金屬硫蛋(dan)白(bai)（MT）ELISA檢測試劑盒@說明書

試劑盒采用雙抗(kang)體(ti)壹(yi)步(bu)夾心法酶聯(lian)免(mian)疫吸(xi)附(fu)試驗（ELISA）。往預(yu)先包被(bei)金屬硫蛋(dan)白(bai)（MT）抗(kang)體(ti)的包(bao)被微(wei)孔(kong)中，依(yi)次(ci)加(jia)入標(biao)本(ben)、標準(zhun)品(pin)、HRP標記的檢(jian)測抗(kang)體(ti)，經(jing)過溫育並(bing)徹di洗(xi)滌。用(yong)底物(wu)TMB顯(xian)色，TMB在(zai)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍色，並(bing)在酸(suan)的作用下(xia)轉(zhuan)化(hua)成最終的黃(huang)色。顏(yan)色的深(shen)淺(qian)和樣(yang)品(pin)中的金屬硫蛋(dan)白(bai)（MT）呈正相(xiang)關。用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)在(zai)450nm 波長下測定吸(xi)光(guang)度(du)（OD 值(zhi)），計算(suan)樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)。

樣(yang)品(pin)收集、處理(li)及(ji)保(bao)存方法(fa)

1.  血(xue)清：使用(yong)不(bu)含熱(re)原和內(nei)毒(du)素的試管(guan)，操作過程中避免(mian)任(ren)何細胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集血(xue)液(ye)後(hou)，3000轉離心10分(fen)鐘將血清和紅細胞(bao)迅速(su)小心(xin)地分(fen)離。

2.  血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽(yan)或(huo)肝素抗(kang)凝(ning)。3000轉(zhuan)離心30分(fen)鐘取上清。

3.  細胞(bao)上清液：3000轉(zhuan)離心10分(fen)鐘去除顆粒(li)和聚合(he)物(wu)。

4.  組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組織(zhi)加(jia)入適(shi)量(liang)生理(li)鹽(yan)水搗碎。3000轉離心10分(fen)鐘取上清。

5.  保(bao)存：如果(guo)樣(yang)本收集後(hou)不及(ji)時檢(jian)測，請(qing)按壹(yi)次(ci)用(yong)量(liang)分(fen)裝，凍存於-20℃，避免(mian)反復(fu)凍融(rong)，在室(shi)溫下解(jie)凍並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均勻(yun)地充分(fen)解(jie)凍。

自備物品(pin)

1. 酶標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精(jing)度(du)加(jia)樣(yang)器及(ji)槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫箱

操作註(zhu)意(yi)事(shi)項

1. 試劑盒保(bao)存在2-8℃，使(shi)用(yong)前(qian)室(shi)溫平衡20分(fen)鐘。從冰(bing)箱(xiang)取出(chu)的濃(nong)縮洗(xi)滌液(ye)會(hui)有結晶，這(zhe)屬於正(zheng)常現(xian)象(xiang)，水浴(yu)加(jia)熱(re)使結晶wan全溶解(jie)後(hou)再使(shi)用。

2. 實驗中不(bu)用(yong)的板條應(ying)立即放(fang)回(hui)自封袋中，密封（低溫幹燥）保(bao)存。

3. 濃(nong)度(du)為(wei)0的S0號(hao)標準(zhun)品(pin)即可(ke)視(shi)為陰(yin)性(xing)對照(zhao)或(huo)者(zhe)空(kong)白；按照(zhao)說明(ming)書操作時樣(yang)本已(yi)經(jing)稀(xi)釋(shi)5倍，最(zui)終(zhong)結果乘(cheng)以(yi)5才(cai)是(shi)樣(yang)本實際(ji)濃(nong)度(du)。

4.  嚴(yan)格按照(zhao)說明(ming)書中標(biao)明(ming)的時(shi)間(jian)、加(jia)液(ye)量及(ji)順(shun)序進(jin)行(xing)溫育操作。

5. 所(suo)有液(ye)體(ti)組分(fen)使用(yong)前(qian)充分(fen)搖(yao)勻(yun)。

試劑盒組成

註(zhu)：標(biao)準(zhun)品(pin)（S0-S5）濃(nong)度(du)依(yi)次(ci)為(wei)：0、150、300、600、1200、2400 pg/mL

試劑的準(zhun)備

20×洗(xi)滌緩沖(chong)液(ye)的稀(xi)釋(shi)：蒸餾水按1：20稀(xi)釋(shi)，即1份的20×洗(xi)滌緩沖(chong)液(ye)加(jia)19份(fen)的蒸(zheng)餾水。

