澱(dian)粉脫(tuo)分支酶(DBE)測(ce)試盒(he)

澱(dian)粉脫(tuo)分支酶(DBE)測(ce)試盒(he)

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測(ce)定意義：
SBE（EC 2.4.1.18）主(zhu)要存在(zai)於(yu)植(zhi)物中(zhong)，是參與(yu)支(zhi)鏈(lian)澱(dian)粉合成的關鍵(jian)酶，測(ce)定SBE活(huo)性在(zai)澱(dian)粉生(sheng)物合成、優質農(nong)作物品(pin)種選(xuan)育(yu)和(he)品質遺(yi)傳(chuan)改良(liang)研(yan)究中具有(you)重要意義。

操(cao)作流(liu)程：

1.從(cong)室(shi)溫(wen)平(ping)衡(heng)20min後的鋁(lv)箔(bo)袋(dai)中(zhong)取(qu)出(chu)所需板條(tiao)，剩(sheng)余板條(tiao)用自(zi)封袋(dai)密封放回4℃。

2. 設(she)置(zhi)標(biao)準(zhun)品孔和(he)樣(yang)本(ben)孔，標(biao)準(zhun)品孔各(ge)加不同濃(nong)度(du)的標(biao)準(zhun)品50μL；

3. 樣(yang)本(ben)孔中加入(ru)待測(ce)樣(yang)本(ben)50μL；空白(bai)孔(kong)不加。

4. 除(chu)空(kong)白(bai)孔(kong)外，標(biao)準(zhun)品孔和(he)樣(yang)本(ben)孔中每孔(kong)加(jia)入(ru)辣根過(guo)氧(yang)化(hua)物酶（HRP）標(biao)記(ji)的檢測(ce)抗(kang)體(ti)100μL，用(yong)封(feng)板膜封住(zhu)反(fan)應孔(kong)，37℃水浴鍋或(huo)恒溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育(yu)60min。

5. 棄(qi)去(qu)液體，吸水紙上拍(pai)幹(gan)，每孔(kong)加(jia)滿洗滌液（350μL），靜(jing)置1min，甩去(qu)洗滌液，吸水紙上拍(pai)幹(gan)，如此重復洗板5次(ci)（也(ye)可用洗(xi)板機(ji)洗(xi)板）。

6. 每(mei)孔(kong)加入底(di)物A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光孵育(yu)15min。

7. 每(mei)孔(kong)加入終(zhong)止(zhi)液50μL，15min內，在(zai)450nm波(bo)長(chang)處(chu)測(ce)定各(ge)孔(kong)的OD值。

優(you)點如下:

1、快速(su)簡(jian)便(bian):操(cao)作時間(jian)短(duan),48-50T,可測(ce)40例樣(yang)本(ben)左(zuo)右(you),96-100T,可測(ce)80例樣(yang)本(ben)左(zuo)右(you);

2、取(qu)樣(yang)量(liang)微(wei):常(chang)規操(cao)作取樣(yang)量(liang)50l, 酶標(biao)儀操(cao)作僅(jin)需(xu)5l即可檢測(ce),部分試劑(ji)盒(he)取樣(yang)多少請;

3、穩(wen)定(ding)性好(hao):試劑(ji)盒(he)2~8℃存放3個月(yue)有(you)效;

4、再(zai)現性好(hao):20倍(bei)稀釋(shi)線(xian)性仍(reng)然(ran)良(liang)好(hao);

5、回(hui)收(shou)試驗: X =99%;

6、受外界(jie)影響(xiang)因素(su)小(xiao):幹擾因素(su)少,重復性強(qiang);

7、測(ce)試面廣(guang):可測(ce)動(dong)物血清(漿)、組(zu)織、各(ge)種體液、灌流(liu)液、各種培(pei)養細(xi)胞(bao)以及細(xi)胞(bao)培(pei)養上清液等,部分試劑(ji)盒(he)適(shi)用於(yu)檢測(ce)植物,歡(huan)迎

