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          ELISA法是免(mian)疫(yi)診斷中的壹(yi)項新(xin)技(ji)術,現(xian)已成(cheng)功地(di)應(ying)用(yong)於(yu)多種(zhong)病(bing)原(yuan)微(wei)生(sheng)物(wu)所(suo)引(yin)起的傳(chuan)染(ran)病(bing)、寄生(sheng)蟲(chong)病(bing)及(ji)非傳(chuan)染(ran)病(bing)等(deng)方面(mian)的免疫(yi)診斷。也(ye)已應(ying)用(yong)於(yu)大(da)分子抗(kang)原(yuan)和小(xiao)分(fen)子抗(kang)原(yuan)的定(ding)量測定(ding),根據(ju)已經(jing)使用(yong)的結果,認為(wei)ELISA法具有靈敏(min)、特異(yi)、簡(jian)單(dan)、快(kuai)速(su)、穩(wen)定(ding)及易(yi)於(yu)自(zi)動(dong)化操(cao)作(zuo)等(deng)特點(dian)。不(bu)僅適(shi)用(yong)於(yu)臨床標(biao)本(ben)的檢查(zha),而且(qie)由(you)於壹(yi)天之(zhi)內(nei)可(ke)以(yi)檢(jian)查(zha)幾(ji)百甚至(zhi)上千(qian)份標(biao)本(ben),因此(ci),也(ye)適(shi)合於血清(qing)流(liu)行(xing)病(bing)學(xue)調查(zha)。本(ben)法不(bu)僅可(ke)以(yi)用(yong)來(lai)測定(ding)抗(kang)ti,而且(qie)也(ye)可(ke)用(yong)於(yu)測定(ding)體液中的循環(huan)抗(kang)原(yuan),所以(yi)也(ye)是壹(yi)種早期診(zhen)斷的良好方法。因此ELISA法在生(sheng)物(wu)醫(yi)學(xue)各(ge)領域(yu)的應(ying)用(yong)範(fan)圍日益(yi)擴大(da),

          組成(cheng)結構

          1、血清(qing):操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中避免(mian)任何細(xi)胞(bao)刺激。使用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和內(nei)du素的試管(guan)。收(shou)集(ji)血液後,1000×g離心(xin)10分鐘將(jiang)血紅細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離。

          2、2、血漿:EDTA、檸(ning)檬suan鹽、肝素(su)血漿可(ke)用(yong)於(yu)檢(jian)測。1000×g離心(xin)30分鐘去(qu)除(chu)顆粒(li)。

          3、細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye):1000×g離心(xin)10分鐘去(qu)除(chu)顆粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。

          4、組(zu)織勻漿(jiang):將組織加入(ru)適(shi)量生(sheng)理鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。1000×g離心(xin)10分鐘,取(qu)上清(qing)液(ye)。

          5、保(bao)存(cun):如(ru)果樣(yang)品(pin)不(bu)立即(ji)使用(yong),應(ying)將(jiang)其分(fen)成(cheng)小(xiao)部分-70℃保(bao)存(cun),避免(mian)反復(fu)冷(leng)凍(dong)。盡可(ke)能(neng)的不(bu)要(yao)使用(yong)溶血。如果血清(qing)中大(da)量顆粒(li),檢(jian)測前先(xian)離心(xin)或過(guo)濾(lv)。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或(huo)更高(gao)的溫度加熱(re)解凍(dong)。應(ying)在(zai)室(shi)溫下(xia)解凍(dong)並確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻地(di)充分(fen)解凍(dong)。

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          微(wei)生(sheng)物(wu)葡(pu)聚(ju)糖(tang)合成酶(GLS)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          操(cao)作(zuo)步(bu)驟:

          1、使用(yong)前,將所有試(shi)劑(ji)充分(fen)混(hun)勻。不(bu)要(yao)使液(ye)體產生(sheng)大(da)量的泡(pao)沫,以免(mian)加樣(yang)時加入(ru)大(da)量的氣泡(pao),產生(sheng)加樣(yang)上(shang)的誤差(cha)。

