雞(ji)（Chicken）滑液囊(nang)支原體(ti)抗(kang)體(ti)（MS-Ab） ELISA檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

試(shi)劑(ji)盒(he)采(cai)用(yong)雙抗(kang)壹(yi)步夾(jia)心(xin)法酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸附(fu)試(shi)驗(yan)（ELISA）。往(wang)預先(xian)包被傳(chuan)染性(xing)貧(pin)血(xue)病(bing)毒(CIAV-Ag)抗(kang)原的(de)包(bao)被微(wei)孔(kong)中(zhong)，依次加入(ru)標本、HRP標記的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)原，經(jing)過(guo)溫育並(bing)徹(che)di洗滌(di)。用(yong)底(di)物TMB顯色(se)，TMB在(zai)過(guo)氧(yang)化物酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)藍色(se)，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)最終(zhong)的(de)黃(huang)色(se)。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)（OD 值），與(yu)CUTOFF值(zhi)相比(bi)較(jiao)，從而判(pan)定(ding)標本中滑液囊(nang)支原體(ti)抗(kang)體(ti)病(bing)毒（MS-Ab）的(de)存(cun)在(zai)與(yu)否(fou)。

樣品(pin)收集、處理(li)及保存(cun)方(fang)法

1.  血(xue)清(qing)：使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱原和內毒素的(de)試(shi)管(guan)，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免任(ren)何細胞刺激，收集血(xue)液(ye)後(hou)，3000轉離(li)心(xin)10分(fen)鐘將血(xue)清(qing)和紅細胞迅速(su)小心(xin)地分(fen)離。

2.  血漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000轉(zhuan)離(li)心(xin)30分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。

3.  細胞上清(qing)液(ye)：3000轉(zhuan)離心(xin)10分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚(ju)合物。

4.  組織(zhi)勻漿(jiang)：將組(zu)織(zhi)加入(ru)適(shi)量生理(li)鹽水(shui)搗碎。3000轉(zhuan)離心(xin)10分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。

5.  保存(cun)：如果樣本收集後(hou)不及(ji)時(shi)檢測(ce)，請(qing)按(an)壹(yi)次用(yong)量分(fen)裝，凍(dong)存於-20℃，避免反(fan)復凍(dong)融，在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確保樣品(pin)均(jun)勻地充(chong)分(fen)解(jie)凍(dong)。

自(zi)備物品(pin)

1. 酶(mei)標儀(yi)（450nm）

2. 高精(jing)度(du)加樣器(qi)及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操(cao)作(zuo)註(zhu)意事(shi)項(xiang)

1.  試劑(ji)盒(he)保存(cun)在(zai)2-8℃，使(shi)用(yong)前(qian)室(shi)溫平(ping)衡(heng)20分(fen)鐘。從冰箱(xiang)取(qu)出(chu)的(de)濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液(ye)會(hui)有結(jie)晶(jing)，這(zhe)屬(shu)於正常現象(xiang)，水(shui)浴加熱使(shi)結(jie)晶(jing)wan全(quan)溶(rong)解(jie)後(hou)再使(shi)用(yong)。

2.  實驗(yan)中不(bu)用(yong)的(de)板(ban)條應立即(ji)放回自(zi)封(feng)袋中，密(mi)封(feng)（低溫幹(gan)燥(zao)）保存(cun)。

3.  預處理(li)後(hou)的(de)樣本請按(an)照(zhao)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)用(yong)樣本稀釋液(ye)適(shi)當稀釋以(yi)達到試劑(ji)盒(he)的(de)的(de)最(zui)佳(jia)檢(jian)測(ce)效果(guo)。

4.  嚴(yan)格按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)中標明(ming)的(de)時(shi)間(jian)、加液量及順(shun)序進行(xing)溫育操(cao)作(zuo)。

5.  所(suo)有(you)液(ye)體(ti)組分(fen)使(shi)用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)搖勻。

試劑(ji)盒(he)組(zu)成(cheng)

試(shi)劑(ji)的(de)準(zhun)備(bei)

 20×洗滌(di)緩(huan)沖液的(de)稀(xi)釋：蒸(zheng)餾水(shui)按(an)1：20稀(xi)釋，即(ji)1份的(de)20×洗滌(di)緩(huan)沖液加19份的(de)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

洗板(ban)方法

1.  手工洗板(ban)：甩(shuai)盡(jin)孔內(nei)液體(ti)，每(mei)孔加滿洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置1min後(hou)甩(shuai)盡(jin)孔內(nei)液體(ti)，在(zai)吸水(shui)紙上拍(pai)幹(gan)，如此洗板(ban)5次。