儀(yi)器:

1、分(fen)光(guang)光度計(ji)/酶標(biao)儀/生(sheng)化(hua)分(fen)析儀(比(bi)色(se)測(ce)定波(bo)長(chang)為550nm)

2、恒(heng)溫(wen)水浴箱(xiang)或(huo)氣浴箱(xiang) (孵育(yu)溫(wen)度為37℃)

3、臺(tai)式(shi)離心機(ji)

4、漩(xuan)渦(wo)混(hun)勻(yun)器

5、微(wei)量(liang)移(yi)液器

使用須知:

(1)請參(can)照(zhao)相關(guan)法(fa)規、文(wen)獻(xian)、MSDs等信(xin)息(xi),理(li)解並(bing)掌握(wo)好(hao)試劑(ji)的特性,再(zai)進(jin)行(xing)安(an)全(quan)操(cao)作。

(2)通常(chang)購買試劑(ji)時壹(yi)定要想(xiang)到--次(ci)性用完。若(ruo)估算(suan)不足(zu)有(you)剩(sheng)余的話，更加註意其(qi)他(ta)保(bao)管和(he)管理(li)。

(3)萬(wan)壹(yi)-試劑(ji)操作者並非專(zhuan)業技術(shu)人員(yuan)。必(bi)須在(zai)專(zhuan)業人士(shi)的指導(dao)監(jian)督下進(jin)行(xing)操(cao)作。對於(yu)使用後(hou)的廢棄(qi)物,不要或(huo)者舊(jiu)的試劑(ji)，應按(an)照(zhao)相關(guan)法(fa)律法(fa)規正(zheng)當處理(li)。

(4)購買後(hou)，請務必(bi)確認(ren)標(biao)簽(qian)上(shang)的註意事項;做(zuo)好(hao)預防(fang)顛(dian)倒(dao),摔壞(huai)的措施(shi)和(he)管理(li)體(ti)制;在(zai)使用前(qian)再次(ci)確(que)認(ren)標(biao)簽(qian)上(shang)的註意事項，做(zuo)好(hao)必(bi)要的安(an)全(quan)對(dui)策(ce);對(dui)沒(mei)有(you)標(biao)明(ming)其(qi)危害(hai)特性、有(you)害特性的，也要(yao)慎(shen)重地進(jin)行(xing)操(cao)作;必(bi)須帶好(hao)防(fang)護(hu)用(yong)具，小(xiao)心翼翼進(jin)行(xing)操(cao)作。

生(sheng)化(hua)試劑(ji)的種類與(yu)等級說(shuo)明(ming):

(1)免(mian)疫試劑(ji)包括(kuo)抗體(ti)及抗血清、正(zheng)常(chang)血清及補體(ti)、抗原、免疫組(zu)織化(hua)學(xue)研(yan)究用試劑(ji)、細(xi)胞(bao)培(pei)養用試劑(ji)、細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)試劑(ji)、凝膠內擴散(san)法(fa)及電泳(yong)試劑(ji)等。

(2)基因工(gong)程用(yong)試劑(ji)包括(kuo)基因表(biao)達與(yu)基因重組(zu)、人工(gong)合成蛋白(bai)、激(ji)素(su)、核酸(suan)合成試劑(ji)、內切(qie)酶等。

(3)誘(you)變(bian)劑(ji)和(he)主(zhu)要供測(ce)定工(gong)作場所與(yu)生(sheng)活(huo)環境(jing)中(zhong)的毒物質的致(zhi)癌(ai)性與(yu)化(hua)學(xue)毒物的致(zhi)突(tu)變性。

(4)工(gong)業用(yong)化(hua)學品(pin)包括(kuo)試制開發的工業用(yong)化(hua)學品(pin),有(you)四千(qian)種以上,還(hai)在(zai)不斷(duan)增加。

樣(yang)本(ben)收(shou)集(ji)與(yu)前(qian)處(chu)理(li):

