人胃(wei)粘(zhan)膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)

人(ren)胃粘(zhan)膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)需(xu)要準(zhun)備好(hao)細(xi)胞(bao)所要(yao)用(yong)到的(de)培(pei)養(yang)基(ji)和相(xiang)關(guan)試(shi)劑(ji)，雖(sui)然(ran)所有(you)的(de)貼壁，半貼壁或(huo)者(zhe)懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)處理(li)方(fang)式差不(bu)多(duo)，但(dan)是(shi)不(bu)同(tong)的實(shi)驗(yan)室培(pei)養(yang)條件(jian)和處(chu)理(li)力度(du)還有(you)試劑的批(pi)間差這些(xie)問(wen)題存在(zai)，也會(hui)導致對(dui)細(xi)胞(bao)處理(li)不當，  或(huo)者(zhe)環境(jing)的不(bu)適應(ying)而(er)造成細(xi)胞(bao)的死(si)亡。
人(ren)胃粘(zhan)膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)物(wu)的(de)生(sheng)理(li)環境不(bu)同(tong)時(shi)定義為(wei)其(qi)物理(li)化學環(huan)境(jing)中，更(geng)好(hao)地(di)理(li)解(jie)血(xue)清的組(zu)件(jian)，所必(bi)需(xu)的增(zeng)殖的(de)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)鑒定，並更(geng)好(hao)地(di)理(li)解(jie)細(xi)胞(bao)在(zai)培(pei)養(yang)的(de)微(wei)環境（即(ji)，細(xi)胞(bao) - 細(xi)胞(bao)相(xiang)互(hu)作用(yong)，氣體(ti)的(de)擴(kuo)散，與(yu)基質(zhi)相(xiang)互(hu)作用(yong)）現(xian)在(zai)允許(xu)在(zai)無血(xue)清培(pei)養(yang)基(ji)中某些(xie)細(xi)胞(bao)系的(de)培(pei)養(yang)。
培(pei)養(yang)物(wu)的(de)主要優(you)點是(shi)操(cao)縱(zong)物理化(hua)學（即(ji)，溫(wen)度(du)，pH，滲透壓(ya)，O2和CO2張(zhang)力）和生(sheng)理(li)環境（即(ji)，激素和營(ying)養(yang)物(wu)濃(nong)度），其(qi)中所述(shu)細(xi)胞(bao)繁殖(zhi)的能力。除(chu)溫(wen)度(du)，將(jiang)培(pei)養(yang)環(huan)境(jing)是由生(sheng)長(chang)培(pei)養(yang)基(ji)進(jin)行控制。
對(dui)於培(pei)養(yang)，只(zhi)要(yao)我們細(xi)心操(cao)作，註意(yi)細(xi)節(jie)，並(bing)不是大(da)家說(shuo)的那(na)樣(yang)困(kun)難。對(dui)於有(you)經驗(yan)和有(you)條件(jian)的(de)客戶，建議(yi)由公(gong)司代為(wei)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)及(ji)進(jin)行(xing)後(hou)續(xu)研究(jiu)。

細(xi)胞(bao)復蘇(su)技術(shu)：

1. 取出細(xi)胞(bao)，迅速放(fang)入(ru)37℃溫(wen)水(shui)中快速解凍(dong)

2. 吸出(chu)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液,並加(jia)10倍(bei)以(yi)上(shang)培(pei)養(yang)液

3. 1000r/分(fen)鐘(zhong)離心5分(fen)鐘(zhong)，去除(chu)上(shang)清

4. 用(yong)培(pei)養(yang)液適當稀(xi)釋後接(jie)種培(pei)養(yang)瓶(ping),放(fang)入(ru)37℃ CO2培(pei)養(yang)箱(xiang)靜(jing)置(zhi)培(pei)養(yang)

5. 鏡(jing)檢細(xi)胞(bao)貼壁能力，次日(ri)更(geng)換(huan)壹次培(pei)養(yang)液,繼續(xu)培(pei)養(yang)

培(pei)養(yang)方(fang)法：

收(shou)到細(xi)胞(bao)後，在(zai)倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察整(zheng)個細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)情況：

如果細(xi)胞(bao)未長(chang)滿，用(yong)75%酒(jiu)精噴灑整個瓶(ping)消(xiao)毒(du)後(hou)放(fang)到超(chao)菌(jun)臺內(nei)，嚴(yan)格(ge)無菌(jun)操(cao)作，打開(kai)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)瓶(ping)，留(liu)10ml培(pei)養(yang)液繼續(xu)培(pei)養(yang)。

如果細(xi)胞(bao)已長(chang)滿（達(da)80-90%）。即(ji)可(ke)進行(xing)傳代，具(ju)體(ti)步驟(zhou)如(ru)下(xia)：

a，棄去培(pei)養(yang)液，用(yong)PBS洗(xi)1-2次。

b，向(xiang)瓶(ping)內(nei)加(jia)入(ru)1.0-2.0ml酶(mei)液，在(zai)倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化(hua)情況，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作臺，吸取(qu)酶(mei)，加(jia)含有(you)6ml 含(han)10%血(xue)清的培(pei)養(yang)液，輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)。

c，加(jia)入(ru)等量(liang)的(de)的(de)培(pei)養(yang)液，輕輕吹(chui)打混勻後吸出(chu)壹半，分(fen)到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)

d，傳代比例：1:2-1:3

保存和應(ying)用(yong)：

客戶可(ke)以(yi)根(gen)據自己(ji)的需(xu)求選(xuan)擇(ze)新鮮或(huo)者(zhe)凍存的(de)原代細(xi)胞(bao)，如是(shi)新鮮原代細(xi)胞(bao)，客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後應(ying)立(li)即(ji)將(jiang)其(qi)放(fang)入(ru)CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)箱(xiang)內(nei)靜置(zhi)後(hou)2-3h，再(zai)進(jin)行後續(xu)的實(shi)驗(yan)操(cao)作。如是(shi)凍(dong)存細(xi)胞(bao)，客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後應(ying)立(li)即(ji)將(jiang)其(qi)放(fang)入(ru)液氮、-80℃冰(bing)箱或(huo)立(li)即(ji)進(jin)行(xing)復蘇(su)。

