小鼠線粒(li)體呼(hu)吸鏈(MRC)elisa試劑(ji)盒

小(xiao)鼠(shu)線(xian)粒(li)體呼(hu)吸鏈(MRC)elisa試劑(ji)盒

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ELISA法是(shi)免(mian)疫診斷中的壹項(xiang)新技(ji)術，現(xian)已成功地(di)應(ying)用(yong)於多種(zhong)病(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)所(suo)引(yin)起(qi)的傳染(ran)病(bing)、寄(ji)生(sheng)蟲(chong)病(bing)及(ji)非(fei)傳(chuan)染(ran)病(bing)等(deng)方(fang)面的免疫(yi)診斷。也(ye)已應用(yong)於(yu)大(da)分子抗(kang)原和小(xiao)分子抗(kang)原的定(ding)量(liang)測(ce)定(ding)，根(gen)據已經使用的結果，認為ELISA法具(ju)有(you)靈敏(min)、特(te)異(yi)、簡(jian)單、快(kuai)速、穩(wen)定(ding)及(ji)易(yi)於(yu)自(zi)動(dong)化(hua)操作等(deng)特點(dian)。不(bu)僅(jin)適(shi)用(yong)於臨床標本的檢查(zha)，而且(qie)由(you)於壹(yi)天之(zhi)內可(ke)以(yi)檢查(zha)幾百甚至(zhi)上(shang)千份標(biao)本,因(yin)此(ci)，也(ye)適(shi)合(he)於血清(qing)流(liu)行(xing)病(bing)學(xue)調查(zha)。本法不(bu)僅(jin)可(ke)以(yi)用(yong)來測定(ding)抗(kang)ti，而且(qie)也(ye)可用(yong)於測(ce)定(ding)體液(ye)中(zhong)的循環(huan)抗(kang)原，所(suo)以(yi)也(ye)是壹(yi)種(zhong)早期(qi)診斷的良好方(fang)法。因(yin)此(ci)ELISA法在生(sheng)物醫(yi)學各領(ling)域(yu)的應用(yong)範(fan)圍日(ri)益擴(kuo)大(da)，

組成(cheng)結(jie)構

1、血清(qing)：操(cao)作過程中避免任(ren)何細胞(bao)刺激。使(shi)用不(bu)含(han)熱(re)原和內(nei)du素(su)的試管(guan)。收集(ji)血液(ye)後(hou)，1000×g離心10分鐘將血紅(hong)細胞(bao)迅速(su)小(xiao)心地(di)分離。

2、2、血漿(jiang)：EDTA、檸檬suan鹽、肝(gan)素(su)血漿(jiang)可(ke)用於檢(jian)測(ce)。1000×g離心30分鐘去除(chu)顆(ke)粒。

3、細胞(bao)上清(qing)液(ye)：1000×g離心10分鐘去除(chu)顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物。

4、組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取(qu)上(shang)清(qing)液(ye)。

5、保存(cun)：如(ru)果樣(yang)品不(bu)立(li)即使用，應將其(qi)分成小部分-70℃保存(cun)，避免反(fan)復冷凍。盡可(ke)能的不(bu)要(yao)使(shi)用溶(rong)血。如(ru)果血清(qing)中(zhong)大(da)量(liang)顆(ke)粒，檢(jian)測前先離心或(huo)過濾(lv)。不(bu)要(yao)在37℃或(huo)更高(gao)的溫度(du)加熱解(jie)凍。應在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確保樣(yang)品均勻(yun)地(di)充分解(jie)凍。

小鼠(shu)線(xian)粒體呼(hu)吸鏈(MRC)elisa試劑(ji)盒

操(cao)作步驟(zhou)：

1、使(shi)用前，將(jiang)所(suo)有(you)試劑(ji)充分混(hun)勻。不(bu)要(yao)使(shi)液(ye)體產生(sheng)大(da)量(liang)的泡(pao)沫(mo)，以(yi)免(mian)加樣(yang)時(shi)加入(ru)大(da)量(liang)的氣泡(pao)，產生(sheng)加樣(yang)上(shang)的誤差(cha)。

2、根(gen)據待測樣(yang)品數量(liang)加上標準(zhun)品的數量(liang)決(jue)定(ding)所(suo)需(xu)的板(ban)條數。每(mei)個(ge)標(biao)準(zhun)品和空(kong)白(bai)孔建議(yi)做復孔。每(mei)個(ge)樣(yang)品根據自(zi)己(ji)的數量(liang)來定(ding)，能使(shi)用(yong)復孔的盡量(liang)做(zuo)復孔。

3、加入(ru)稀(xi)釋(shi)好後(hou)的標準(zhun)品50ul於反(fan)應孔、加入(ru)待(dai)測(ce)樣(yang)品50ul於反(fan)應孔內。立(li)即加入(ru)50ul標(biao)記(ji)的抗(kang)體。蓋上(shang)膜(mo)板(ban)，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫(wen)育(yu)45分鐘。