血清(漿)可直接(jie)測(ce)定。

紅(hong)細(xi)胞(bao):需(xu)按(an)照(zhao)試劑(ji)盒(he)中說(shuo)明(ming)書上(shang)紅(hong)細(xi)胞(bao)的測(ce)定方法(fa)進(jin)行(xing)提(ti)取(qu)後測(ce)定。

動(dong)物組(zu)織樣(yang)本(ben):可用生(sheng)理(li)鹽(yan)水按重量(liang)體(ti)積(ji)比(bi)制備成組(zu)織勻(yun)漿液,離心取(qu)上(shang)清測(ce)定。

培(pei)養細(xi)胞(bao)、細(xi)菌(jun)、植物組(zu)織:常(chang)用PBS作為勻(yun)漿介(jie)質破碎後離心取(qu)上(shang)清測(ce)定。

具體的樣(yang)本(ben)前處理(li):參(can)考(kao)我們(men)隨(sui)貨發(fa)送(song)的《實驗(yan)方法(fa)學》以及試劑(ji)盒(he)中詳(xiang)細(xi)說(shuo)明(ming)書。

實驗(yan)結果判(pan)斷(duan)我有(you)妙(miao)招(zhao):

1、定(ding)量(liang)測(ce)定結(jie)果根據標(biao)準(zhun)曲線計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)中待測(ce)物的含(han)量(liang)。

2、以樣(yang)品(pin)孔的OD值大於(yu)陰(yin)性對照(zhao)OD值(zhi)+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值(zhi)/陰(yin)性孔OD值(zhi))大於(yu)或(huo)等於(yu)2.1為陽性,P/N值小(xiao)於(yu)2.1,但(dan)大於(yu)1.5為可疑(yi),P/N小(xiao)於(yu)1.5為陰(yin)性。

4、ELISA試劑(ji)盒(he)目測(ce)定性法(fa):加入底物經(jing)酶解和(he)終(zhong)止(zhi)反(fan)應後(hou),肉(rou)眼觀察陽性孔顏色(se)明(ming)顯深(shen)於(yu)(競(jing)爭(zheng)法(fa)則淺於(yu))陰(yin)性對照(zhao),與(yu)陰(yin)性對照(zhao)的顏色(se)接(jie)近(jin)者,判定為陰(yin)性。

為了(le)達到準(zhun)確的實驗(yan)結果,取(qu)用(yong)試劑(ji)時應遵(zun)守(shou)以下規則(ze),以保證(zheng)試劑(ji)不受汙染和(he)不變質:

(1)試劑(ji)不能與(yu)手(shou)接(jie)觸(chu)。

(2)要(yao)用(yong)潔(jie)凈的藥勺,量(liang)筒(tong)或(huo)滴管(guan)取(qu)用(yong)試劑(ji),*不準(zhun)用同壹(yi)種工具同時連(lian)續(xu)取用(yong)多種試劑(ji)。取完壹(yi)種試劑(ji)後,應將(jiang)工(gong)具洗凈(藥(yao)勺要(yao)擦幹(gan))後,方可取用(yong)另壹(yi)種試劑(ji)。

(3)試劑(ji)取用(yong)後壹(yi)定要將(jiang)瓶(ping)塞(sai)蓋緊,不可放錯瓶蓋和(he)滴管(guan),絕不允(yun)許張冠李(li)戴,用(yong)完後(hou)將瓶(ping)放回原處。

(4)已取出的試劑(ji)不能再(zai)放回原試劑(ji)瓶內(nei)。

另外取(qu)用試劑(ji)時應本(ben)著(zhe)節(jie)約精神,盡可能少用(yong),這樣(yang)既(ji)便(bian)於(yu)操(cao)作和(he)仔細(xi)觀察現象(xiang),又能(neng)得(de)到較好(hao)的實驗(yan)結果。

澱(dian)粉脫(tuo)分支酶(DBE)測(ce)試盒(he)