人淋(lin)巴(ba)內皮細胞(bao)

人淋(lin)巴(ba)內皮細胞(bao)需要準(zhun)備(bei)好細(xi)胞(bao)所要用(yong)到(dao)的(de)培養基和(he)相關(guan)試劑，雖(sui)然所有(you)的(de)貼(tie)壁(bi)，半貼(tie)壁(bi)或者懸浮(fu)細(xi)胞(bao)處(chu)理(li)方(fang)式(shi)差(cha)不(bu)多(duo)，但(dan)是(shi)不(bu)同的(de)實(shi)驗(yan)室培(pei)養(yang)條件(jian)和處(chu)理(li)力(li)度還(hai)有(you)試劑的(de)批(pi)間差(cha)這(zhe)些(xie)問題(ti)存(cun)在(zai)，也(ye)會(hui)導致對(dui)細(xi)胞(bao)處(chu)理(li)不(bu)當，  或者環(huan)境(jing)的(de)不適應而(er)造(zao)成(cheng)細(xi)胞(bao)的(de)死(si)亡。
人淋(lin)巴(ba)內皮細胞(bao)培養物的(de)生(sheng)理環(huan)境(jing)不同時(shi)定義為(wei)其(qi)物理(li)化(hua)學環(huan)境(jing)中，更好(hao)地(di)理解(jie)血(xue)清的(de)組件(jian)，所必(bi)需的(de)增殖的(de)生(sheng)長因子的(de)鑒定，並更好(hao)地(di)理解(jie)細(xi)胞(bao)在培(pei)養的(de)微環(huan)境(jing)（即，細(xi)胞(bao) - 細胞(bao)相互(hu)作用，氣(qi)體的(de)擴散(san)，與(yu)基質(zhi)相互(hu)作用）現在允許在無(wu)血清培(pei)養(yang)基中(zhong)某些細(xi)胞(bao)系的(de)培養。
培養物的(de)主(zhu)要優點(dian)是操(cao)縱物理(li)化(hua)學（即，溫度，pH，滲(shen)透壓，O2和(he)CO2張(zhang)力(li)）和生(sheng)理環(huan)境(jing)（即，激素和營養(yang)物濃(nong)度(du)），其(qi)中(zhong)所(suo)述(shu)細(xi)胞(bao)繁(fan)殖(zhi)的(de)能力(li)。除溫度，將培養(yang)環(huan)境(jing)是由生(sheng)長培養基進行控(kong)制(zhi)。
對(dui)於培養(yang)，只要我(wo)們細心(xin)操(cao)作，註意細節(jie)，並不是(shi)大(da)家(jia)說的(de)那樣困難(nan)。對(dui)於有(you)經(jing)驗(yan)和(he)有(you)條件(jian)的(de)客戶(hu)，建(jian)議由公司代為(wei)培(pei)養(yang)細胞(bao)及(ji)進行後(hou)續研究(jiu)。

細胞(bao)復蘇技(ji)術：

1. 取出(chu)細胞(bao)，迅速(su)放入37℃溫水中快速(su)解凍(dong)

2. 吸(xi)出(chu)細胞(bao)懸液(ye),並加10倍以上(shang)培養(yang)液(ye)

3. 1000r/分(fen)鐘(zhong)離(li)心(xin)5分(fen)鐘(zhong)，去(qu)除上(shang)清

4. 用培(pei)養液(ye)適當稀釋後接種培(pei)養瓶(ping),放(fang)入37℃ CO2培(pei)養(yang)箱靜(jing)置培養

5. 鏡檢(jian)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力(li)，次(ci)日更換(huan)壹次(ci)培(pei)養(yang)液(ye),繼(ji)續培(pei)養(yang)

培養(yang)方法：

收到(dao)細(xi)胞(bao)後，在(zai)倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)整(zheng)個細(xi)胞(bao)生(sheng)長情況(kuang)：

如(ru)果細胞(bao)未長滿，用75%酒精(jing)噴(pen)灑(sa)整(zheng)個瓶(ping)消毒後放(fang)到(dao)超(chao)菌(jun)臺(tai)內，嚴格無(wu)菌(jun)操(cao)作，打開(kai)細(xi)胞(bao)培養(yang)瓶，留(liu)10ml培養液(ye)繼(ji)續培(pei)養(yang)。

如(ru)果細胞(bao)已長滿（達80-90%）。即可(ke)進行傳代，具體步驟如(ru)下：

a，棄去(qu)培養(yang)液(ye)，用(yong)PBS洗(xi)1-2次(ci)。

b，向瓶(ping)內加入1.0-2.0ml酶(mei)液(ye)，在(zai)倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺，吸(xi)取酶(mei)，加(jia)含(han)有(you)6ml 含(han)10%血(xue)清的(de)培養液(ye)，輕(qing)輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)。

c，加入等(deng)量(liang)的(de)的(de)培養液(ye)，輕(qing)輕吹(chui)打混(hun)勻後(hou)吸(xi)出(chu)壹半(ban)，分(fen)到(dao)新(xin)的(de)培養

d，傳代比例(li)：1:2-1:3

保存(cun)和應用：

客戶(hu)可(ke)以根據(ju)自己(ji)的(de)需求選擇(ze)新(xin)鮮(xian)或者凍(dong)存(cun)的(de)原(yuan)代細胞(bao)，如(ru)是(shi)新(xin)鮮(xian)原(yuan)代細胞(bao)，客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後應立即(ji)將(jiang)其放入CO2細胞(bao)培養(yang)箱內靜置後2-3h，再(zai)進行後(hou)續的(de)實(shi)驗(yan)操(cao)作。如(ru)是(shi)凍(dong)存細(xi)胞(bao)，客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後應立即(ji)將(jiang)其放入液(ye)氮、-80℃冰(bing)箱(xiang)或立即(ji)進(jin)行復蘇。

