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          ELISA法是(shi)免疫診斷中的壹項(xiang)新(xin)技術,現已成(cheng)功(gong)地應(ying)用於多(duo)種病原(yuan)微(wei)生(sheng)物所引起的傳染(ran)病、寄生(sheng)蟲(chong)病及(ji)非傳染(ran)病等(deng)方(fang)面(mian)的免疫診斷。也(ye)已應(ying)用於大分(fen)子(zi)抗(kang)原(yuan)和小(xiao)分(fen)子(zi)抗(kang)原(yuan)的定(ding)量(liang)測定(ding),根據(ju)已經使(shi)用(yong)的結(jie)果,認(ren)為(wei)ELISA法具(ju)有(you)靈(ling)敏(min)、特異、簡單、快(kuai)速、穩定(ding)及(ji)易於自動化操(cao)作等特點。不僅(jin)適(shi)用(yong)於臨床標本的(de)檢(jian)查,而(er)且由(you)於壹天之(zhi)內可以檢(jian)查幾百(bai)甚(shen)至上(shang)千份(fen)標本,因(yin)此(ci),也(ye)適合(he)於血(xue)清流行(xing)病學調(tiao)查。本法不(bu)僅可以用(yong)來(lai)測定(ding)ti,而(er)且也(ye)可用於測定(ding)體液中的循(xun)環(huan)抗(kang)原(yuan),所以(yi)也(ye)是壹種早期(qi)診斷的(de)良(liang)好方(fang)法。因(yin)此(ci)ELISA法在(zai)生(sheng)物醫學各領域的(de)應(ying)用範圍(wei)日益擴大,

          組(zu)成(cheng)結(jie)構

          1、血(xue)清:操(cao)作過程(cheng)中避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細胞刺(ci)激。使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和內du素的(de)試(shi)管(guan)。收(shou)集(ji)血(xue)液後(hou),1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘將(jiang)血(xue)紅(hong)細胞迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地分(fen)離(li)。

          2、2、血(xue)漿(jiang):EDTA、檸檬suan鹽、肝素血(xue)漿(jiang)可用於檢測。1000×g離(li)心(xin)30分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒(li)。

          3、細胞上(shang)清液:1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚(ju)合(he)物。

          4、組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang):將(jiang)組(zu)織(zhi)加入(ru)適量(liang)生理鹽水(shui)搗(dao)碎。1000×g離(li)心(xin)10分(fen)鐘,取上(shang)清液。

          5、保(bao)存:如果樣品不立(li)即(ji)使用(yong),應(ying)將(jiang)其分(fen)成(cheng)小(xiao)部分(fen)-70℃保存,避(bi)免(mian)反復冷凍(dong)。盡(jin)可能的(de)不要(yao)使用(yong)溶(rong)血(xue)。如果血(xue)清中大量(liang)顆(ke)粒(li),檢測(ce)前先(xian)離(li)心(xin)或過(guo)濾。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或(huo)更高的(de)溫度加熱解凍。應(ying)在(zai)室(shi)溫下解凍並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解凍。

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          操(cao)作步(bu)驟:

          1、使用(yong)前,將(jiang)所有(you)試(shi)劑充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)。不(bu)要(yao)使液(ye)體產生(sheng)大量(liang)的泡沫,以免(mian)加(jia)樣時加入(ru)大(da)量(liang)的氣(qi)泡,產生加(jia)樣(yang)上(shang)的誤差。

          2、根據(ju)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)數(shu)量(liang)加上(shang)標準(zhun)品(pin)的數(shu)量(liang)決定(ding)所需的(de)板條(tiao)數(shu)。每個(ge)標準(zhun)品(pin)和空(kong)白(bai)孔建(jian)議做復孔。每個(ge)樣(yang)品根(gen)據(ju)自己的數(shu)量(liang)來定(ding),能使(shi)用復(fu)孔的(de)盡(jin)量(liang)做復孔。

          3、加入(ru)稀釋好後(hou)的標準(zhun)品(pin)50ul於反應(ying)孔、加(jia)入(ru)待測(ce)樣品50ul於反應(ying)孔內。立即(ji)加(jia)入50ul標記(ji)的(de)抗(kang)體。蓋上(shang)膜板(ban),輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun),37℃溫(wen)育(yu)45分(fen)鐘。

          4、甩去孔內液體,每孔加(jia)滿(man)洗滌液,振蕩30秒(miao),甩去洗(xi)滌液,用吸水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操(cao)作4次(ci)。如(ru)果用洗板機(ji)洗(xi)滌,洗滌次(ci)數(shu)增加(jia)壹次(ci)。

          5、每孔加(jia)入(ru)100ul的親(qin)和鏈(lian)酶素-HRP,輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻(yun),37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘。

          6、甩去孔內液體,每孔加(jia)滿(man)洗滌液,振蕩30秒(miao),甩去洗(xi)滌液,用吸水(shui)紙(zhi)拍幹(gan)。重(zhong)復此(ci)操(cao)作4次(ci)。如(ru)果用洗板機(ji)洗(xi)滌,洗滌次(ci)數(shu)增加(jia)壹次(ci)。

          7、每孔加(jia)入(ru)底物A、B各50ul,輕輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun),37℃溫(wen)育(yu)5分(fen)鐘。避(bi)免(mian)光(guang)照。

          8、取出(chu)酶標板,迅(xun)速加(jia)入(ru)50ul終(zhong)止(zhi)液(ye),加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)應(ying)立即(ji)測定(ding)結(jie)果。