洗(xi)板方法(fa)

1. 手(shou)工洗(xi)板：甩(shuai)盡孔(kong)內(nei)液(ye)體，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液(ye)，靜置1min後(hou)甩(shuai)盡孔(kong)內(nei)液(ye)體，在(zai)吸(xi)水紙上拍(pai)幹，如此洗(xi)板5次(ci)。

2. 自動洗(xi)板機：每孔(kong)註(zhu)入洗(xi)液350μL，浸(jin)泡(pao)1min，洗(xi)板5次(ci)。

操作步驟

1. 從室(shi)溫平衡20min後(hou)的鋁(lv)箔(bo)袋中取(qu)出(chu)所(suo)需(xu)板條，剩(sheng)余板條用(yong)自封袋密封放回(hui)4℃。

2.  設(she)置標準(zhun)品(pin)孔(kong)和樣(yang)本孔(kong)，標準(zhun)品(pin)孔(kong)各加(jia)不(bu)同濃(nong)度(du)的標(biao)準(zhun)品(pin)50μL；

3. 樣(yang)本孔(kong)先加(jia)待(dai)測樣(yang)本10μL，再加(jia)樣(yang)本稀(xi)釋(shi)液40μL；空(kong)白孔(kong)不加(jia)

4.  除(chu)空(kong)白孔(kong)外，標準(zhun)品(pin)孔(kong)和樣(yang)本孔(kong)中每(mei)孔(kong)加(jia)入辣(la)根過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)（HRP）標(biao)記的檢(jian)測抗(kang)體(ti)100μL，用(yong)封板膜(mo)封住反應(ying)孔(kong)，37℃水浴(yu)鍋(guo)或(huo)恒(heng)溫箱溫育60min。

5. 棄去液(ye)體(ti)，吸(xi)水紙上拍(pai)幹，每孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液(ye)，靜置1min，甩(shuai)去洗(xi)滌液(ye)，吸(xi)水紙上拍(pai)幹，如此重復(fu)洗(xi)板5次(ci)（也(ye)可(ke)用洗(xi)板機洗(xi)板）。

6. 每(mei)孔(kong)加(jia)入底(di)物(wu)A、B各50μL，37℃避光(guang)孵育(yu)15min。

7. 每(mei)孔(kong)加(jia)入終(zhong)止(zhi)液50μL，15min內(nei)，在(zai)450nm波長處測定各孔(kong)的OD值(zhi)。

結果判(pan)斷

繪制標(biao)準(zhun)曲(qu)線：在Excel工作表中，以(yi)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)作橫坐標，對(dui)應(ying)OD值(zhi)作縱坐標，繪制出(chu)標(biao)準(zhun)品(pin)線性(xing)回(hui)歸曲(qu)線，按曲(qu)線方程計算(suan)各樣(yang)本濃(nong)度(du)值(zhi)。

試劑盒性(xing)能

1. 準(zhun)確性(xing)：標準(zhun)品(pin)線性(xing)回(hui)歸與(yu)預(yu)期濃(nong)度(du)相(xiang)關系數(shu)R值，大於等於0.9900。

2. 靈(ling)敏(min)度(du)：最(zui)di檢測濃(nong)度(du)小(xiao)於1.0 pg/mL。

3. 特(te)異性(xing)：不與(yu)其它可溶性(xing)結構(gou)類似(si)物(wu)交(jiao)叉反應(ying)。

4. 重復(fu)性(xing)：板內(nei)、板間(jian)變異系數(shu)均小於15%。

5. 貯(zhu)藏(zang)：2-8℃，避光(guang)防潮保(bao)存。

6. 有效(xiao)期：6個(ge)月

免(mian)責(ze)聲明(ming)

1. 試劑盒僅供(gong)研(yan)究(jiu)使(shi)用，不得(de)用(yong)於臨(lin)床實驗或(huo)人(ren)體(ti)實驗，否則所(suo)產生(sheng)的壹(yi)切後(hou)果，由實驗者(zhe)承(cheng)擔(dan)，本公司(si)概(gai)不(bu)負(fu)責(ze)。

2. 嚴格按照(zhao)說明(ming)書操作，實驗者(zhe)違(wei)反說(shuo)明(ming)書操作，後(hou)果由實驗者(zhe)承(cheng)擔(dan)。

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