細胞(bao)復蘇的(de)原(yuan)則：

在實(shi)際(ji)操(cao)作中，凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)要進(jin)行復蘇，再(zai)培養(yang)傳代。復蘇細(xi)胞(bao)壹般采用快(kuai)速(su)融化(hua)法(fa)。以保(bao)證細(xi)胞(bao)外結(jie)晶快(kuai)速(su)融化(hua)，以避免(mian)慢(man)速(su)融化(hua)水(shui)分(fen)滲(shen)入細(xi)胞(bao)內，再(zai)次(ci)形(xing)成(cheng)胞(bao)內結晶損傷細胞(bao)。

1）該(gai)細(xi)胞(bao)只能用於科(ke)研，不得用於臨床(chuang)。

2）收到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶是(shi)否完(wan)好，培養(yang)液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現象，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象發(fa)生(sheng)請及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系。

3）仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所用培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例(li)、所需細(xi)胞(bao)因子等(deng)。

4）用75%酒精(jing)擦拭細胞(bao)瓶表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸(shu)問題(ti)貼(tie)壁(bi)細胞(bao)會(hui)有(you)少(shao)量從(cong)瓶(ping)壁(bi)脫落(luo)，將細(xi)胞(bao)置於培養(yang)箱內靜置培養過(guo)夜，隔天再(zai)取出(chu)觀(guan)察(cha)。此時多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)均會(hui)貼(tie)壁(bi)，若細(xi)胞(bao)仍(reng)不能(neng)貼(tie)壁(bi)請用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)測(ce)定細胞(bao)活力(li)，如(ru)果證實(shi)細(xi)胞(bao)活力(li)正常(chang)，請(qing)將(jiang)細胞(bao)離(li)心(xin)後用(yong)新(xin)鮮(xian)培(pei)養(yang)基(ji)再(zai)次(ci)貼(tie)壁(bi)培養(yang)；如(ru)果染(ran)色(se)結(jie)果顯示(shi)細(xi)胞(bao)無(wu)活力(li)，請拍下照片及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系，信(xin)息確認(ren)後我(wo)們為(wei)您(nin)再(zai)免費寄(ji)送壹次(ci)。

5）請客(ke)戶(hu)用(yong)相同條件(jian)的(de)培養基用(yong)於細胞(bao)培養(yang)。培養(yang)瓶內多(duo)余的(de)培養基可(ke)收集備用(yong)，細胞(bao)傳代時可(ke)以壹定比例和客(ke)戶(hu)自備(bei)的(de)培養基混(hun)合，使細(xi)胞(bao)逐漸(jian)適應培養(yang)條件(jian);建議直接購買(mai)我司提(ti)供(gong)的(de)培養基。

6）建議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後qian3天(tian)各(ge)拍幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便於和我(wo)司技(ji)術部(bu)溝(gou)通交流。

細胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1）復蘇細(xi)胞(bao)：將含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸液(ye)的(de)凍存管在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混合(he)均勻。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基(ji)後吹(chui)勻。然後將所有(you)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入含(han)適量(liang)培養(yang)基的(de)培養瓶中(zhong)培養過(guo)夜（或將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2）細胞(bao)傳代：如(ru)果細胞(bao)密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)培(pei)養瓶中(zhong)，使消化(hua)液(ye)浸潤(run)所(suo)有(you)細胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置於37℃培養(yang)箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況(kuang)而(er)定），然後在顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培養基(ji)終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後裝入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中或者瓶(ping)中(zhong)，置於培養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。

3）細胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態良好時(shi)，可進行細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；

a、收集細胞(bao)，裝入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據(ju)細胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血清細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存(cun)管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液(ye)，註意凍存管做(zuo)好標識。

c、將凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以便(bian)下次(ci)拿(na)取。

深圳(zhen)瑞(rui)清生(sheng)物信(xin)息科(ke)技(ji)有(you)限公(gong)司經(jing)過(guo)數(shu)年(nian)的(de)努(nu)力(li)發展已迅速(su)成為(wei)集產(chan)品(pin)研發、經(jing)營(ying)為(wei)壹體的(de)專(zhuan)業(ye)化(hua)生(sheng)物工(gong)程公(gong)司。公(gong)司具(ju)有(you)完善的(de)實(shi)驗(yan)技(ji)術開(kai)發(fa)平臺，成(cheng)熟(shu)的(de)抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體研發系統，熟(shu)練掌握(wo)各(ge)種(zhong)酶(mei)聯(lian)技(ji)術，結(jie)合(he)公司的(de)研發團隊(dui)，可(ke)以有(you)效的(de)保證公(gong)司產(chan)品(pin)強的(de)穩定性(xing)和(he)高(gao)的(de)準(zhun)確性(xing)，同時(shi)又(you)具有(you)競爭力(li)的(de)價格。 公(gong)司主(zhu)營ELISA試劑盒(he)，目前(qian)可(ke)以提(ti)供(gong)生(sheng)化(hua)試劑、分(fen)子生(sheng)物學試劑及(ji)試劑盒(he)，各(ge)種(zhong)抗(kang)體及(ji)免疫(yi)學試劑盒(he)、實(shi)驗(yan)耗材(cai)等(deng)多(duo)門(men)類上(shang)萬種(zhong)產(chan)品(pin)，產(chan)品(pin)涉及(ji)分(fen)子生(sheng)物學、細胞(bao)生(sheng)物學、免疫(yi)學等生(sheng)命科(ke)學的(de)各(ge)個領(ling)域。