澱粉磷酸化(hua)酶(SP)測試盒(he)

澱粉磷酸化(hua)酶(SP)測試盒(he)

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測定(ding)意義(yi)：
澱粉磷酸化(hua)酶（Starch Phosphorylase，SP）是澱粉代(dai)謝(xie)過程可逆(ni)反應(ying)酶，既可(ke)催化(hua)澱粉的(de)合成(cheng)，也(ye)可催化(hua)澱粉的(de)分解(jie)。
在(zai)高等(deng)植物(wu)中，澱粉磷酸化(hua)酶（合成(cheng)方(fang)向）主(zhu)要存在(zai)於質體中，負(fu)責(ze)延(yan)長(chang)澱粉的(de) α-1,4- 葡(pu)萄(tao)糖鏈的(de)非還原(yuan)末(mo)端；澱粉磷酸化(hua)酶（分解(jie)方(fang)向）主(zhu)要存在(zai)於細(xi)胞(bao)質(zhi)基質中，催化(hua)澱粉中(zhong)的(de) α-1,4-糖苷鍵(jian)磷酸解(jie)產(chan)生(sheng)葡(pu)萄(tao)糖-1-磷酸，負(fu)責(ze)葡(pu)萄(tao)糖鏈的(de)磷酸解(jie)，是(shi)澱粉代(dai)謝(xie)過程中的(de)關鍵(jian)酶。
在(zai)植物(wu)體中(zhong)，澱粉磷酸化(hua)酶分解(jie)方(fang)向的(de)底物(wu)無機磷濃度比(bi)合成(cheng)方(fang)向的(de)底物(wu)葡(pu)萄(tao)糖-1-磷酸濃(nong)度幾(ji)乎高(gao)了(le)兩個(ge)數量級，壹(yi)般(ban)認為(wei)澱粉磷酸化(hua)酶只(zhi)催化(hua)澱粉的(de)分解(jie)，因(yin)此(ci)，分解(jie)方(fang)向的(de)澱粉磷酸化(hua)酶具(ju)有(you)重要(yao)測定(ding)意義(yi)。

操(cao)作(zuo)流程(cheng)：

1.從室溫(wen)平(ping)衡20min後的(de)鋁箔(bo)袋中取出(chu)所(suo)需(xu)板(ban)條，剩(sheng)余板(ban)條用(yong)自(zi)封袋(dai)密封(feng)放(fang)回4℃。

2. 設置標準品孔(kong)和(he)樣本(ben)孔，標準品孔(kong)各加(jia)不(bu)同(tong)濃(nong)度的(de)標準品50μL；

3. 樣本(ben)孔中(zhong)加(jia)入待測樣本(ben)50μL；空(kong)白孔(kong)不(bu)加(jia)。

4. 除空(kong)白孔(kong)外(wai)，標準品孔(kong)和(he)樣本(ben)孔中(zhong)每(mei)孔(kong)加(jia)入辣(la)根過氧(yang)化(hua)物(wu)酶（HRP）標記(ji)的(de)檢測抗體100μL，用(yong)封板(ban)膜封(feng)住(zhu)反(fan)應(ying)孔，37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)或恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育(yu)60min。

5. 棄去液體(ti)，吸水(shui)紙(zhi)上拍幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液（350μL），靜置(zhi)1min，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液，吸水(shui)紙(zhi)上拍幹(gan)，如(ru)此重復(fu)洗(xi)板(ban)5次(ci)（也(ye)可用(yong)洗板(ban)機洗(xi)板(ban)）。

6. 每(mei)孔(kong)加(jia)入底(di)物(wu)A、B各50μL，37℃避光(guang)孵(fu)育(yu)15min。

7. 每(mei)孔(kong)加(jia)入終(zhong)止液50μL，15min內(nei)，在(zai)450nm波(bo)長處(chu)測定(ding)各孔的(de)OD值(zhi)。

優點如(ru)下:

1、快(kuai)速簡(jian)便(bian):操(cao)作(zuo)時間(jian)短,48-50T,可(ke)測40例樣本(ben)左右(you),96-100T,可(ke)測80例樣本(ben)左右(you);

2、取樣量微(wei):常規操(cao)作(zuo)取樣量50l, 酶標儀操(cao)作(zuo)僅(jin)需(xu)5l即可檢測,部分(fen)試劑盒(he)取樣多(duo)少(shao)請;

3、穩(wen)定(ding)性(xing)好(hao):試劑盒(he)2~8℃存放(fang)3個(ge)月(yue)有(you)效(xiao);

