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          ELISA法是免(mian)疫診(zhen)斷(duan)中的(de)壹(yi)項新(xin)技術(shu),現(xian)已(yi)成(cheng)功(gong)地(di)應用(yong)於(yu)多(duo)種(zhong)病原(yuan)微(wei)生(sheng)物(wu)所(suo)引(yin)起(qi)的(de)傳(chuan)染(ran)病(bing)、寄生(sheng)蟲病(bing)及(ji)非傳(chuan)染(ran)病(bing)等方(fang)面的(de)免(mian)疫診(zhen)斷(duan)。也(ye)已(yi)應用(yong)於(yu)大(da)分(fen)子抗原(yuan)和小(xiao)分(fen)子抗原(yuan)的(de)定(ding)量測(ce)定,根據(ju)已(yi)經(jing)使(shi)用(yong)的(de)結果(guo),認(ren)為ELISA法具有(you)靈(ling)敏、特(te)異、簡單、快速(su)、穩(wen)定及(ji)易於(yu)自(zi)動化操作等特(te)點。不(bu)僅適用於臨(lin)床標本(ben)的(de)檢查,而且(qie)由於(yu)壹(yi)天(tian)之(zhi)內(nei)可(ke)以檢查幾百(bai)甚(shen)至(zhi)上千份標本(ben),因(yin)此(ci),也(ye)適合於(yu)血清流行病(bing)學調查。本(ben)法不(bu)僅可(ke)以用(yong)來測(ce)定ti,而(er)且(qie)也(ye)可(ke)用於(yu)測(ce)定體液(ye)中的(de)循(xun)環抗原(yuan),所以(yi)也是壹(yi)種(zhong)早期(qi)診(zhen)斷(duan)的(de)良(liang)好方法。因(yin)此(ci)ELISA法在生(sheng)物(wu)醫(yi)學各(ge)領(ling)域的(de)應用(yong)範(fan)圍(wei)日益擴(kuo)大(da),

          組成(cheng)結構(gou)

          1、血清:操作過(guo)程(cheng)中避免(mian)任何(he)細胞刺(ci)激(ji)。使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱原(yuan)和內(nei)du素的(de)試(shi)管(guan)。收集(ji)血液(ye)後(hou),1000×g離心(xin)10分(fen)鐘將血紅(hong)細胞迅速小(xiao)心(xin)地分(fen)離。

          2、2、血漿(jiang):EDTA、檸(ning)檬suan鹽(yan)、肝(gan)素血漿(jiang)可(ke)用於(yu)檢測(ce)。1000×g離心(xin)30分(fen)鐘去除顆粒。

          3、細胞上清液(ye):1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘去除顆粒和聚合物(wu)。

          4、組織(zhi)勻漿(jiang):將(jiang)組織(zhi)加(jia)入適量生(sheng)理(li)鹽水(shui)搗碎。1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘,取上清液(ye)。

          5、保存(cun):如(ru)果(guo)樣品(pin)不立即使(shi)用(yong),應將(jiang)其(qi)分(fen)成小部(bu)分(fen)-70℃保存(cun),避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)冷(leng)凍(dong)。盡可(ke)能的(de)不(bu)要(yao)使(shi)用溶血。如(ru)果(guo)血清中大(da)量顆粒,檢測(ce)前先(xian)離心(xin)或(huo)過(guo)濾。不(bu)要在37℃或(huo)更(geng)高(gao)的(de)溫(wen)度(du)加(jia)熱解凍(dong)。應在室(shi)溫下解凍(dong)並確保樣(yang)品(pin)均勻地充分(fen)解凍(dong)。

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          微(wei)生(sheng)物(wu)阿(e)拉(la)伯糖(tang)苷酶(mei)(ADase)elisa檢測(ce)試劑(ji)盒

          操作步驟(zhou):

          1、使(shi)用前(qian),將所有(you)試(shi)劑(ji)充分(fen)混(hun)勻。不要(yao)使液(ye)體產(chan)生(sheng)大(da)量的(de)泡(pao)沫(mo),以(yi)免(mian)加(jia)樣時加(jia)入大(da)量的(de)氣(qi)泡(pao),產(chan)生(sheng)加(jia)樣上的(de)誤差(cha)。

          2、根(gen)據(ju)待測(ce)樣品(pin)數量加(jia)上標準品(pin)的(de)數(shu)量決(jue)定所(suo)需(xu)的(de)板(ban)條(tiao)數(shu)。每個(ge)標準(zhun)品(pin)和空(kong)白(bai)孔建(jian)議做復(fu)孔(kong)。每(mei)個(ge)樣品(pin)根據(ju)自(zi)己(ji)的(de)數(shu)量來定,能(neng)使用(yong)復(fu)孔(kong)的(de)盡(jin)量做復(fu)孔(kong)。

          3、加(jia)入稀(xi)釋(shi)好後(hou)的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)50ul於反(fan)應孔(kong)、加(jia)入待測(ce)樣品(pin)50ul於反(fan)應孔(kong)內(nei)。立即加(jia)入50ul標記的(de)抗體。蓋(gai)上膜板,輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻,37℃溫育(yu)45分(fen)鐘。

          4、甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液(ye)體,每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye),振(zhen)蕩(dang)30秒,甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye),用(yong)吸(xi)水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此操作4次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板機(ji)洗(xi)滌(di),洗(xi)滌(di)次數(shu)增(zeng)加(jia)壹次。

          5、每(mei)孔加(jia)入100ul的(de)親(qin)和(he)鏈(lian)酶(mei)素(su)-HRP,輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻,37℃溫育(yu)30分(fen)鐘。

