小鼠(shu)胰腺(xian)星狀(zhuang)細胞(bao)

小(xiao)鼠(shu)胰(yi)腺(xian)星狀(zhuang)細胞(bao)需(xu)要準備好(hao)細胞(bao)所(suo)要用(yong)到(dao)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)和相關試劑(ji)，雖然(ran)所(suo)有(you)的(de)貼(tie)壁，半貼(tie)壁或(huo)者懸浮細胞處理(li)方式差(cha)不多(duo)，但(dan)是不同(tong)的(de)實驗室培(pei)養(yang)條(tiao)件和處理(li)力度還(hai)有(you)試(shi)劑(ji)的(de)批(pi)間差(cha)這(zhe)些(xie)問題存在(zai)，也會導致(zhi)對(dui)細胞(bao)處理(li)不當(dang)，  或(huo)者環(huan)境的(de)不適(shi)應而(er)造成(cheng)細(xi)胞(bao)的(de)死(si)亡。
小(xiao)鼠(shu)胰(yi)腺(xian)星狀(zhuang)細胞(bao)培(pei)養(yang)物(wu)的(de)生(sheng)理(li)環境不同(tong)時(shi)定(ding)義(yi)為(wei)其(qi)物(wu)理化學(xue)環(huan)境中，更好(hao)地理(li)解血清的(de)組(zu)件，所(suo)必需(xu)的(de)增(zeng)殖(zhi)的(de)生(sheng)長(chang)因子的(de)鑒(jian)定(ding)，並(bing)更好(hao)地理(li)解細胞在(zai)培(pei)養(yang)的(de)微(wei)環(huan)境（即，細(xi)胞 - 細(xi)胞(bao)相(xiang)互作(zuo)用(yong)，氣(qi)體的(de)擴(kuo)散(san)，與(yu)基質相互作(zuo)用(yong)）現(xian)在(zai)允許在無血清培(pei)養(yang)基(ji)中某些(xie)細胞系(xi)的(de)培(pei)養(yang)。
小(xiao)鼠(shu)胰(yi)腺(xian)星狀(zhuang)細胞(bao)培(pei)養(yang)物(wu)的(de)主(zhu)要優點是操(cao)縱物(wu)理化學(xue)（即(ji)，溫(wen)度(du)，pH，滲透壓(ya)，O2和CO2張(zhang)力）和生(sheng)理環(huan)境（即，激(ji)素和(he)營(ying)養(yang)物(wu)濃度），其中所(suo)述(shu)細胞(bao)繁(fan)殖(zhi)的(de)能(neng)力。除(chu)溫(wen)度(du)，將(jiang)培養(yang)環(huan)境是由生(sheng)長培(pei)養(yang)基(ji)進行控(kong)制(zhi)。
小(xiao)鼠(shu)胰(yi)腺(xian)星狀(zhuang)細胞(bao)對(dui)於培養(yang)，只(zhi)要我們細心(xin)操(cao)作，註意細節(jie)，並(bing)不是(shi)大家(jia)說的(de)那(na)樣困難。對(dui)於有(you)經(jing)驗和有(you)條(tiao)件的(de)客戶(hu)，建(jian)議由公司(si)代(dai)為(wei)培(pei)養(yang)細(xi)胞及進行後續(xu)研(yan)究(jiu)。

細(xi)胞(bao)復蘇技術(shu)：

1. 取(qu)出(chu)細胞，迅速放(fang)入37℃溫(wen)水(shui)中(zhong)快(kuai)速(su)解凍

2. 吸(xi)出細(xi)胞懸液(ye),並(bing)加10倍(bei)以(yi)上(shang)培(pei)養(yang)液(ye)

3. 1000r/分鐘(zhong)離心(xin)5分鐘(zhong)，去(qu)除(chu)上(shang)清

4. 用(yong)培(pei)養(yang)液(ye)適(shi)當(dang)稀釋後接(jie)種(zhong)培(pei)養(yang)瓶,放(fang)入37℃ CO2培(pei)養(yang)箱靜置培養(yang)