          2、根(gen)據(ju)待(dai)測樣(yang)品(pin)數(shu)量加上(shang)標(biao)準品的數量決定(ding)所需的板條(tiao)數。每(mei)個標(biao)準品和(he)空(kong)白(bai)孔(kong)建議做復(fu)孔(kong)。每(mei)個樣(yang)品(pin)根(gen)據(ju)自己(ji)的數量來(lai)定(ding),能使用(yong)復孔的盡量做復(fu)孔(kong)。

          3、加入(ru)稀(xi)釋好後的標(biao)準品50ul於(yu)反應(ying)孔(kong)、加入(ru)待(dai)測樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反應(ying)孔(kong)內(nei)。立即(ji)加入(ru)50ul標(biao)記(ji)的抗(kang)體。蓋上(shang)膜板(ban),輕輕(qing)振蕩混(hun)勻,37℃溫(wen)育45分鐘。

          4、甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液體,每(mei)孔加滿洗滌液,振(zhen)蕩30秒(miao),甩去洗滌液,用(yong)吸水(shui)紙拍幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操(cao)作(zuo)4次(ci)。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shu)增加壹(yi)次。

          5、每(mei)孔加入(ru)100ul的親和(he)鏈(lian)酶素-HRP,輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻,37℃溫(wen)育30分鐘。

          6、甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液體,每(mei)孔加滿洗滌液,振(zhen)蕩30秒(miao),甩去洗滌液,用(yong)吸水(shui)紙拍幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操(cao)作(zuo)4次(ci)。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shu)增加壹(yi)次。

          7、每(mei)孔加入(ru)底(di)物(wu)A、B各(ge)50ul,輕輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻,37℃溫(wen)育5分鐘。避免(mian)光照(zhao)。

          8、取(qu)出酶標(biao)板(ban),迅速(su)加入(ru)50ul終(zhong)止(zhi)液,加入(ru)終(zhong)止(zhi)液後應(ying)立即(ji)測定(ding)結果。

          9、在(zai)450nm波(bo)長處(chu)測定(ding)各(ge)孔的OD值(zhi)。

          操(cao)作(zuo)註(zhu)意事(shi)項:

          1、試(shi)劑(ji)應(ying)按(an)標(biao)簽說明書(shu)儲(chu)存(cun),使用(yong)前恢復到室(shi)溫。稀(xi)稀(xi)過後的標(biao)準品應(ying)丟(diu)棄,不(bu)可(ke)保(bao)存(cun)

          2、實驗(yan)中不(bu)用(yong)的板條(tiao)應(ying)立即(ji)放(fang)回(hui)包裝(zhuang)袋中,密(mi)封保(bao)存(cun),以(yi)免變質(zhi)。

          3、不(bu)用(yong)的其它試劑(ji)應(ying)包(bao)裝(zhuang)好或(huo)蓋(gai)好。不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)的試劑(ji)不(bu)要(yao)混(hun)用(yong)。保(bao)質(zhi)前使用(yong)。

          4、使用(yong)壹(yi)次性(xing)的吸頭以免交(jiao)叉(cha)汙染(ran),吸取(qu)終止液和(he)底(di)物(wu)A、B液(ye)時,避免(mian)使用(yong)帶(dai)金(jin)屬部分(fen)的加樣(yang)器(qi)。

          5、使用(yong)幹(gan)凈的塑(su)料(liao)容(rong)器(qi)配置(zhi)洗滌液。使用(yong)前充分(fen)混(hun)勻試(shi)劑(ji)盒(he)裏的各(ge)種成(cheng)份(fen)及樣(yang)品(pin)。

