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          ELISA法是(shi)免疫(yi)診(zhen)斷(duan)中的(de)壹項(xiang)新技(ji)術,現已成(cheng)功(gong)地應(ying)用於(yu)多種病原微(wei)生物(wu)所(suo)引(yin)起(qi)的(de)傳染病(bing)、寄生蟲病及(ji)非(fei)傳染病(bing)等(deng)方(fang)面(mian)的(de)免疫(yi)診(zhen)斷(duan)。也已應(ying)用於(yu)大(da)分(fen)子(zi)抗(kang)原和(he)小(xiao)分子(zi)抗(kang)原的(de)定(ding)量測(ce)定(ding),根據已經(jing)使用的(de)結(jie)果(guo),認為ELISA法具(ju)有(you)靈敏(min)、特異、簡單(dan)、快(kuai)速(su)、穩定(ding)及易於(yu)自(zi)動化操作(zuo)等特點。不僅適(shi)用於(yu)臨床標(biao)本(ben)的(de)檢查,而(er)且(qie)由(you)於(yu)壹天(tian)之內可以檢查幾(ji)百(bai)甚至(zhi)上千(qian)份(fen)標(biao)本(ben),因(yin)此(ci),也適(shi)合(he)於(yu)血清流(liu)行(xing)病學(xue)調查。本(ben)法不(bu)僅可以用(yong)來(lai)測(ce)定(ding)抗(kang)ti,而(er)且(qie)也可用於(yu)測(ce)定(ding)體液中的(de)循(xun)環(huan)抗(kang)原,所(suo)以也是壹(yi)種早(zao)期診斷(duan)的(de)良好(hao)方(fang)法。因(yin)此(ci)ELISA法在生物(wu)醫學各(ge)領域(yu)的(de)應(ying)用範(fan)圍(wei)日益(yi)擴大(da),

          組成(cheng)結(jie)構(gou)

          1、血清:操作(zuo)過程(cheng)中避免任(ren)何細胞刺激(ji)。使用不含(han)熱原和(he)內du素(su)的(de)試管(guan)。收集(ji)血液後(hou),1000×g離(li)心10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)紅細胞迅速(su)小(xiao)心地分(fen)離(li)。

          2、2、血漿(jiang):EDTA、檸(ning)檬suan鹽(yan)、肝素(su)血(xue)漿(jiang)可用於(yu)檢測(ce)。1000×g離(li)心30分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆粒(li)。

          3、細胞上清液(ye):1000×g離(li)心10分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆粒(li)和聚合(he)物(wu)。

          4、組織(zhi)勻漿(jiang):將(jiang)組織(zhi)加(jia)入(ru)適(shi)量生理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。1000×g離(li)心10分(fen)鐘(zhong),取上清液(ye)。

          5、保存(cun):如(ru)果樣品(pin)不立即使用,應(ying)將(jiang)其(qi)分成(cheng)小(xiao)部(bu)分(fen)-70℃保存(cun),避免反(fan)復冷凍(dong)。盡(jin)可能(neng)的(de)不要(yao)使用溶(rong)血。如(ru)果血清中大(da)量顆粒(li),檢測(ce)前(qian)先離(li)心或(huo)過濾(lv)。不(bu)要(yao)在37℃或更(geng)高(gao)的(de)溫度(du)加熱(re)解凍(dong)。應(ying)在室溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保樣品(pin)均(jun)勻地充(chong)分(fen)解凍(dong)。

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          微(wei)生物(wu)乙(yi)醇(chun)酸(suan)氧(yang)化酶(mei)(GO)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          操作(zuo)步驟:

          1、使用前,將(jiang)所(suo)有(you)試劑(ji)充(chong)分(fen)混(hun)勻。不(bu)要(yao)使液體產生大(da)量的(de)泡沫(mo),以免加樣時加(jia)入(ru)大(da)量的(de)氣泡(pao),產生加(jia)樣(yang)上的(de)誤(wu)差。

          2、根據待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)數(shu)量加(jia)上標(biao)準品的(de)數(shu)量決(jue)定(ding)所(suo)需(xu)的(de)板(ban)條(tiao)數(shu)。每個標(biao)準品和空(kong)白(bai)孔(kong)建(jian)議做復孔(kong)。每個樣(yang)品(pin)根據自(zi)己(ji)的(de)數(shu)量來(lai)定(ding),能(neng)使用復孔(kong)的(de)盡量做復孔(kong)。

          3、加(jia)入(ru)稀(xi)釋好(hao)後(hou)的(de)標(biao)準品50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔、加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔內。立即加入(ru)50ul標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體。蓋(gai)上膜(mo)板(ban),輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻,37℃溫(wen)育(yu)45分(fen)鐘(zhong)。

          4、甩去孔(kong)內液(ye)體,每孔加(jia)滿洗(xi)滌液(ye),振(zhen)蕩30秒,甩去洗(xi)滌液,用吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操作(zuo)4次。如(ru)果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌(di),洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹次。

          5、每孔加(jia)入(ru)100ul的(de)親和(he)鏈酶(mei)素(su)-HRP,輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻,37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。

          6、甩去孔(kong)內液(ye)體,每孔加(jia)滿洗(xi)滌液(ye),振(zhen)蕩30秒,甩去洗(xi)滌液,用吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操作(zuo)4次。如(ru)果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌(di),洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹次。

          7、每孔加(jia)入(ru)底物(wu)A、B各(ge)50ul,輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻,37℃溫(wen)育(yu)5分(fen)鐘(zhong)。避免光(guang)照(zhao)。

