小(xiao)鼠(shu)抗(kang)鴨(ya)甲肝病毒(du)A型(DHAV-1)elisa試劑(ji)盒

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ELISA法是(shi)免疫(yi)診(zhen)斷(duan)中的壹項新技(ji)術(shu)，現(xian)已(yi)成(cheng)功地應(ying)用(yong)於(yu)多種(zhong)病原(yuan)微(wei)生物所(suo)引起(qi)的傳(chuan)染(ran)病、寄(ji)生蟲(chong)病及(ji)非傳(chuan)染(ran)病等(deng)方(fang)面(mian)的免疫(yi)診(zhen)斷(duan)。也(ye)已應(ying)用(yong)於(yu)大分子抗(kang)原(yuan)和(he)小(xiao)分子(zi)抗原的定量測定，根(gen)據(ju)已(yi)經使用(yong)的結果(guo)，認(ren)為ELISA法具(ju)有靈(ling)敏、特異、簡單、快速、穩(wen)定及易(yi)於(yu)自動化操(cao)作等(deng)特(te)點。不(bu)僅(jin)適(shi)用(yong)於(yu)臨床標本的檢查，而且由於(yu)壹(yi)天(tian)之內(nei)可(ke)以(yi)檢(jian)查幾(ji)百(bai)甚至(zhi)上千(qian)份標本,因此(ci)，也(ye)適(shi)合於(yu)血清(qing)流(liu)行(xing)病學(xue)調查。本法不(bu)僅(jin)可以(yi)用(yong)來(lai)測定抗(kang)ti，而(er)且也可(ke)用(yong)於(yu)測定體液(ye)中的循環(huan)抗原，所(suo)以(yi)也(ye)是(shi)壹(yi)種(zhong)早期(qi)診(zhen)斷(duan)的良好方法。因此(ci)ELISA法在生物醫(yi)學(xue)各(ge)領(ling)域(yu)的應(ying)用(yong)範(fan)圍日(ri)益擴大，

組(zu)成結構(gou)

1、血清(qing)：操(cao)作過程中避(bi)免任何(he)細(xi)胞刺激。使用(yong)不(bu)含熱原和(he)內(nei)du素的試管(guan)。收(shou)集血液(ye)後，1000×g離心(xin)10分(fen)鐘將血紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地分離。

2、2、血漿：EDTA、檸(ning)檬suan鹽、肝(gan)素血漿可(ke)用(yong)於(yu)檢測。1000×g離心(xin)30分(fen)鐘去(qu)除(chu)顆粒。

3、細(xi)胞上清(qing)液：1000×g離心(xin)10分(fen)鐘去(qu)除(chu)顆粒和聚(ju)合物(wu)。

4、組(zu)織勻漿：將組(zu)織加入(ru)適(shi)量生理鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。1000×g離心(xin)10分(fen)鐘，取上清(qing)液。

5、保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣品(pin)不立(li)即(ji)使用(yong)，應(ying)將其分(fen)成(cheng)小(xiao)部分(fen)-70℃保(bao)存(cun)，避(bi)免反(fan)復(fu)冷凍。盡(jin)可能的不要(yao)使用(yong)溶血。如(ru)果(guo)血清(qing)中大(da)量顆粒，檢測前(qian)先(xian)離心(xin)或(huo)過濾(lv)。不要在37℃或(huo)更(geng)高(gao)的溫度(du)加熱(re)解凍。應(ying)在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍並確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻地充分解凍。

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操(cao)作步驟：

1、使用(yong)前(qian)，將所(suo)有試劑(ji)充分混勻。不要使液體產(chan)生大量的泡(pao)沫(mo)，以(yi)免加(jia)樣時(shi)加入(ru)大(da)量的氣(qi)泡(pao)，產(chan)生加樣上的誤差(cha)。

2、根(gen)據(ju)待(dai)測樣品(pin)數量加(jia)上標準品的數量決(jue)定所(suo)需的板條(tiao)數。每個標準品和空白孔建(jian)議做(zuo)復(fu)孔。每個樣品(pin)根(gen)據(ju)自己的數量來(lai)定，能使(shi)用(yong)復(fu)孔的盡(jin)量做(zuo)復(fu)孔。

3、加入(ru)稀釋好後的標準品50ul於反(fan)應(ying)孔(kong)、加(jia)入(ru)待(dai)測樣品(pin)50ul於反(fan)應(ying)孔(kong)內(nei)。立(li)即(ji)加入(ru)50ul標記的抗體(ti)。蓋上膜(mo)板，輕輕振(zhen)蕩混勻，37℃溫育(yu)45分(fen)鐘。