          6、底(di)物(wu)A應(ying)揮(hui)發(fa),避免(mian)長時間打(da)開(kai)蓋子。底(di)物(wu)B對(dui)光敏感,避免(mian)長時間暴(bao)露(lu)於光下(xia)。避免(mian)用手(shou)接(jie)觸(chu),有毒(du)。實驗(yan)完(wan)成後應(ying)立即(ji)讀取(qu)OD值(zhi)。

          7、加入(ru)試(shi)劑(ji)的順序(xu)應(ying)壹(yi)致(zhi),以(yi)保(bao)證(zheng)所(suo)有反應(ying)板(ban)孔(kong)溫(wen)育(yu)的時間壹(yi)樣(yang)。按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)中標(biao)明的時間、加液(ye)的量及順(shun)序(xu)進行(xing)溫育(yu)操(cao)作(zuo)。

          壹(yi)般來(lai)講(jiang),96T能(neng)檢(jian)測90個樣(yang)本(ben),48T能(neng)檢測42個樣(yang)本(ben),這裏面(mian)需要(yao)用(yong)標(biao)樣(yang)來(lai)做(zuo)標(biao)準曲線(xian),所以各(ge)位需要(yao)做(zuo)實驗(yan)的老師(shi)們,請(qing)在購買(mai)ELISA試劑(ji)盒(he)的時候註意,需要(yao)做(zuo)多少(shao)個(ge)樣(yang)本(ben),在(zai)決定(ding)買多大(da)規(gui)格(ge)的試劑(ji)盒(he),以(yi)免(mian)做(zuo)實驗(yan)時出現(xian)試(shi)劑(ji)盒(he)不(bu)夠用(yong)或(huo)者(zhe)浪費(fei)!

          原(yuan)理:將特異(yi)性(xing)抗(kang)體包被(bei)於固(gu)相載體表(biao)面(mian),經(jing)洗滌後分(fen)成(cheng)兩組(zu):壹(yi)組加酶標(biao)記(ji)抗(kang)原(yuan)和被(bei)測抗(kang)原(yuan)的混合液,另壹(yi)組只加酶標(biao)記(ji)抗(kang)原(yuan),經孵(fu)育(yu)洗滌後加底(di)物(wu)顯色(se),這兩組(zu)底(di)物(wu)降(jiang)解量之(zhi)差,即(ji)為(wei)所要(yao)測定(ding)的未知(zhi)抗(kang)原(yuan)的量。



          蘋果花葉(ye)病(bing)毒(du)(APMV)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          蘋果褪(tui)綠(lv)葉(ye)斑病(bing)毒(du)(ACLSV)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          蘋果莖溝病(bing)毒(du)(ASGV)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          蘋果銹果類(lei)病(bing)毒(du)(ASSVd)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          蘋果莖痘(dou)病(bing)毒(du)(ASPV)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          禽牛(niu)結核(Mycobacterium bovis)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          蛇(she)蛇(she)毒(du)因(yin)子(CVF)elisa檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

          樹鼩Ⅰ型膠原(yuan)交(jiao)聯(lian)羧基(ji)端(duan)肽(CTXI)elisa檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

          樹鼩盤狀結構域(yu)受體家(jia)族(zu)成員2(DDR2)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          樹鼩乙型肝炎(yan)E抗(kang)原(yuan)(HBeAg)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          水(shui)貂幹(gan)擾素R(IFN-r)elisa檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

          水(shui)牛(niu)乳糖酶(Lactase)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          水(shui)牛(niu)酪蛋白αs1(CSN1S1)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          梭(suo)子蟹(xie)卵黃蛋白(Vn)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          土壤脫氫(qing)酶(DHO)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          土壤脲(niao)酶(UE)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          土壤核酮糖(tang)-1,5-二(er)磷(lin)酸羧化酶(Rubisco)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          土壤GABA合成酶(GABA-S)elisa檢測試劑(ji)盒(he)

          土壤水(shui)解脫氫(qing)酶(HDHO)elisa檢測試劑(ji)盒(he)














































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