細(xi)胞(bao)復(fu)蘇和(he)凍存

細胞(bao)復(fu)蘇和(he)凍存是(shi)細(xi)胞(bao)培養中(zhong)常見(jian)的操作(zuo)，主要用於保存和(he)恢(hui)復(fu)細(xi)胞系。以下(xia)是(shi)壹些(xie)基(ji)本(ben)的步驟(zhou)和(he)註(zhu)意事(shi)項(xiang)：
### 細(xi)胞凍(dong)存（Cryopreservation）
1. **細(xi)胞(bao)準(zhun)備**：選(xuan)擇生長狀態(tai)良好的細胞(bao)，通過(guo)胰(yi)蛋白(bai)酶(mei)或EDTA等消化細(xi)胞，使(shi)其成為(wei)單(dan)個細胞(bao)懸液。
2. **細(xi)胞(bao)計數(shu)**：使用細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)器確(que)定細胞(bao)密(mi)度。
3. **加入凍存液**：將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液與凍存液按(an)壹(yi)定比例(li)混合，常用的凍存液含(han)有DMSO或丙三醇(chun)等作(zuo)為(wei)保護劑。
4. **分配(pei)細胞(bao)**：將細(xi)胞懸液分配(pei)到凍(dong)存管(guan)中，通(tong)常每管(guan)的細胞(bao)量是1-2mL。
5. **逐(zhu)步降溫(wen)**：
- 短期保存：可(ke)以立(li)即(ji)將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入-80°C冰(bing)箱(xiang)或(huo)液氮(dan)罐(guan)中的凍存盒(he)中(zhong)。
- 長期保存：通(tong)常采(cai)用程(cheng)序(xu)降溫機進行(xing)逐(zhu)步降溫(wen)，以防(fang)止(zhi)細(xi)胞(bao)內冰(bing)晶形成，造(zao)成損傷。
6. **儲(chu)存**：將(jiang)凍(dong)存管(guan)存放(fang)在(zai)液氮(dan)罐(guan)中，溫(wen)度約為(wei)-196°C。
### 細(xi)胞復(fu)蘇（Thawing）
1. **準(zhun)備**：從液氮(dan)罐(guan)中取(qu)出(chu)所需(xu)的凍存管(guan)，快速(su)轉(zhuan)移(yi)至37°C水浴(yu)中。
2. **解凍**：在(zai)水浴(yu)中輕(qing)輕搖(yao)動凍(dong)存管(guan)，直到冰(bing)wan全(quan)融(rong)化。
3. **去除凍(dong)存液**：將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)到含(han)有wan全(quan)培(pei)養基(ji)的離心管(guan)中，輕(qing)輕混合。
4. **離心**：通常以低(di)速(su)（約100-200g）離心5-10分鐘，以沈澱細胞。
5. **去除上(shang)清(qing)**：小心去除上(shang)清(qing)液，避免擾動細(xi)胞(bao)沈澱。
6. **重懸(xuan)和接種**：將(jiang)細胞(bao)重懸(xuan)於適(shi)量的wan全(quan)培(pei)養基(ji)中(zhong)，轉(zhuan)移(yi)到培養容(rong)器(qi)中(zhong)進行(xing)培(pei)養。
### 註(zhu)意事(shi)項(xiang)
- **無(wu)菌(jun)操作(zuo)**：整(zheng)個過程需(xu)在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)進行(xing)，避免汙染。
- **凍(dong)存液的選擇**：不(bu)同細(xi)胞類(lei)型可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)不(bu)同的凍存液配(pei)方。
- **細胞密(mi)度**：凍存時(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度不(bu)宜(yi)過高，以免(mian)影(ying)響(xiang)復(fu)蘇後(hou)的細胞(bao)活性(xing)。
- **解凍速(su)度**：快速(su)解凍有助於減少(shao)細胞(bao)損傷。
- **復(fu)蘇後(hou)的監測**：復(fu)蘇後(hou)需檢查細胞生長狀態(tai)和汙染情況。
細胞(bao)凍(dong)存和(he)復(fu)蘇的成功(gong)與否直接關系(xi)到細(xi)胞(bao)系(xi)的質量和長期使(shi)用的可(ke)行性，因此(ci)這些(xie)操作(zuo)需(xu)要嚴格遵(zun)循標(biao)準(zhun)操作(zuo)程(cheng)序(xu)（SOP）。