植(zhi)物(wu)花(hua)色苷(gan)合(he)成酶(mei)/花(hua)色素(su)(ANS)ELISA試劑盒

檢(jian)測(ce)原理

試(shi)劑(ji)盒(he)采用(yong)雙抗原壹-步夾心法(fa)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫吸(xi)附(fu)試(shi)驗(yan)(ELISA) 。往(wang)預先(xian)包被(bei)病(bing)毒(du)性腹(fu)瀉病(bing)毒(du)抗(kang)ti的(de)包(bao)被(bei)微(wei)孔(kong)中，依次加(jia)入標本、HRP標記(ji)的(de)檢測(ce)抗原(yuan)，經(jing)過溫育並(bing)徹(che)di洗滌。用(yong)底(di)物(wu)TMB顯(xian)色(se)，TMB在(zai)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)成藍(lan)色，並(bing)在(zai)suan的(de)作用(yong)下轉化(hua)成最(zui)終(zhong)的黃(huang)色。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在(zai)450NM波(bo)長下測(ce)定吸(xi)光(guang)度(du)(OD值) ，與CUTOFF值相比(bi)較(jiao)，從(cong)而判(pan)定標本中豬病(bing)毒(du)性腹(fu)瀉病(bing)毒(du)(BVDV) 的(de)存(cun)在(zai)與否。

樣(yang)品收(shou)集(ji)、處理及保存(cun)方法(fa)

1.血清(qing):使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原和內(nei)毒(du)素(su)的試管，操(cao)作過程中避免(mian)任何細胞(bao)刺激，收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，3000轉離心10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清(qing)和紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速(su)小心地(di)分離。

2.血漿: EDTA、檸(ning)檬suan鹽(yan)或(huo)肝素(su)抗凝(ning)。3000轉離心30分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。

3.細胞(bao)上清(qing)液(ye): 3000轉離心10分(fen)鐘(zhong)去除顆粒和聚(ju)合(he)物(wu)。

4.組(zu)織勻(yun)漿:將(jiang)組(zu)織加(jia)入適(shi)量(liang)生理鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000轉 離心10分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。

5.保(bao)存(cun):如果(guo)樣(yang)本收(shou)集(ji)後(hou)不及時檢測(ce)，請(qing)按壹(yi)次用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於(yu)-20°C， 避免(mian)反

復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室溫(wen)下解(jie)凍(dong)並(bing)確保(bao)樣(yang)品均(jun)勻地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。

自(zi)備(bei)物(wu)品(pin)

1.酶(mei)標儀(yi)(450NM)

2.高精度(du)加(jia)樣(yang)器及槍(qiang)頭(tou): 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒(heng)溫(wen)箱

操(cao)作註(zhu)意(yi)事項(xiang)

1.試(shi)劑(ji)盒(he)保存(cun)在(zai)2-8°C，使(shi)用(yong)前室(shi)溫平(ping)衡20分(fen)鐘(zhong)。從(cong)冰(bing)箱取(qu)出的(de)濃(nong)縮洗滌液(ye)會有結晶，這屬於(yu)正常現(xian)象(xiang)，水(shui)浴(yu)加(jia)熱使(shi)結晶完quan溶(rong)解(jie)後(hou)再(zai)使(shi)用。

2.實(shi)驗(yan)中不用(yong)的板(ban)條(tiao)應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回(hui)自(zi)封袋中，密封(低溫幹(gan)燥(zao))保(bao)存(cun)。

3.預(yu)處(chu)理後(hou)的樣(yang)本請(qing)按照操(cao)作步驟(zhou)用(yong)樣(yang)ben稀(xi)釋(shi)ye適(shi)當(dang)稀(xi)釋(shi)以(yi)達(da)到試劑(ji)盒(he)的的最(zui)jia檢(jian)測(ce)效果(guo)。.

4.嚴(yan)格按(an)照說明書中標明的時間、加(jia)液(ye)量及順序進(jin)行溫(wen)育操作。

5.所(suo)有液(ye)體(ti)組(zu)分使(shi)用(yong)前充(chong)分搖勻(yun)。

植(zhi)物(wu)花(hua)色苷(gan)合(he)成酶(mei)/花(hua)色素(su)(ANS)ELISA試劑盒

常用方法(fa)：

1. 夾心法(fa)：

夾心法(fa)常用於(yu)檢測(ce)大(da)分(fen)子(zi)抗原，壹(yi)般(ban)的(de)操作步驟(zhou)為(wei):

a. 將(jiang)具(ju)有專壹(yi)性的(de)抗(kang)ti固(gu)著(zhu)（coating）於(yu)塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)，完成(cheng)後(hou)洗去多余抗(kang)ti

