人食管平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞

人(ren)食(shi)管平滑(hua)肌(ji)細胞需(xu)要(yao)準(zhun)備好細胞所要(yao)用到(dao)的培(pei)養基和相關(guan)試劑(ji)，雖(sui)然(ran)所有(you)的(de)貼壁，半(ban)貼(tie)壁或(huo)者(zhe)懸(xuan)浮(fu)細胞處理(li)方式差(cha)不多，但是(shi)不同(tong)的實(shi)驗(yan)室培(pei)養條件(jian)和處(chu)理(li)力度還(hai)有(you)試劑(ji)的(de)批間差(cha)這(zhe)些問(wen)題存在(zai)，也會導致(zhi)對細胞處理(li)不當，  或(huo)者(zhe)環(huan)境的(de)不適應(ying)而(er)造(zao)成(cheng)細胞的死亡。
人(ren)食(shi)管平滑(hua)肌(ji)細胞培(pei)養物的生(sheng)理(li)環(huan)境不同(tong)時定(ding)義(yi)為(wei)其(qi)物(wu)理(li)化(hua)學(xue)環(huan)境中，更好地理(li)解血(xue)清的組件(jian)，所必需(xu)的增(zeng)殖的(de)生(sheng)長因子(zi)的(de)鑒(jian)定(ding)，並(bing)更(geng)好地理(li)解細胞在(zai)培(pei)養的微(wei)環(huan)境（即，細胞 - 細胞相互作(zuo)用，氣(qi)體(ti)的(de)擴(kuo)散(san)，與基(ji)質(zhi)相互作(zuo)用）現(xian)在(zai)允許(xu)在(zai)無(wu)血(xue)清培(pei)養基中某(mou)些細胞系的培(pei)養。
培(pei)養物的主(zhu)要(yao)優(you)點(dian)是(shi)操縱物(wu)理(li)化(hua)學(xue)（即，溫(wen)度，pH，滲(shen)透(tou)壓(ya)，O2和CO2張(zhang)力）和生(sheng)理(li)環(huan)境（即，激素(su)和營(ying)養物濃度），其(qi)中所述細胞繁殖的(de)能(neng)力。除(chu)溫(wen)度，將培(pei)養環(huan)境是(shi)由生(sheng)長培(pei)養基進行(xing)控(kong)制(zhi)。
對於(yu)培(pei)養，只(zhi)要(yao)我們細心(xin)操作(zuo)，註(zhu)意(yi)細節，並(bing)不是大(da)家(jia)說的那(na)樣(yang)困難。對於(yu)有(you)經(jing)驗和有(you)條件(jian)的客(ke)戶(hu)，建(jian)議(yi)由(you)公司(si)代為培(pei)養細胞及進行(xing)後續(xu)研(yan)究。

細胞復蘇技術(shu)：

1. 取(qu)出細胞，迅速放(fang)入(ru)37℃溫(wen)水中快(kuai)速解凍(dong)

2. 吸(xi)出細胞懸(xuan)液(ye),並(bing)加10倍以上培(pei)養液(ye)

3. 1000r/分鐘離(li)心(xin)5分鐘，去除上清

4. 用培(pei)養液(ye)適當稀(xi)釋(shi)後接(jie)種(zhong)培(pei)養瓶(ping),放(fang)入(ru)37℃ CO2培(pei)養箱靜置培(pei)養

5. 鏡(jing)檢(jian)細胞貼壁能(neng)力，次(ci)日更(geng)換(huan)壹(yi)次(ci)培(pei)養液(ye),繼(ji)續(xu)培(pei)養

培(pei)養方法：

收(shou)到(dao)細胞後，在(zai)倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)整個(ge)細胞生(sheng)長情(qing)況(kuang)：

如(ru)果(guo)細胞未長滿(man)，用75%酒(jiu)精噴灑整(zheng)個(ge)瓶(ping)消(xiao)毒(du)後放(fang)到(dao)超菌臺(tai)內(nei)，嚴(yan)格(ge)無(wu)菌操作(zuo)，打(da)開(kai)細胞培(pei)養瓶(ping)，留(liu)10ml培(pei)養液(ye)繼(ji)續(xu)培(pei)養。

如(ru)果(guo)細胞已長滿(man)（達80-90%）。即可進行(xing)傳(chuan)代，具體步驟(zhou)如下(xia)：

a，棄去(qu)培(pei)養液(ye)，用PBS洗(xi)1-2次(ci)。

b，向(xiang)瓶(ping)內(nei)加入1.0-2.0ml酶(mei)液(ye)，在(zai)倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞大部(bu)分變圓，迅速拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，吸(xi)取(qu)酶，加含有(you)6ml 含10%血清的培(pei)養液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞。

c，加入等量(liang)的(de)的培(pei)養液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打混勻(yun)後吸(xi)出壹(yi)半(ban)，分到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養

d，傳(chuan)代比例(li)：1:2-1:3

保存和應(ying)用：

客(ke)戶(hu)可(ke)以根(gen)據(ju)自己(ji)的(de)需(xu)求(qiu)選擇(ze)新(xin)鮮(xian)或(huo)者(zhe)凍存的原(yuan)代細胞，如是新(xin)鮮(xian)原(yuan)代細胞，客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後應立即將其(qi)放(fang)入(ru)CO2細胞培(pei)養箱內靜置後2-3h，再進行(xing)後續(xu)的(de)實驗操作(zuo)。如(ru)是(shi)凍(dong)存細胞，客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後應立即將其(qi)放(fang)入(ru)液(ye)氮、-80℃冰箱或(huo)立即進行(xing)復蘇。