細(xi)胞(bao)復蘇(su)的(de)原(yuan)則(ze)：

在(zai)實際(ji)操(cao)作中，凍存細(xi)胞(bao)要進(jin)行復蘇(su)，再(zai)培(pei)養(yang)傳代。復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)壹般采用(yong)快速融化法。以(yi)保(bao)證細(xi)胞(bao)外結(jie)晶快速融化，以(yi)避(bi)免慢(man)速融化水(shui)分(fen)滲入(ru)細(xi)胞(bao)內，再(zai)次形(xing)成胞(bao)內結(jie)晶損傷細(xi)胞(bao)。

1）該(gai)細(xi)胞(bao)只能用(yong)於科研(yan)，不得用(yong)於臨床(chuang)。

2）收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏(lou)液、渾濁等現(xian)象(xiang)，若有上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang)發生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系。

3）仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清比例、所需(xu)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等。

4）用(yong)75%酒(jiu)精擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題貼(tie)壁細(xi)胞(bao)會(hui)有少(shao)量(liang)從瓶(ping)壁脫(tuo)落(luo)，將(jiang)細(xi)胞(bao)置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)內(nei)靜置(zhi)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)，隔天(tian)再取(qu)出觀(guan)察。此時(shi)多(duo)數細(xi)胞(bao)均(jun)會(hui)貼壁，若細(xi)胞(bao)仍不(bu)能貼壁請(qing)用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染色(se)測(ce)定細(xi)胞(bao)活力，如(ru)果證(zheng)實細(xi)胞(bao)活力正(zheng)常，請(qing)將細(xi)胞(bao)離心後用(yong)新鮮培(pei)養(yang)基(ji)再(zai)次貼(tie)壁培(pei)養(yang)；如(ru)果(guo)染色結(jie)果(guo)顯示(shi)細(xi)胞(bao)無活力，請(qing)拍下(xia)照片及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系，信(xin)息確(que)認後我(wo)們為(wei)您(nin)再(zai)免(mian)費寄送(song)壹次。

5）請(qing)客戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。培(pei)養(yang)瓶(ping)內(nei)多(duo)余的培(pei)養(yang)基(ji)可(ke)收(shou)集備用(yong)，細(xi)胞(bao)傳代時(shi)可(ke)以(yi)壹定比例和客(ke)戶自備的(de)培(pei)養(yang)基(ji)混合，使(shi)細(xi)胞(bao)逐漸(jian)適應(ying)培(pei)養(yang)條件(jian);建(jian)議(yi)直接(jie)購買我(wo)司提供(gong)的培(pei)養(yang)基(ji)。

6）建議(yi)客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後qian3天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於和我(wo)司技術(shu)部(bu)溝(gou)通交流(liu)。

細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1）復蘇(su)細(xi)胞(bao)：將含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心3 min，棄去上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二天(tian)換(huan)液並檢查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2）細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度(du)達(da)80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使消化液浸潤(run)所有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而定），然(ran)後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化(hua)情況，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作臺，輕敲幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。輕輕打勻後裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上(shang)清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例分(fen)到新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。

3）細(xi)胞(bao)凍存：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍存。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例；

a、收(shou)集細(xi)胞(bao)，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心4 min，棄去上(shang)清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據細(xi)胞(bao)數量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清細(xi)胞(bao)凍存液，使細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好(hao)標識(shi)。

c、將凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入(ru)液氮灌(guan)儲存。記(ji)錄凍(dong)存管位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿(na)取。

深圳瑞(rui)清生(sheng)物(wu)信(xin)息科技有限(xian)公(gong)司經過數年的努力發(fa)展已(yi)迅(xun)速成為(wei)集產(chan)品(pin)研發、經(jing)營(ying)為(wei)壹體(ti)的(de)專業(ye)化(hua)生(sheng)物(wu)工(gong)程(cheng)公(gong)司。公(gong)司具有完(wan)善(shan)的(de)實(shi)驗(yan)技術(shu)開(kai)發(fa)平(ping)臺，成熟(shu)的(de)抗(kang)原(yuan)、抗體(ti)研(yan)發系統(tong)，熟(shu)練(lian)掌(zhang)握(wo)各(ge)種(zhong)酶(mei)聯(lian)技術(shu)，結(jie)合(he)公(gong)司的研發(fa)團(tuan)隊(dui)，可(ke)以(yi)有(you)效的(de)保證(zheng)公(gong)司產品強的(de)穩(wen)定性(xing)和高(gao)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)，同(tong)時(shi)又具有(you)競爭力的(de)價格(ge)。 公(gong)司主營(ying)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)，目(mu)前可(ke)以(yi)提(ti)供(gong)生(sheng)化(hua)試劑、分(fen)子生(sheng)物(wu)學試(shi)劑(ji)及(ji)試(shi)劑(ji)盒(he)，各(ge)種(zhong)抗體(ti)及(ji)免(mian)疫(yi)學試(shi)劑(ji)盒(he)、實(shi)驗(yan)耗(hao)材(cai)等多(duo)門類(lei)上(shang)萬(wan)種產品(pin)，產品涉(she)及(ji)分(fen)子生(sheng)物(wu)學、細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學、免(mian)疫(yi)學等生(sheng)命(ming)科(ke)學的(de)各(ge)個領(ling)域(yu)。