5. 鏡(jing)檢(jian)細胞貼(tie)壁能(neng)力，次日更換壹次培養(yang)液(ye),繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)

培(pei)養(yang)方(fang)法(fa)：

收(shou)到(dao)細胞後，在(zai)倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)整個細胞生長(chang)情(qing)況(kuang)：

如(ru)果細胞(bao)未(wei)長(chang)滿(man)，用(yong)75%酒(jiu)精噴灑(sa)整個瓶消毒(du)後放(fang)到超(chao)菌臺內(nei)，嚴格無(wu)菌操(cao)作，打開(kai)細(xi)胞培養(yang)瓶，留10ml培養(yang)液(ye)繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)。

如(ru)果細胞(bao)已長(chang)滿(man)（達80-90%）。即(ji)可進(jin)行傳代(dai)，具體步驟(zhou)如下(xia)：

a，棄去(qu)培養(yang)液(ye)，用(yong)PBS洗1-2次。

b，向瓶內加(jia)入1.0-2.0ml酶(mei)液(ye)，在(zai)倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細胞消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大部(bu)分變(bian)圓(yuan)，迅速拿回(hui)操(cao)作臺，吸(xi)取酶(mei)，加含(han)有(you)6ml 含(han)10%血清的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞。

c，加(jia)入(ru)等量的(de)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打混勻後吸(xi)出壹(yi)半，分到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)

d，傳代(dai)比例：1:2-1:3

保(bao)存(cun)和應用(yong)：

客戶(hu)可以(yi)根(gen)據自(zi)己的(de)需(xu)求選(xuan)擇新鮮(xian)或(huo)者凍存(cun)的(de)原(yuan)代(dai)細胞(bao)，如(ru)是新鮮(xian)原(yuan)代(dai)細胞(bao)，客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後應立即將(jiang)其放(fang)入CO2細(xi)胞(bao)培養(yang)箱內靜置後2-3h，再進(jin)行後續(xu)的(de)實驗操(cao)作。如是凍存(cun)細(xi)胞，客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後應立即將(jiang)其放(fang)入液(ye)氮(dan)、-80℃冰(bing)箱或(huo)立即進行復(fu)蘇。

細(xi)胞(bao)復蘇的(de)原(yuan)則(ze)：

在(zai)實際操(cao)作中，凍存(cun)細(xi)胞要進行復(fu)蘇，再培(pei)養(yang)傳代(dai)。復蘇(su)細(xi)胞壹般(ban)采用(yong)快(kuai)速(su)融化法(fa)。以(yi)保(bao)證(zheng)細(xi)胞(bao)外結(jie)晶快速(su)融化，以(yi)避(bi)免(mian)慢(man)速(su)融化水(shui)分滲(shen)入(ru)細(xi)胞內，再次形(xing)成(cheng)胞(bao)內(nei)結晶損傷細胞(bao)。

1）該(gai)細胞(bao)只能(neng)用(yong)於科研(yan)，不得(de)用(yong)於臨床(chuang)。

2）收(shou)到(dao)細胞後首(shou)先觀察(cha)細胞瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象，若有(you)上(shang)述現(xian)象發生請及時(shi)和我們聯系(xi)。

3）仔細(xi)閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明(ming)書，了(le)解細胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如細胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血清比(bi)例、所(suo)需(xu)細(xi)胞(bao)因子等(deng)。

4）用(yong)75%酒(jiu)精擦拭(shi)細胞(bao)瓶表(biao)面，顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細胞狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問題貼(tie)壁細(xi)胞(bao)會有(you)少(shao)量從瓶壁脫落(luo)，將(jiang)細胞(bao)置於培養(yang)箱內靜置培養(yang)過(guo)夜，隔(ge)天再取(qu)出(chu)觀察(cha)。此(ci)時(shi)多數細胞(bao)均會貼(tie)壁，若細(xi)胞仍(reng)不能(neng)貼(tie)壁請(qing)用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色(se)測(ce)定(ding)細胞(bao)活力，如果證實細胞活力正(zheng)常，請將(jiang)細胞(bao)離心(xin)後用(yong)新鮮(xian)培(pei)養(yang)基(ji)再次貼(tie)壁培(pei)養(yang)；如(ru)果染(ran)色(se)結(jie)果顯示(shi)細胞(bao)無(wu)活力，請拍(pai)下(xia)照片及時(shi)和我們聯系(xi)，信(xin)息(xi)確認後我(wo)們為(wei)您(nin)再免(mian)費寄(ji)送壹次。