細胞復蘇的原(yuan)則：

在(zai)實際(ji)操作(zuo)中，凍存細胞要(yao)進行(xing)復蘇，再培(pei)養傳(chuan)代。復蘇細胞壹般(ban)采(cai)用快(kuai)速融化(hua)法(fa)。以保證細胞外(wai)結晶(jing)快(kuai)速融化(hua)，以避(bi)免慢(man)速融化(hua)水(shui)分滲入細胞內，再次(ci)形成(cheng)胞內(nei)結(jie)晶(jing)損傷(shang)細胞。

1）該細胞只(zhi)能(neng)用於(yu)科研(yan)，不得用於(yu)臨(lin)床(chuang)。

2）收(shou)到(dao)細胞後首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶(ping)是(shi)否完好，培(pei)養液(ye)是(shi)否有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁等現(xian)象(xiang)，若有(you)上述現(xian)象(xiang)發生(sheng)請(qing)及時和我們聯(lian)系。

3）仔(zai)細閱讀(du)細胞說明(ming)書，了解細胞相關(guan)信(xin)息(xi)，如細胞形態、所用培(pei)養基、血清比例(li)、所需(xu)細胞因子(zi)等。

4）用75%酒(jiu)精擦拭細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞狀態(tai)。因運輸(shu)問題(ti)貼壁細胞會有(you)少量(liang)從(cong)瓶(ping)壁脫(tuo)落(luo)，將細胞置於(yu)培(pei)養箱內靜置培(pei)養過夜(ye)，隔天再取(qu)出觀察(cha)。此時(shi)多數細胞均會貼壁，若(ruo)細胞仍不能(neng)貼壁請(qing)用臺(tai)盼(pan)藍染色(se)測(ce)定(ding)細胞活力，如果(guo)證實(shi)細胞活力正常(chang)，請(qing)將細胞離(li)心(xin)後用新(xin)鮮(xian)培(pei)養基再次(ci)貼壁培(pei)養；如果(guo)染色(se)結(jie)果(guo)顯示(shi)細胞無(wu)活(huo)力(li)，請(qing)拍(pai)下(xia)照片(pian)及時和我們聯(lian)系，信(xin)息(xi)確認(ren)後我們為您再免(mian)費寄(ji)送壹次(ci)。

5）請(qing)客(ke)戶(hu)用相同(tong)條件(jian)的培(pei)養基用於(yu)細胞培(pei)養。培(pei)養瓶(ping)內(nei)多余(yu)的(de)培(pei)養基可收(shou)集(ji)備用，細胞傳(chuan)代時(shi)可(ke)以壹(yi)定(ding)比例(li)和客(ke)戶(hu)自備的培(pei)養基混合(he)，使細胞逐(zhu)漸(jian)適應(ying)培(pei)養條件(jian);建議(yi)直接(jie)購(gou)買(mai)我司(si)提(ti)供(gong)的(de)培(pei)養基。

6）建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後qian3天各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞照片，記(ji)錄細胞狀態(tai)，便於(yu)和我司(si)技術(shu)部(bu)溝通交流(liu)。

細胞培(pei)養操作(zuo)

1）復蘇細胞：將含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管(guan)在(zai) 37℃水浴中迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後吹勻。然(ran)後將所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加入含適量(liang)培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將細胞懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿中，加入約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜(ye)）。第(di)二天換液(ye)並(bing)檢查細胞密度。

2）細胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞密度達80%-90%，即可進行(xing)傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上清，用不含鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)培(pei)養瓶(ping)中，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤(run)所有(you)細胞，將培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況而定(ding)），然(ran)後在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞大部(bu)分變圓並(bing)脫(tuo)落，迅速拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上清液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養基的新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養箱中培(pei)養。

3）細胞凍存：待細胞生(sheng)長狀態(tai)良好時，可(ke)進行(xing)細胞凍存。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；

a、收(shou)集(ji)細胞，裝(zhuang)入無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清液(ye)，用PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進行(xing)細胞計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細胞數量(liang)加入無(wu)血(xue)清細胞凍存液(ye)，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好標識(shi)。

c、將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌(guan)儲存。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管位置以便下(xia)次(ci)拿取(qu)。

深(shen)圳瑞清生(sheng)物信(xin)息(xi)科技有(you)限(xian)公司(si)經過數年(nian)的(de)努力(li)發展(zhan)已迅速成(cheng)為集(ji)產(chan)品(pin)研發、經(jing)營為(wei)壹(yi)體的專(zhuan)業化(hua)生(sheng)物工程公司(si)。公司(si)具有(you)完善的(de)實(shi)驗(yan)技術(shu)開發平(ping)臺(tai)，成(cheng)熟的(de)抗原(yuan)、抗體(ti)研發系(xi)統(tong)，熟練掌(zhang)握各(ge)種酶(mei)聯(lian)技術(shu)，結合(he)公司(si)的研發團(tuan)隊(dui)，可以有(you)效(xiao)的(de)保證公司(si)產品(pin)強的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)和高(gao)的準(zhun)確性(xing)，同(tong)時又具有(you)競(jing)爭力(li)的價格(ge)。 公司(si)主(zhu)營(ying)ELISA試劑(ji)盒(he)，目(mu)前可以提(ti)供(gong)生(sheng)化(hua)試劑(ji)、分子(zi)生(sheng)物學(xue)試劑(ji)及(ji)試劑(ji)盒(he)，各(ge)種抗(kang)體(ti)及(ji)免疫學(xue)試劑(ji)盒(he)、實驗(yan)耗(hao)材(cai)等多門(men)類上萬(wan)種產(chan)品(pin)，產品(pin)涉及(ji)分子(zi)生(sheng)物學(xue)、細胞生(sheng)物學(xue)、免疫學(xue)等生(sheng)命科(ke)學的(de)各(ge)個領(ling)域(yu)。