4、甩(shuai)去孔內液(ye)體，每(mei)孔加滿洗(xi)滌液(ye)，振(zhen)蕩30秒，甩去(qu)洗(xi)滌液(ye)，用(yong)吸水紙拍幹(gan)。重(zhong)復此操作4次。如(ru)果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌，洗(xi)滌次數增加壹次。

5、每(mei)孔加入(ru)100ul的親和鏈酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。

6、甩(shuai)去孔內液(ye)體，每(mei)孔加滿洗(xi)滌液(ye)，振(zhen)蕩30秒，甩去(qu)洗(xi)滌液(ye)，用(yong)吸水紙拍幹(gan)。重(zhong)復此操作4次。如(ru)果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌，洗(xi)滌次數增加壹次。

7、每(mei)孔加入(ru)底(di)物(wu)A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃溫(wen)育(yu)5分鐘。避免光(guang)照(zhao)。

8、取(qu)出(chu)酶(mei)標(biao)板(ban)，迅(xun)速加入(ru)50ul終止(zhi)液(ye)，加入(ru)終止(zhi)液(ye)後(hou)應(ying)立(li)即測定(ding)結(jie)果。

9、在450nm波(bo)長(chang)處測定(ding)各(ge)孔的OD值。

操(cao)作註意事項(xiang)：

1、試劑(ji)應(ying)按標簽說明(ming)書儲(chu)存(cun)，使用前恢復到室(shi)溫(wen)。稀稀過後(hou)的標準(zhun)品應丟(diu)棄(qi)，不(bu)可(ke)保存(cun)

2、實(shi)驗中(zhong)不(bu)用(yong)的板(ban)條應立(li)即放回包裝(zhuang)袋(dai)中，密(mi)封保存(cun)，以免變質。

3、不(bu)用(yong)的其它(ta)試劑(ji)應(ying)包裝(zhuang)好或(huo)蓋(gai)好。不(bu)同批號(hao)的試劑(ji)不(bu)要(yao)混(hun)用。保質(zhi)前使用(yong)。

4、使(shi)用壹次性(xing)的吸頭以免交叉汙(wu)染(ran)，吸(xi)取(qu)終止(zhi)液(ye)和底(di)物(wu)A、B液(ye)時(shi)，避免使(shi)用(yong)帶(dai)金屬部分的加樣(yang)器(qi)。

5、使(shi)用幹(gan)凈的塑料容(rong)器(qi)配置洗(xi)滌液(ye)。使(shi)用前充分混(hun)勻試劑(ji)盒裏的各種(zhong)成(cheng)份及(ji)樣(yang)品。

6、底(di)物A應(ying)揮發(fa)，避免長(chang)時(shi)間(jian)打開蓋(gai)子(zi)。底(di)物B對光(guang)敏(min)感(gan)，避免長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於光(guang)下(xia)。避免用(yong)手(shou)接觸，有(you)毒(du)。實(shi)驗完成後(hou)應(ying)立(li)即讀取(qu)OD值。

7、加入(ru)試劑(ji)的順序應壹(yi)致(zhi)，以保證所(suo)有(you)反(fan)應(ying)板(ban)孔溫育(yu)的時(shi)間(jian)壹(yi)樣(yang)。按照(zhao)說(shuo)明書中標(biao)明(ming)的時(shi)間(jian)、加液(ye)的量(liang)及(ji)順序進行(xing)溫育(yu)操(cao)作。

壹(yi)般來講，96T能檢(jian)測(ce)90個(ge)樣(yang)本，48T能檢(jian)測(ce)42個(ge)樣(yang)本，這裏面(mian)需要用(yong)標(biao)樣(yang)來做標準曲(qu)線，所(suo)以(yi)各(ge)位(wei)需要做實(shi)驗的老師們(men)，請在購買ELISA試劑(ji)盒的時(shi)候(hou)註意，需要(yao)做多少(shao)個(ge)樣(yang)本，在決(jue)定(ding)買多大(da)規格(ge)的試劑(ji)盒，以(yi)免(mian)做實(shi)驗時(shi)出(chu)現(xian)試劑(ji)盒不(bu)夠用(yong)或(huo)者(zhe)浪費！

原理：將(jiang)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)體包被於(yu)固(gu)相載(zai)體表面(mian)，經洗(xi)滌後(hou)分成兩組：壹(yi)組(zu)加酶標記(ji)抗(kang)原和被(bei)測(ce)抗(kang)原的混(hun)合液(ye)，另(ling)壹組(zu)只(zhi)加酶標記(ji)抗(kang)原，經孵育(yu)洗(xi)滌後(hou)加底物顯(xian)色，這(zhe)兩組底(di)物(wu)降(jiang)解(jie)量(liang)之(zhi)差(cha)，即為所(suo)要(yao)測(ce)定(ding)的未知抗(kang)原的量(liang)。

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