5）請(qing)客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細胞培養(yang)。培(pei)養(yang)瓶內多(duo)余的(de)培(pei)養(yang)基(ji)可收(shou)集備用(yong)，細(xi)胞(bao)傳代(dai)時(shi)可以(yi)壹(yi)定(ding)比例和(he)客戶(hu)自(zi)備的(de)培(pei)養(yang)基(ji)混合，使細胞逐漸適(shi)應培(pei)養(yang)條(tiao)件;建(jian)議直接購買(mai)我司(si)提(ti)供(gong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)。

6）建(jian)議客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後qian3天各(ge)拍(pai)幾張細(xi)胞照片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和我司技(ji)術(shu)部(bu)溝通(tong)交流。

細(xi)胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1）復(fu)蘇(su)細胞：將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞懸液(ye)的(de)凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅速搖晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合均勻。在(zai)1000 rpm條件下離心(xin)3 min，棄去(qu)上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天換液(ye)並(bing)檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度。

2）細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如果細胞(bao)密(mi)度達80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳代(dai)培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的(de)PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消化(hua)液(ye)浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞，將(jiang)培養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)細胞消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅速拿回(hui)操(cao)作臺，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝入(ru)無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿中(zhong)或(huo)者瓶中，置於培養(yang)箱中培(pei)養(yang)。

3）細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細胞生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例；

a、收(shou)集細(xi)胞，裝入(ru)無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離心(xin)4 min，棄去(qu)上清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡PBS，進行細(xi)胞計數。

b、根(gen)據細(xi)胞數量加(jia)入(ru)無血清細(xi)胞凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞懸液(ye)，註意凍存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。

c、將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次拿取。

深(shen)圳瑞(rui)清(qing)生(sheng)物(wu)信(xin)息(xi)科技(ji)有(you)限(xian)公司(si)經(jing)過數年的(de)努(nu)力發展(zhan)已迅速成(cheng)為(wei)集產品研(yan)發、經(jing)營(ying)為(wei)壹(yi)體的(de)專(zhuan)業(ye)化(hua)生(sheng)物(wu)工程公司(si)。公司(si)具有(you)完(wan)善的(de)實驗技術開(kai)發(fa)平(ping)臺(tai)，成(cheng)熟(shu)的(de)抗(kang)原(yuan)、抗體研(yan)發系(xi)統(tong)，熟(shu)練(lian)掌(zhang)握(wo)各(ge)種(zhong)酶(mei)聯技(ji)術，結(jie)合公司(si)的(de)研(yan)發團隊，可以(yi)有(you)效(xiao)的(de)保(bao)證(zheng)公司(si)產品強的(de)穩定(ding)性(xing)和高的(de)準(zhun)確性(xing)，同(tong)時(shi)又(you)具有(you)競爭力的(de)價(jia)格(ge)。 公司(si)主(zhu)營(ying)ELISA試劑(ji)盒，目(mu)前(qian)可以(yi)提(ti)供(gong)生(sheng)化(hua)試劑(ji)、分子生(sheng)物(wu)學(xue)試(shi)劑(ji)及試劑(ji)盒，各(ge)種(zhong)抗(kang)體及免疫(yi)學(xue)試(shi)劑(ji)盒、實驗耗材(cai)等(deng)多(duo)門(men)類上萬(wan)種(zhong)產品，產品涉(she)及分子生(sheng)物(wu)學(xue)、細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學(xue)、免(mian)疫(yi)學(xue)等(deng)生(sheng)命(ming)科學(xue)的(de)各(ge)個領域(yu)。