4、甩去孔(kong)內(nei)液(ye)體(ti)，每孔加滿洗滌液(ye)，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌液(ye)，用(yong)吸(xi)水紙拍(pai)幹。重復(fu)此操(cao)作4次。如(ru)果(guo)用(yong)洗板(ban)機洗滌，洗滌次數增(zeng)加(jia)壹次。

5、每孔加入(ru)100ul的親和(he)鏈酶(mei)素-HRP，輕輕振(zhen)蕩混勻，37℃溫育(yu)30分(fen)鐘。

6、甩去孔(kong)內(nei)液(ye)體(ti)，每孔加滿洗滌液(ye)，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌液(ye)，用(yong)吸(xi)水紙拍(pai)幹。重復(fu)此操(cao)作4次。如(ru)果(guo)用(yong)洗板(ban)機洗滌，洗滌次數增(zeng)加(jia)壹次。

7、每孔加入(ru)底物A、B各(ge)50ul，輕輕振(zhen)蕩混勻，37℃溫育(yu)5分(fen)鐘。避(bi)免光(guang)照(zhao)。

8、取出酶(mei)標板，迅(xun)速(su)加入(ru)50ul終止液，加入(ru)終止液後應(ying)立(li)即(ji)測定結果(guo)。

9、在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定各(ge)孔(kong)的OD值。

操(cao)作註意事(shi)項：

1、試劑(ji)應(ying)按(an)標簽說(shuo)明(ming)書儲存，使用(yong)前(qian)恢復(fu)到室溫(wen)。稀稀過後的標準品應(ying)丟棄(qi)，不可(ke)保(bao)存(cun)

2、實驗中不(bu)用(yong)的板條(tiao)應(ying)立(li)即(ji)放回(hui)包(bao)裝袋中，密(mi)封(feng)保(bao)存(cun)，以(yi)免變(bian)質(zhi)。

3、不用(yong)的其它試劑(ji)應(ying)包(bao)裝好或蓋好。不同批(pi)號(hao)的試劑(ji)不(bu)要混用(yong)。保(bao)質(zhi)前(qian)使用(yong)。

4、使用(yong)壹(yi)次性(xing)的吸頭(tou)以(yi)免交(jiao)叉(cha)汙染(ran)，吸取終止液和底物A、B液時(shi)，避免使(shi)用(yong)帶(dai)金(jin)屬(shu)部(bu)分(fen)的加樣器。

5、使用(yong)幹凈(jing)的塑(su)料容器配置洗滌液(ye)。使(shi)用(yong)前(qian)充分混勻試劑(ji)盒裏(li)的各(ge)種(zhong)成(cheng)份及樣品(pin)。

6、底物A應(ying)揮(hui)發(fa)，避(bi)免長(chang)時(shi)間(jian)打開(kai)蓋子。底物B對(dui)光(guang)敏感，避免長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)光下(xia)。避免用(yong)手接觸(chu)，有(you)毒(du)。實(shi)驗(yan)完(wan)成(cheng)後應(ying)立(li)即(ji)讀(du)取OD值(zhi)。

7、加入(ru)試劑(ji)的順序應(ying)壹(yi)致(zhi)，以(yi)保(bao)證(zheng)所(suo)有反(fan)應(ying)板(ban)孔(kong)溫(wen)育(yu)的時(shi)間(jian)壹樣。按(an)照(zhao)說明(ming)書中標明的時(shi)間(jian)、加液(ye)的量及(ji)順序進(jin)行(xing)溫育(yu)操(cao)作。

壹般來(lai)講，96T能檢(jian)測90個樣本(ben)，48T能檢(jian)測42個樣本(ben)，這裏(li)面(mian)需要(yao)用(yong)標樣來(lai)做(zuo)標準曲線，所(suo)以(yi)各(ge)位(wei)需要(yao)做(zuo)實(shi)驗(yan)的老(lao)師(shi)們(men)，請在購(gou)買(mai)ELISA試劑(ji)盒的時(shi)候(hou)註意，需要(yao)做(zuo)多少個樣本(ben)，在決(jue)定買多大(da)規(gui)格的試劑(ji)盒，以(yi)免做(zuo)實(shi)驗(yan)時(shi)出現(xian)試劑(ji)盒不夠用(yong)或(huo)者浪費！

原理：將特(te)異(yi)性(xing)抗體(ti)包(bao)被於固相(xiang)載(zai)體表(biao)面(mian)，經洗滌後(hou)分(fen)成(cheng)兩組(zu)：壹組(zu)加酶標記抗原(yuan)和被測抗原的混合液，另壹組(zu)只(zhi)加(jia)酶(mei)標記抗原(yuan)，經孵育(yu)洗滌後(hou)加(jia)底物顯(xian)色，這兩(liang)組(zu)底物降解量之差(cha)，即(ji)為所(suo)要測定的未(wei)知抗(kang)原的量。

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