4、再現性(xing)好(hao):20倍稀(xi)釋線性(xing)仍(reng)然(ran)良好(hao);

5、回(hui)收試驗(yan): X =99%;

6、受(shou)外界(jie)影響(xiang)因(yin)素小(xiao):幹(gan)擾因(yin)素少(shao),重復(fu)性(xing)強(qiang);

7、測試面(mian)廣(guang):可(ke)測動(dong)物(wu)血(xue)清(qing)(漿(jiang))、組織、各種體液、灌流液、各種培養細(xi)胞(bao)以(yi)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養上清(qing)液等(deng),部分(fen)試劑盒(he)適(shi)用(yong)於檢測植物(wu),歡迎

儀(yi)器:

1、分光(guang)光(guang)度計/酶(mei)標儀/生(sheng)化(hua)分析儀(比(bi)色測定(ding)波(bo)長為(wei)550nm)

2、恒(heng)溫(wen)水(shui)浴(yu)箱(xiang)或氣浴(yu)箱 (孵(fu)育(yu)溫(wen)度為(wei)37℃)

3、臺式離(li)心(xin)機

4、漩(xuan)渦混(hun)勻器

5、微(wei)量移液器(qi)

使用(yong)須(xu)知(zhi):

(1)請參照(zhao)相(xiang)關(guan)法(fa)規、文獻、MSDs等(deng)信息(xi),理解並掌握好(hao)試劑的(de)特性(xing),再進(jin)行安全操(cao)作(zuo)。

(2)通常購買(mai)試(shi)劑時壹(yi)定(ding)要想(xiang)到(dao)--次(ci)性(xing)用(yong)完。若估(gu)算不(bu)足有(you)剩(sheng)余(yu)的(de)話，更加(jia)註意其(qi)他保(bao)管和(he)管理。

(3)萬(wan)壹(yi)-試劑操(cao)作(zuo)者並非(fei)專(zhuan)業(ye)技(ji)術人員(yuan)。必須(xu)在(zai)專業(ye)人士(shi)的(de)指導(dao)監督下進行操(cao)作(zuo)。對於使用(yong)後的(de)廢棄(qi)物(wu),不(bu)要(yao)或者舊的(de)試劑，應(ying)按(an)照(zhao)相(xiang)關(guan)法(fa)律法(fa)規正(zheng)當處(chu)理。

(4)購買(mai)後(hou)，請務必確認標簽上的(de)註意事項;做好(hao)預防顛倒(dao),摔(shuai)壞的(de)措施(shi)和管理體制;在(zai)使用(yong)前(qian)再次(ci)確認標簽上的(de)註意事項，做好(hao)必要(yao)的(de)安全對策;對沒有(you)標明其危(wei)害(hai)特(te)性(xing)、有(you)害(hai)特(te)性(xing)的(de)，也(ye)要慎重地(di)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo);必(bi)須(xu)帶(dai)好(hao)防護用(yong)具(ju)，小(xiao)心(xin)翼(yi)翼(yi)進行操(cao)作(zuo)。

生(sheng)化(hua)試劑的(de)種類與等(deng)級說(shuo)明:

(1)免疫(yi)試劑包括(kuo)抗體(ti)及(ji)抗血(xue)清(qing)、正(zheng)常血(xue)清(qing)及(ji)補體、抗原(yuan)、免疫(yi)組織化(hua)學(xue)研(yan)究(jiu)用(yong)試劑、細(xi)胞(bao)培(pei)養用(yong)試劑、細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)試劑、凝膠內(nei)擴(kuo)散法(fa)及(ji)電泳(yong)試劑等(deng)。

(2)基因(yin)工(gong)程用(yong)試劑包括(kuo)基因(yin)表達(da)與基因(yin)重組、人工(gong)合成(cheng)蛋(dan)白、激(ji)素、核(he)酸合(he)成試劑、內(nei)切(qie)酶(mei)等(deng)。

(3)誘變劑和主(zhu)要供(gong)測定(ding)工作(zuo)場所(suo)與生(sheng)活環(huan)境中(zhong)的(de)毒(du)物(wu)質的(de)致癌(ai)性(xing)與化(hua)學(xue)毒(du)物(wu)的(de)致突變性(xing)。

(4)工(gong)業(ye)用(yong)化(hua)學(xue)品包(bao)括(kuo)試制開發(fa)的(de)工業(ye)用(yong)化(hua)學(xue)品,有(you)四(si)千(qian)種以上,還在(zai)不(bu)斷(duan)增加(jia)。

樣本(ben)收集與前(qian)處(chu)理:

血(xue)清(qing)(漿(jiang))可直接(jie)測定(ding)。

紅細(xi)胞(bao):需(xu)按(an)照(zhao)試(shi)劑盒(he)中(zhong)說(shuo)明書上紅細(xi)胞(bao)的(de)測定(ding)方(fang)法(fa)進行(xing)提(ti)取後測定(ding)。

動(dong)物(wu)組織樣本(ben):可用(yong)生(sheng)理鹽(yan)水按(an)重量體積(ji)比(bi)制備成(cheng)組織勻漿(jiang)液,離(li)心(xin)取上清(qing)測定(ding)。

培養細(xi)胞(bao)、細(xi)菌(jun)、植(zhi)物(wu)組織:常用(yong)PBS作(zuo)為(wei)勻(yun)漿(jiang)介(jie)質(zhi)破(po)碎(sui)後離(li)心(xin)取上清(qing)測定(ding)。

具(ju)體(ti)的(de)樣本(ben)前(qian)處(chu)理:參(can)考(kao)我(wo)們(men)隨(sui)貨(huo)發(fa)送的(de)《實驗(yan)方(fang)法(fa)學(xue)》以及(ji)試劑盒(he)中(zhong)詳細(xi)說(shuo)明書。

實驗(yan)結(jie)果判(pan)斷(duan)我有(you)妙(miao)招:

1、定(ding)量測定(ding)結(jie)果根(gen)據(ju)標準曲線計算(suan)樣(yang)品中(zhong)待測物(wu)的(de)含(han)量。

2、以樣(yang)品孔(kong)的(de)OD值(zhi)大於(yu)陰(yin)性(xing)對照(zhao)OD值(zhi)+2~3SD,作(zuo)為(wei)陽性(xing)結(jie)果的(de)閾值(zhi)。

3、以P/N值(zhi)(陽性(xing)孔OD值(zhi)/陰(yin)性(xing)孔OD值(zhi))大於(yu)或等(deng)於2.1為(wei)陽性(xing),P/N值(zhi)小(xiao)於(yu)2.1,但大於(yu)1.5為(wei)可(ke)疑(yi),P/N小(xiao)於(yu)1.5為(wei)陰(yin)性(xing)。

4、ELISA試劑盒(he)目測定(ding)性(xing)法(fa):加(jia)入底(di)物(wu)經酶(mei)解和終(zhong)止反(fan)應(ying)後,肉(rou)眼(yan)觀(guan)察(cha)陽性(xing)孔顏色(se)明顯深於(競(jing)爭法(fa)則淺於)陰(yin)性(xing)對照(zhao),與陰(yin)性(xing)對照(zhao)的(de)顏色(se)接(jie)近者,判定(ding)為(wei)陰(yin)性(xing)。

為(wei)了(le)達(da)到準(zhun)確的(de)實驗(yan)結(jie)果,取用(yong)試劑時應(ying)遵(zun)守(shou)以下規則,以保(bao)證試(shi)劑不(bu)受(shou)汙(wu)染和不(bu)變質(zhi):

(1)試(shi)劑不(bu)能(neng)與手接(jie)觸。

(2)要(yao)用(yong)潔凈的(de)藥勺(shao),量筒或滴(di)管取用(yong)試劑,*不(bu)準(zhun)用(yong)同壹(yi)種工具(ju)同(tong)時連續取用(yong)多種試劑。取完壹(yi)種試劑後,應(ying)將(jiang)工(gong)具(ju)洗(xi)凈(藥(yao)勺(shao)要擦幹)後,方(fang)可取用(yong)另壹(yi)種試劑。

(3)試(shi)劑取用(yong)後壹(yi)定(ding)要將(jiang)瓶塞(sai)蓋(gai)緊(jin),不(bu)可(ke)放(fang)錯(cuo)瓶蓋(gai)和(he)滴(di)管,絕(jue)不(bu)允許(xu)張冠李戴,用(yong)完後將(jiang)瓶放(fang)回(hui)原(yuan)處(chu)。

(4)已(yi)取出(chu)的(de)試劑不(bu)能(neng)再(zai)放(fang)回原(yuan)試劑瓶內(nei)。

另(ling)外取用(yong)試劑時應(ying)本(ben)著節(jie)約精(jing)神(shen),盡(jin)可能(neng)少(shao)用(yong),這樣既便(bian)於(yu)操(cao)作(zuo)和仔(zai)細(xi)觀(guan)察(cha)現象(xiang),又能(neng)得(de)到較(jiao)好(hao)的(de)實驗(yan)結(jie)果。

澱粉磷酸化(hua)酶(SP)測試盒(he)