壹(yi)潔(jie)凈(jing)的燒(shao)杯(bei)，裝滿37℃的水(shui)，細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)取出後(hou)迅速放(fang)入燒(shao)杯(bei)內(nei)，再逐(zhu)步(bu)轉(zhuan)移(yi)到(dao)水(shui)浴鍋中）。輕(qing)輕(qing)晃動(dong)凍(dong)存(cun)管(guan)，使細(xi)胞(bao)能在1~2min內(nei)解(jie)凍(dong)，使細(xi)胞(bao)能盡(jin)快通過(guo)易(yi)受(shou)損(sun)的(de)溫度(du)段(duan)（-5~0℃）。註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)管(guan)口不(bu)能沒(mei)入水(shui)中，避(bi)免引(yin)起汙染。

3）用75%酒精擦拭凍(dong)存(cun)管(guan)後(hou)再置(zhi)於超凈(jing)臺(tai)內(nei)，將(jiang)管(guan)內(nei)細(xi)胞(bao)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)準備好(hao)的(de)離(li)心(xin)管(guan)內(nei)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)液(ye)體(ti)，使細(xi)胞(bao)均(jun)勻分(fen)散(san)，吹打(da)時避(bi)免產生(sheng)氣泡。用(yong)新(xin)鮮培(pei)養基洗(xi)管(guan)壁2次(ci)，均(jun)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)離(li)心(xin)管(guan)內(nei)。

4）800rpm離(li)心(xin)5min，棄上清，加(jia)入(ru)新(xin)鮮的培(pei)養基，吹打(da)制(zhi)成細(xi)胞(bao)懸(xuan)液。

5）將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi)T25細(xi)胞(bao)瓶(ping)內(nei)，補加適(shi)量(liang)的(de)培(pei)養基，輕輕(qing)晃動(dong)細(xi)胞(bao)瓶(ping)使細(xi)胞(bao)分(fen)布均(jun)勻，放(fang)入(ru)溫箱(xiang)內(nei)培(pei)養。

6）第二(er)天觀察(cha)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁生(sheng)長(chang)情況，換(huan)新(xin)鮮培(pei)養基以去除(chu)死細(xi)胞(bao)。繼(ji)續(xu)培(pei)養，待(dai)細(xi)胞(bao)長(chang)至(zhi)80~90%匯合(he)時正常(chang)傳代。壹(yi)般剛復(fu)蘇(su)的細(xi)胞(bao)需經過(guo)2~3次傳代，細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)恢復(fu)後(hou)才(cai)能進行(xing)後(hou)續(xu)的(de)實(shi)驗。

細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作

1）復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中迅速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻。然後(hou)將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入含適(shi)量(liang)培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜）。第二(er)天換(huan)液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2）細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da)80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液於培(pei)養瓶(ping)中，使消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部(bu)分變圓(yuan)並脫落，迅速拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終止(zhi)消(xiao)化。輕輕(qing)打(da)勻後(hou)裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上清液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新的含8 mL培(pei)養基的新(xin)皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。

3）細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態良好(hao)時，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；

a、收集細(xi)胞(bao)，裝入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識。

c、將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置(zhi)以便下(xia)次(ci)拿(na)取。

產品的運輸(shu)和(he)保(bao)存(cun)：

視天(tian)氣狀況(kuang)和(he)運輸(shu)距離(li)遠近，公(gong)司(si)與客戶協商後(hou)選(xuan)擇(ze)下(xia)述(shu)方(fang)式(shi)中的(de)壹(yi)種進行(xing)。

1)1mL凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液裝於1.8ml的凍(dong)存(cun)管(guan)中，置(zhi)於裝滿幹(gan)冰(bing)的泡沫(mo)保(bao)溫盒中進(jin)行(xing)運輸(shu)；收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)請(qing)盡(jin)快解凍(dong)復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)培(pei)養，如(ru)無法立(li)刻(ke)進(jin)行復(fu)蘇(su)操(cao)作，凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)可在-80℃的條(tiao)件下(xia)保(bao)存(cun)1個(ge)月。

2)T-25培(pei)養瓶(ping)充滿(man)培(pei)養基後(hou)進(jin)行(xing)常(chang)溫運輸(shu)；收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)請(qing)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態，如(ru)鋪瓶(ping)率(lv)超過(guo)85%請立(li)即(ji)進行(xing)傳代操(cao)作，如(ru)懸(xuan)浮的細(xi)胞(bao)較多(duo)，請(qing)將(jiang)培(pei)養瓶(ping)至(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中靜置(zhi)過(guo)夜以幫助(zhu)未(wei)死亡(wang)的(de)懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)能夠再次(ci)貼(tie)壁。

友情(qing)提示(shi)註(zhu)意(yi)以下(xia)幾(ji)點(dian)：

1、收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)請(qing)盡(jin)快更(geng)換(huan)為(wei)含15%血(xue)清的(de)新(xin)鮮培(pei)養基，如因特(te)殊情(qing)況需要繼(ji)續(xu)使用(yong)原瓶(ping)，請在原瓶(ping)培(pei)養基中額(e)外添(tian)加(jia)10%的血(xue)清

2、貼壁細(xi)胞(bao)收到(dao)當(dang)天切(qie)忌(ji)立(li)刻(ke)消(xiao)化，請將(jiang)細(xi)胞(bao)換(huan)液(ye)後(hou)放(fang)置(zhi)培(pei)養箱(xiang)孵(fu)育(yu)到(dao)第二(er)天再做消化傳代，請(qing)優(you)先選擇(ze)直(zhi)徑6cm的培(pei)養皿(min)進行(xing)傳代培(pei)養

3、如簽(qian)收時出現(xian)培(pei)養瓶(ping)壁破(po)裂，漏液(ye)等(deng)情(qing)況(kuang)請及時做好(hao)照(zhao)片(pian)記(ji)錄並聯系(xi)實(shi)驗室(shi)

深圳(zhen)瑞清生(sheng)物(wu)信息科(ke)技(ji)有(you)限公司(si)經過(guo)數年的(de)努力(li)發(fa)展(zhan)已(yi)迅速成(cheng)為(wei)集產品研(yan)發(fa)、經營為(wei)壹(yi)體(ti)的專(zhuan)業化生物(wu)工(gong)程(cheng)公司(si)。公(gong)司(si)具(ju)有完(wan)善(shan)的實(shi)驗技(ji)術(shu)開(kai)發(fa)平(ping)臺(tai)，成熟(shu)的抗原、抗體(ti)研(yan)發(fa)系(xi)統(tong)，熟(shu)練(lian)掌(zhang)握各(ge)種酶聯(lian)技(ji)術(shu)，結合(he)公(gong)司(si)的(de)研(yan)發(fa)團隊，可以有效(xiao)的(de)保證公(gong)司(si)產品強(qiang)的(de)穩定性和(he)高的準(zhun)確(que)性，同(tong)時又(you)具(ju)有競爭力的價格(ge)。 公(gong)司(si)主(zhu)營ELISA試劑(ji)盒，目(mu)前(qian)可以提供生(sheng)化試劑(ji)、分子生物(wu)學(xue)試(shi)劑(ji)及試劑(ji)盒，各(ge)種抗體(ti)及免(mian)疫學試劑(ji)盒、實(shi)驗耗材(cai)等(deng)多(duo)門類上萬(wan)種產品，產品涉(she)及分(fen)子生物(wu)學(xue)、細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學(xue)、免(mian)疫學(xue)等(deng)生(sheng)命(ming)科(ke)學的各個(ge)領域(yu)。