          8、取出酶(mei)標(biao)板(ban),迅速(su)加入(ru)50ul終止液,加入(ru)終止液後應(ying)立即測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)。

          9、在450nm波(bo)長處(chu)測(ce)定(ding)各(ge)孔的(de)OD值。

          操作(zuo)註意事項:

          1、試(shi)劑(ji)應(ying)按標(biao)簽(qian)說明書儲存(cun),使用前恢復到(dao)室溫。稀(xi)稀(xi)過後(hou)的(de)標(biao)準品應(ying)丟棄(qi),不(bu)可保存(cun)

          2、實驗中不用(yong)的(de)板(ban)條(tiao)應(ying)立即放回包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中,密封(feng)保(bao)存(cun),以免變質。

          3、不(bu)用(yong)的(de)其(qi)它(ta)試劑(ji)應(ying)包(bao)裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同(tong)批(pi)號的(de)試劑(ji)不(bu)要(yao)混(hun)用。保(bao)質前(qian)使用。

          4、使用壹次性的(de)吸頭(tou)以免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染,吸取終止液和底物(wu)A、B液(ye)時(shi),避免使用帶(dai)金(jin)屬部(bu)分(fen)的(de)加樣(yang)器。

          5、使用幹凈(jing)的(de)塑(su)料容器配置(zhi)洗(xi)滌(di)液。使用前充分混(hun)勻試(shi)劑(ji)盒(he)裏(li)的(de)各(ge)種成(cheng)份(fen)及樣(yang)品(pin)。

          6、底物(wu)A應(ying)揮發(fa),避(bi)免長時(shi)間(jian)打(da)開(kai)蓋(gai)子(zi)。底物(wu)B對(dui)光(guang)敏(min)感(gan),避免長時(shi)間(jian)暴露(lu)於(yu)光(guang)下(xia)。避(bi)免用手接觸(chu),有(you)毒。實驗完(wan)成(cheng)後(hou)應(ying)立即讀(du)取OD值(zhi)。

          7、加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)的(de)順(shun)序應(ying)壹致(zhi),以保證(zheng)所(suo)有(you)反(fan)應(ying)板(ban)孔(kong)溫育(yu)的(de)時間(jian)壹(yi)樣(yang)。按(an)照(zhao)說明書中標(biao)明的(de)時間(jian)、加(jia)液(ye)的(de)量及(ji)順(shun)序進行(xing)溫育(yu)操作(zuo)。

          壹(yi)般(ban)來(lai)講,96T能(neng)檢測(ce)90個樣(yang)本(ben),48T能(neng)檢測(ce)42個樣(yang)本(ben),這裏(li)面(mian)需(xu)要(yao)用(yong)標(biao)樣來(lai)做標(biao)準曲線,所(suo)以各(ge)位需(xu)要(yao)做實驗的(de)老師們(men),請(qing)在購買(mai)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)時候(hou)註意,需(xu)要(yao)做多少個樣(yang)本(ben),在決(jue)定(ding)買多大(da)規(gui)格(ge)的(de)試劑(ji)盒(he),以(yi)免做實驗時(shi)出現試(shi)劑(ji)盒(he)不(bu)夠(gou)用或者浪(lang)費!

          原理(li):將(jiang)特異性抗(kang)體包(bao)被(bei)於(yu)固相(xiang)載體表面(mian),經洗(xi)滌後分成(cheng)兩組:壹(yi)組加(jia)酶(mei)標(biao)記(ji)抗(kang)原和(he)被(bei)測(ce)抗(kang)原的(de)混(hun)合(he)液,另壹組只(zhi)加(jia)酶(mei)標(biao)記(ji)抗(kang)原,經(jing)孵育(yu)洗(xi)滌(di)後加底物(wu)顯色,這(zhe)兩組底物(wu)降(jiang)解(jie)量之(zhi)差,即為所(suo)要(yao)測(ce)定(ding)的(de)未知抗(kang)原的(de)量。

          雞脂肪細胞型(xing)脂(zhi)肪酸(suan)結(jie)合(he)蛋白(bai)(A-FABP)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)


          雞D型(xing)氨基(ji)酸(suan)氧(yang)化酶(mei)(DAAO)elisa試劑(ji)盒(he)


          雞馬力(li)克(ke)病毒(du)抗(kang)體(Malik virus-Ab)elisa試劑(ji)盒(he)


          雞白(bai)血(xue)病(bing)A;B抗(kang)體(ALV-A;B-Ab)elisa試劑(ji)盒(he)


          雞白(bai)血(xue)病(bing)J抗(kang)體(ALV-J-Ab)elisa試劑(ji)盒(he)


          辣椒(jiao)素(su)(Capsaicin)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)


          柱孢藻(zao)毒(du)素(su)(Cylindrospermopsin)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)


          二(er)氫(qing)辣椒(jiao)素(su)(Dihydrocapsaicin)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)


          辣椒(jiao)神(shen)秘病毒(PCV1)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)


          辣椒(jiao)褪(tui)綠病毒(CCV)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)


          代(dai)森(sen)錳(meng)鋅(xin)(Mancozeb)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)


          麻痹性(xing)貝類毒素(su)(PSP)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)


          腹(fu)瀉(xie)性貝(bei)類毒素(su)(DSP)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)


          神(shen)經(jing)性(xing)貝(bei)毒(NSP)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)


          微(wei)囊(nang)藻(zao)毒(du)素(su)-LR(MC-LR)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)













































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