2.  自(zi)動洗板(ban)機：每(mei)孔註(zhu)入(ru)洗液(ye)350μL，浸泡(pao)1min，洗板(ban)5次。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

1.  從(cong)室溫平(ping)衡(heng)20min後(hou)的(de)鋁(lv)箔(bo)袋中取(qu)出(chu)所需板(ban)條，剩(sheng)余(yu)板(ban)條用(yong)自(zi)封(feng)袋密封(feng)放回4℃。

2.  設置(zhi)陰、陽性(xing)對照(zhao)孔(kong)和樣本孔，陰、陽性(xing)對照(zhao)孔(kong)中(zhong)加入(ru)陰性(xing)對照(zhao)、陽性(xing)對照(zhao)各50μL；

3.  待測(ce)樣本孔先(xian)加待測(ce)樣本10μL，再加樣本稀釋液(ye)40μL；

4.  隨(sui)後(hou)陰、陽性(xing)對照(zhao)孔(kong)和樣本孔中每(mei)孔加入(ru)辣根過氧(yang)化物酶(mei)（HRP）標記的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)原100μL，用(yong)封(feng)板(ban)膜封(feng)住(zhu)反(fan)應(ying)孔(kong)，37℃水(shui)浴鍋或恒(heng)溫箱溫育60min。

5.  棄去液體(ti)，吸水(shui)紙上拍(pai)幹(gan)，每(mei)孔加滿洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置1min，甩(shuai)去洗滌(di)液(ye)，吸水(shui)紙上拍(pai)幹(gan)，如此重復洗板(ban)5次（也(ye)可(ke)用(yong)洗板(ban)機洗板(ban)）。

6.  每(mei)孔加入(ru)底物A、B各50μL，37℃避光孵(fu)育15min。

7.  每(mei)孔加入(ru)終(zhong)止液50μL，15min內，在(zai)450nm波(bo)長(chang)處測(ce)定(ding)各孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

結(jie)果(guo)判(pan)斷

 1.  試(shi)驗(yan)有效性(xing)：陽性(xing)對照(zhao)孔(kong)OD值(zhi)平(ping)均(jun)值(zhi)≥1.00；

                陰性(xing)對照(zhao)孔(kong)OD值(zhi)平(ping)均(jun)值(zhi)≤0.15。

2.  臨界值(zhi)（Cut off）計(ji)算(suan)：臨界值(zhi)=陰性(xing)對照(zhao)孔(kong)平(ping)均(jun)值(zhi)+0.15

3.  陰性(xing)判(pan)斷：樣品(pin)OD值(zhi)＜臨(lin)界值(zhi)（Cut off），樣品(pin)為(wei)陰性(xing)

4.  陽性(xing)判(pan)斷：樣品(pin)OD值(zhi)＞臨(lin)界值(zhi)（Cut off），樣品(pin)為(wei)陽性(xing)

試(shi)劑(ji)盒(he)性(xing)能

1.  準確性(xing)：陽性(xing)對照(zhao)孔(kong)OD值(zhi)平(ping)均(jun)值(zhi)≥1.00；陰性(xing)對照(zhao)孔(kong)OD值(zhi)平(ping)均(jun)值(zhi)≤0.15，說明(ming)試驗(yan)結(jie)果(guo)有(you)效。

2.  特(te)異(yi)性(xing)：不(bu)與(yu)其(qi)它可(ke)溶(rong)性(xing)結(jie)構類似(si)物交(jiao)叉反(fan)應。

3.  重復性(xing)：板(ban)內、板(ban)間(jian)變異(yi)系數均(jun)小(xiao)於15%。

4.  貯(zhu)藏(zang)：2-8℃，避光防(fang)潮保存(cun)。

5.  有(you)效期(qi)：6個月

免(mian)責聲明(ming)

1.   試劑(ji)盒(he)僅(jin)供研(yan)究使(shi)用(yong)，不(bu)得(de)用(yong)於臨(lin)床實驗(yan)或人體(ti)實驗(yan)，否則(ze)所產(chan)生的(de)壹(yi)切(qie)後(hou)果，由實驗(yan)者承擔(dan)，本公司概不(bu)負(fu)責。

2.   嚴(yan)格按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)操(cao)作(zuo)，實驗(yan)者違(wei)反說(shuo)明(ming)書(shu)操(cao)作(zuo)，後(hou)果由實驗(yan)者承擔(dan)。