          9、在(zai)450nm波(bo)長處(chu)測定(ding)各孔的(de)OD值。

          操(cao)作註(zhu)意事項(xiang):

          1、試劑應(ying)按標簽說明書(shu)儲存,使用(yong)前恢復到(dao)室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀過後的標準(zhun)品(pin)應(ying)丟棄,不可保存

          2、實(shi)驗(yan)中不用(yong)的(de)板(ban)條(tiao)應(ying)立即(ji)放回包(bao)裝袋中,密封(feng)保存,以免(mian)變質(zhi)。

          3、不用(yong)的其(qi)它試劑應(ying)包(bao)裝好或蓋好(hao)。不(bu)同(tong)批(pi)號的試劑不要(yao)混(hun)用。保(bao)質(zhi)前使用。

          4、使用(yong)壹次(ci)性(xing)的(de)吸頭以免交(jiao)叉汙(wu)染(ran),吸取終(zhong)止(zhi)液(ye)和(he)底物A、B液時,避(bi)免(mian)使(shi)用(yong)帶(dai)金屬(shu)部(bu)分(fen)的加(jia)樣器(qi)。

          5、使用(yong)幹(gan)凈(jing)的塑料容(rong)器(qi)配置洗滌液。使用(yong)前充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)試(shi)劑盒裏的(de)各種成(cheng)份(fen)及(ji)樣(yang)品(pin)。

          6、底物A應(ying)揮發(fa),避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)打(da)開蓋子(zi)。底物B對光(guang)敏感(gan),避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)暴(bao)露(lu)於光下。避(bi)免(mian)用(yong)手接(jie)觸,有(you)毒(du)。實(shi)驗(yan)完成(cheng)後(hou)應(ying)立即(ji)讀取OD值。

          7、加入(ru)試劑的順序應(ying)壹致(zhi),以(yi)保(bao)證(zheng)所(suo)有(you)反應(ying)板孔溫(wen)育(yu)的時間(jian)壹樣。按(an)照說明書(shu)中標明的(de)時間(jian)、加液(ye)的量(liang)及(ji)順序進(jin)行(xing)溫(wen)育(yu)操(cao)作。

          壹般來(lai)講,96T能檢(jian)測90個(ge)樣(yang)本,48T能檢(jian)測42個(ge)樣(yang)本,這(zhe)裏面(mian)需要(yao)用標樣來(lai)做標準(zhun)曲線,所(suo)以(yi)各位需要(yao)做實(shi)驗(yan)的老師們,請(qing)在(zai)購(gou)買ELISA試(shi)劑盒的(de)時候註(zhu)意,需要(yao)做多(duo)少(shao)個(ge)樣(yang)本,在(zai)決定(ding)買多(duo)大(da)規格的試(shi)劑盒,以(yi)免(mian)做實(shi)驗(yan)時出現試劑盒不(bu)夠(gou)用或者浪(lang)費!

          原(yuan)理:將(jiang)特異性抗(kang)體包(bao)被(bei)於固相載體表(biao)面(mian),經洗(xi)滌後分(fen)成(cheng)兩(liang)組(zu):壹組(zu)加(jia)酶標記(ji)抗(kang)原(yuan)和被(bei)測抗(kang)原(yuan)的混(hun)合液(ye),另壹組(zu)只(zhi)加酶標記(ji)抗(kang)原(yuan),經孵(fu)育(yu)洗(xi)滌後加底物顯色,這(zhe)兩(liang)組(zu)底物降解量(liang)之差(cha),即為(wei)所要(yao)測定(ding)的未知抗原(yuan)的量(liang)。


          雞脂(zhi)肪細胞型(xing)脂(zhi)肪酸(suan)結(jie)合蛋(dan)白(bai)(A-FABP)elisa試(shi)劑盒

          雞D型(xing)氨基(ji)酸(suan)氧化(hua)酶(DAAO)elisa試劑盒

          雞馬(ma)力(li)克(ke)病毒(du)抗體(Malik virus-Ab)elisa試劑盒

          雞白(bai)血(xue)病A;B抗(kang)體(ALV-A;B-Ab)elisa試劑盒

          雞白(bai)血(xue)病J抗(kang)體(ALV-J-Ab)elisa試劑盒

          辣(la)椒(jiao)素(Capsaicin)elisa檢測(ce)試劑盒

          柱(zhu)孢藻(zao)毒(du)素(su)(Cylindrospermopsin)elisa檢測試(shi)劑盒

          二氫(qing)辣(la)椒素(su)(Dihydrocapsaicin)elisa檢(jian)測試(shi)劑盒

          辣(la)椒(jiao)神秘病毒(du)(PCV1)elisa檢測(ce)試劑盒

          辣(la)椒(jiao)褪綠病毒(du)(CCV)elisa檢測(ce)試劑盒

          代(dai)森(sen)錳(meng)鋅(Mancozeb)elisa檢測試(shi)劑盒

          麻痹性(xing)貝(bei)類毒素(su)(PSP)elisa檢測(ce)試劑盒

          腹(fu)瀉(xie)性貝類毒素(su)(DSP)elisa檢測(ce)試劑盒

          神經性(xing)貝(bei)毒(NSP)elisa檢測試劑盒

          微(wei)囊(nang)藻(zao)毒(du)素(su)-LR(MC-LR)elisa檢測試(shi)劑盒














































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