          6、甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液(ye)體,每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye),振(zhen)蕩(dang)30秒,甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye),用(yong)吸(xi)水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此操作4次。如(ru)果(guo)用洗(xi)板機(ji)洗(xi)滌(di),洗(xi)滌(di)次數(shu)增(zeng)加(jia)壹次。

          7、每(mei)孔加(jia)入底物(wu)A、B各(ge)50ul,輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻,37℃溫育(yu)5分(fen)鐘。避免(mian)光(guang)照(zhao)。

          8、取(qu)出酶(mei)標板,迅速加(jia)入50ul終止(zhi)液(ye),加(jia)入終止(zhi)液(ye)後(hou)應立即測(ce)定結果(guo)。

          9、在450nm波長處測(ce)定各(ge)孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

          操作註意(yi)事(shi)項:

          1、試(shi)劑(ji)應按標(biao)簽說(shuo)明書儲存(cun),使(shi)用(yong)前(qian)恢(hui)復到室(shi)溫。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)應丟(diu)棄(qi),不(bu)可(ke)保存(cun)

          2、實(shi)驗中不用(yong)的(de)板(ban)條(tiao)應立即放(fang)回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中,密(mi)封保存(cun),以(yi)免(mian)變質(zhi)。

          3、不(bu)用的(de)其(qi)它試(shi)劑(ji)應包(bao)裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)的(de)試(shi)劑(ji)不要混(hun)用(yong)。保質(zhi)前(qian)使用(yong)。

          4、使(shi)用壹(yi)次性的(de)吸(xi)頭(tou)以(yi)免(mian)交叉(cha)汙染(ran),吸取(qu)終止液(ye)和(he)底(di)物A、B液(ye)時,避(bi)免(mian)使用帶金屬(shu)部分(fen)的(de)加(jia)樣器。

          5、使(shi)用幹(gan)凈(jing)的(de)塑(su)料容(rong)器配(pei)置洗(xi)滌(di)液(ye)。使(shi)用(yong)前充分(fen)混(hun)勻試劑(ji)盒裏(li)的(de)各(ge)種(zhong)成份(fen)及(ji)樣品(pin)。

          6、底(di)物A應揮(hui)發(fa),避(bi)免(mian)長時間打開(kai)蓋(gai)子(zi)。底(di)物(wu)B對光(guang)敏感,避免(mian)長時間暴露於(yu)光(guang)下。避免(mian)用手接(jie)觸,有(you)毒。實驗(yan)完成(cheng)後(hou)應立即讀(du)取(qu)OD值。

          7、加(jia)入試劑(ji)的(de)順(shun)序(xu)應壹(yi)致(zhi),以(yi)保證(zheng)所(suo)有(you)反(fan)應板(ban)孔(kong)溫(wen)育(yu)的(de)時間壹樣。按照(zhao)說(shuo)明書中標明的(de)時間、加(jia)液(ye)的(de)量及(ji)順(shun)序(xu)進(jin)行溫(wen)育(yu)操作。

          壹(yi)般(ban)來講(jiang),96T能(neng)檢測(ce)90個(ge)樣本(ben),48T能檢測(ce)42個(ge)樣本(ben),這裏(li)面需(xu)要用標樣(yang)來做標(biao)準曲(qu)線(xian),所(suo)以(yi)各(ge)位(wei)需(xu)要(yao)做(zuo)實驗的(de)老(lao)師(shi)們(men),請在購買ELISA試劑(ji)盒的(de)時候註(zhu)意,需要做(zuo)多少個(ge)樣本(ben),在決(jue)定買多大(da)規(gui)格(ge)的(de)試(shi)劑(ji)盒,以(yi)免(mian)做實驗時出(chu)現(xian)試(shi)劑(ji)盒不(bu)夠(gou)用(yong)或(huo)者(zhe)浪(lang)費(fei)!

          原(yuan)理(li):將特(te)異性抗體包(bao)被於固相(xiang)載體表面,經洗(xi)滌(di)後(hou)分(fen)成兩組:壹(yi)組加(jia)酶標(biao)記抗原(yuan)和被測(ce)抗原(yuan)的(de)混(hun)合液(ye),另(ling)壹(yi)組只(zhi)加(jia)酶標(biao)記抗原(yuan),經孵(fu)育(yu)洗(xi)滌(di)後(hou)加(jia)底物(wu)顯色,這(zhe)兩(liang)組底(di)物(wu)降(jiang)解量之(zhi)差(cha),即為所要測(ce)定的(de)未(wei)知(zhi)抗原(yuan)的(de)量。

          人(ren)葡(pu)萄糖(tang)激(ji)酶(mei)(GCK)ELISA試(shi)劑(ji)盒


          人(ren)周(zhou)期(qi)素(su)依賴性激(ji)酶(mei)5(CDK5)ELISA試(shi)劑(ji)盒


          人(ren)整(zheng)合素(su)連(lian)接(jie)激(ji)酶(mei)1(ILK-1)ELISA試(shi)劑(ji)盒


          人(ren)白(bai)細胞介素(su)受(shou)體相(xiang)關激(ji)酶(mei)(IRAK)ELISA試(shi)劑(ji)盒


          人(ren)磷(lin)酸(suan)烯(xi)醇式(shi)丙(bing)酮(tong)酸(suan)羧(suo)激(ji)酶(mei)(PCK)ELISA試(shi)劑(ji)盒


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          人(ren)磷(lin)酸(suan)化(hua)細胞外(wai)信號(hao)調節激(ji)酶(mei)(pERK)ELISA試(shi)劑(ji)盒


          人(ren)鏈(lian)激(ji)酶(mei)(SK)ELISA試(shi)劑(ji)盒


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