b. 加(jia)入待(dai)測(ce)檢體(ti)，檢(jian)體(ti)中若(ruo)含(han)有待(dai)測(ce)的抗(kang)原，則其(qi)會(hui)與塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的(de)抗(kang)ti進(jin)行專壹(yi)性鍵(jian)結

c. 洗去多余待(dai)測(ce)檢體(ti)，加(jia)入另(ling)壹(yi)種對抗原專壹(yi)的壹(yi)次抗(kang)ti，與待(dai)測(ce)抗原(yuan)進(jin)行鍵(jian)結

d. 洗去多余未鍵(jian)結壹次抗(kang)ti，加(jia)入帶(dai)有酶的(de)二(er)次抗(kang)ti，與壹次抗(kang)ti鍵(jian)結

e. 洗去多余未鍵(jian)結二(er)次抗(kang)ti，加(jia)入酶(mei)底(di)物(wu)使(shi)酵素(su)呈色(se)，以肉眼(yan)或儀器讀(du)取(qu)呈色(se)結果(guo)

原(yuan)理：針(zhen)對抗原分子(zi)上(shang)2個(ge)不(bu)同抗(kang)原(yuan)決定簇的單克(ke)隆抗(kang)ti分(fen)別(bie)作為(wei)固相抗(kang)ti和(he)酶(mei)標抗(kang)ti，將(jiang)大(da)分子抗原(yuan)分(fen)別(bie)制(zhi)備(bei)固(gu)相(xiang)抗(kang)原和(he)酶(mei)標抗(kang)原(yuan)結合(he)物(wu)。

2. 間接(jie)法(fa)

間接(jie)法(fa)常用於(yu)檢測(ce)抗(kang)ti，壹(yi)般(ban)的(de)操作步驟(zhou)為(wei)：

a. 將(jiang)已(yi)知(zhi)的抗(kang)原固(gu)著(zhu)於(yu)塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)，完成(cheng)後(hou)洗去多余的抗(kang)原(yuan)。

b. 加(jia)入待(dai)測(ce)檢體(ti)，檢(jian)體(ti)中若(ruo)含(han)有待(dai)測(ce)的壹(yi)次抗(kang)ti，則(ze)其(qi)會(hui)與塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的(de)抗(kang)原進(jin)行專壹(yi)性鍵(jian)結。

c. 洗去多余待(dai)測(ce)檢體(ti)，加(jia)入帶(dai)有酶的(de)二(er)次抗(kang)ti，與待(dai)測(ce)的壹(yi)次抗(kang)ti鍵(jian)結。

d. 洗去多余未鍵(jian)結二(er)次抗(kang)ti，加(jia)入酶(mei)底(di)物(wu)使(shi)酶(mei)呈色(se)，藉(ji)儀(yi)器（ELISA reader）測(ce)定塑膠(jiao)盤中的吸(xi)光(guang)值（OD值），以評估有色終(zhong)產(chan)物(wu)的(de)含(han)量(liang)即(ji)可(ke)測(ce)量待(dai)測(ce)抗(kang)ti的(de)含(han)量(liang)。

原(yuan)理：利(li)用酶(mei)標記(ji)的(de)抗抗(kang)ti以(yi)檢(jian)測(ce)已(yi)與固相(xiang)結合(he)的受(shou)檢(jian)抗(kang)ti。

3. 競(jing)爭法(fa)

競(jing)爭法(fa)是(shi)壹種較(jiao)少用到的ELISA檢(jian)測(ce)機制，壹般(ban)用於(yu)檢測(ce)小分(fen)子抗原(yuan)，其(qi)操(cao)作步驟(zhou)為(wei)：

a. 將(jiang)具(ju)有專壹(yi)性的(de)抗(kang)ti固(gu)著(zhu)於(yu)塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)，完成(cheng)後(hou)洗去多余抗(kang)ti

b. 加(jia)入待(dai)測(ce)檢體(ti)，使(shi)檢(jian)體(ti)中的待(dai)測(ce)抗原(yuan)與塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的(de)抗(kang)ti進(jin)行專壹(yi)性鍵(jian)結

c. 加(jia)入帶(dai)有酶的(de)抗(kang)原，此(ci)抗(kang)原(yuan)也(ye)可與塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的(de)抗(kang)ti進(jin)行專壹(yi)性鍵(jian)結，由(you)於(yu)塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)固(gu)著(zhu)的(de)抗(kang)ti數(shu)量(liang)有限(xian)，因(yin)此(ci)當(dang)檢(jian)體(ti)中抗原(yuan)的量(liang)越(yue)多，則(ze)帶(dai)有酶的(de)抗(kang)原可(ke)鍵(jian)結的固(gu)著(zhu)抗(kang)ti就越(yue)少，亦(yi)即(ji)，兩(liang)種抗(kang)原皆競相(xiang)與塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)抗(kang)ti鍵(jian)結，即(ji)所(suo)謂競(jing)爭法(fa)之(zhi)由(you)來。

d. 洗去檢(jian)體(ti)與帶(dai)有酶的(de)抗(kang)原，加(jia)入酶(mei)底(di)物(wu)使(shi)酶(mei)呈色(se)，當檢體(ti)中抗原(yuan)量越(yue)多，代(dai)表塑膠(jiao)孔(kong)盤內(nei)留(liu)下之(zhi)帶(dai)有酶的(de)抗(kang)原越(yue)少，顯(xian)色(se)也就越(yue)淺。

e. 當(dang)需(xu)要(yao)偵(zhen)測(ce)無法(fa)獲(huo)得(de)兩(liang)種以(yi)上單壹性(xing)抗(kang)ti的(de)抗(kang)原(yuan)，或是(shi)不易得到足(zu)夠(gou)的純(chun)化(hua)抗(kang)ti以(yi)固(gu)著(zhu)於(yu)孔(kong)盤上(shang)時，壹般會考(kao)慮使(shi)用競爭法(fa)ELISA。

標本要(yao)求 :

1．不(bu)能檢(jian)測(ce)含(han)NaN3的(de)樣(yang)品，因(yin)NaN3辣(la)根過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)（HRP）活(huo)性。

2．標本采集(ji)後(hou)盡早進(jin)行提(ti)取(qu)，提取(qu)按相(xiang)關文獻進(jin)行，提(ti)取(qu)後(hou)應(ying)盡快(kuai)進(jin)行實(shi)驗(yan)。若(ruo)不(bu)能馬(ma)上進(jin)行試(shi)驗(yan)，可(ke)將(jiang)標本放(fang)於(yu)-20℃保存(cun)，但應(ying)避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)。

3.各(ge)步加(jia)樣(yang)均應(ying)使用(yong)加(jia)樣(yang)器，並(bing)經(jing)常校對其準(zhun)確性(xing)，以避免(mian)試驗(yan)誤(wu)差。壹(yi)次加(jia)樣(yang)時間控(kong)

制(zhi)在(zai)5分鐘(zhong)內(nei)，如標本數(shu)量多，推(tui)薦(jian)使(shi)用排(pai)槍(qiang)加(jia)樣(yang)。

4.請(qing)每(mei)次測(ce)定的同時做標準(zhun)曲線(xian)，做復(fu)孔(kong)。如標本中待(dai)測(ce)物(wu)質含(han)量(liang)過高(樣(yang)本OD值大於(yu)

標準(zhun)品孔(kong)孔(kong)的OD值)，請(qing)先用樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹(yi)定倍數(n倍) 後(hou)再(zai)測(ce)定，計算時請(qing)

後(hou)乘以總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數(xnx5)

5.封板膜只(zhi)限(xian)壹次性(xing)使(shi)用，以(yi)避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

6.底(di)物(wu)請(qing)避光(guang)保(bao)存(cun)。

7.嚴(yan)格按(an)照說明書的(de)操(cao)作進(jin)行，試(shi)驗(yan)結果(guo)判定必須以(yi)酶(mei)標儀(yi)讀(du)數為準(zhun).

8.所(suo)有樣(yang)品，洗滌液(ye)和各(ge)種廢(fei)棄(qi)物(wu)都(dou)應(ying)按傳(chuan)染(ran)物(wu)處(chu)理。

9.本試(shi)劑不同批(pi)號組(zu)分不(bu)得(de)混用(yong)。

訂(ding)購說明:

※關於(yu)產(chan)品售(shou)價(jia),由(you)於(yu)市(shi)場(chang)的(de)不穩定性,價(jia)格變動(dong)是(shi)必然(ran)的(de),但是(shi)我(wo)們(men)可(ke)以(yi)提供當(dang)下公允(yun)的(de)市(shi)場(chang)價(jia)格,批(pi)量(liang)訂(ding)購還(hai)可享(xiang)受相(xiang)應(ying)的優(you)惠(hui)活動(dong);

※關於(yu)產(chan)品的(de)具(ju)體(ti)信(xin)息,本頁(ye)面展示(shi)的內(nei)容僅供參(can)考(kao),而詳(xiang)細的(de)產(chan)品信(xin)息,可以(yi)咨(zi)詢(xun)我(wo)們(men);

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※關於(yu)服(fu)務(wu),我(wo)們(men)提(ti)供(gong)完整(zheng)的售(shou)前售(shou)後(hou)服(fu)務(wu),並(bing)貫穿(chuan)妳的整(zheng)個實(shi)驗(yan)過程,如遇(yu)技(ji)術(shu)問(wen)題,可隨時聯系我(wo)們(men),我(wo)們(men)真誠地為您(nin)答(da)疑解(jie)惑。

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