植物(wu)吡(bi)咯(ge)啉-5-羧(suo)酸(suan)合成酶(mei)(P5CS)ELISA試劑盒(he)

檢(jian)測原理(li)

試劑盒(he)采用(yong)雙(shuang)抗(kang)原壹-步(bu)夾(jia)心法酶聯免疫(yi)吸附(fu)試驗(ELISA) 。往(wang)預(yu)先包被(bei)病毒性腹瀉病(bing)毒抗(kang)ti的(de)包(bao)被(bei)微孔中，依(yi)次(ci)加入(ru)標(biao)本(ben)、HRP標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測抗原(yuan)，經(jing)過溫育並(bing)徹(che)di洗滌。用(yong)底(di)物TMB顯(xian)色(se)，TMB在(zai)過氧化(hua)物酶的催化(hua)下轉化(hua)成藍色(se)，並在(zai)suan的(de)作用(yong)下轉化(hua)成最(zui)終的黃(huang)色(se)。用(yong)酶標(biao)儀在450NM波(bo)長(chang)下測定吸光度(OD值(zhi)) ，與(yu)CUTOFF值(zhi)相比較(jiao)，從(cong)而(er)判定標(biao)本(ben)中豬病(bing)毒性腹瀉病(bing)毒(BVDV) 的(de)存(cun)在與(yu)否。

樣品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理(li)及保(bao)存(cun)方法(fa)

1.血(xue)清:使用(yong)不含熱(re)原和(he)內(nei)毒素(su)的試管，操(cao)作過程中(zhong)避免任何(he)細(xi)胞刺激(ji)，收(shou)集(ji)血液後，3000轉離(li)心10分鐘將血(xue)清和(he)紅(hong)細胞迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離(li)。

2.血(xue)漿(jiang): EDTA、檸(ning)檬suan鹽(yan)或(huo)肝(gan)素(su)抗凝(ning)。3000轉離(li)心30分鐘取上清。

3.細(xi)胞上清液: 3000轉離(li)心10分鐘去除(chu)顆粒(li)和(he)聚(ju)合物。

4.組(zu)織(zhi)勻漿:將組(zu)織加入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎。3000轉 離(li)心10分鐘取上清。

5.保(bao)存(cun):如(ru)果樣本(ben)收(shou)集(ji)後不及時檢(jian)測，請按壹次(ci)用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於(yu)-20°C， 避免反

復(fu)凍(dong)融，在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍(dong)並確保(bao)樣品(pin)均(jun)勻地(di)充分解(jie)凍(dong)。

自備物(wu)品(pin)

1.酶(mei)標(biao)儀(450NM)

2.高(gao)精(jing)度加樣器及槍頭: 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒(heng)溫(wen)箱

操(cao)作註意事(shi)項(xiang)

1.試劑盒(he)保(bao)存(cun)在2-8°C，使用(yong)前室(shi)溫平衡(heng)20分鐘。從冰箱取(qu)出的濃縮(suo)洗滌液會(hui)有結(jie)晶，這屬於(yu)正(zheng)常現(xian)象(xiang)，水(shui)浴加熱(re)使結(jie)晶完quan溶(rong)解(jie)後再使用(yong)。

2.實驗(yan)中不用(yong)的板(ban)條(tiao)應(ying)立即放回(hui)自封袋(dai)中，密(mi)封(feng)(低(di)溫幹(gan)燥)保(bao)存(cun)。

3.預(yu)處(chu)理(li)後的樣本(ben)請按照(zhao)操(cao)作步驟(zhou)用(yong)樣ben稀(xi)釋ye適(shi)當(dang)稀(xi)釋以達(da)到(dao)試劑盒(he)的的(de)最(zui)jia檢(jian)測效(xiao)果。.

4.嚴(yan)格(ge)按照(zhao)說明書中(zhong)標(biao)明的時間(jian)、加液量(liang)及順序進(jin)行溫育操(cao)作。

5.所有液體(ti)組(zu)分使用(yong)前充(chong)分搖勻。

常(chang)用(yong)方法(fa)：

1. 夾(jia)心(xin)法：

夾(jia)心(xin)法常用(yong)於(yu)檢(jian)測大(da)分子(zi)抗(kang)原，壹般(ban)的操(cao)作步驟(zhou)為:

a. 將具(ju)有專(zhuan)壹性的抗(kang)ti固(gu)著(zhu)（coating）於(yu)塑膠孔盤上，完成後洗去多(duo)余(yu)抗(kang)ti

b. 加入(ru)待(dai)測檢(jian)體，檢(jian)體中若含有待(dai)測的抗(kang)原(yuan)，則其會(hui)與(yu)塑膠孔盤上的抗(kang)ti進(jin)行專(zhuan)壹性鍵結

c. 洗去多(duo)余(yu)待(dai)測檢(jian)體，加入(ru)另壹種(zhong)對(dui)抗(kang)原專(zhuan)壹的(de)壹次(ci)抗(kang)ti，與(yu)待(dai)測抗原(yuan)進(jin)行鍵結

d. 洗去多(duo)余(yu)未(wei)鍵(jian)結壹次(ci)抗(kang)ti，加入(ru)帶(dai)有酶(mei)的(de)二(er)次(ci)抗(kang)ti，與(yu)壹次(ci)抗(kang)ti鍵(jian)結(jie)

e. 洗去多(duo)余(yu)未(wei)鍵(jian)結二(er)次(ci)抗(kang)ti，加入(ru)酶(mei)底(di)物使酵(jiao)素(su)呈色(se)，以肉(rou)眼或(huo)儀(yi)器讀(du)取(qu)呈色(se)結果

原(yuan)理(li)：針對(dui)抗(kang)原(yuan)分子(zi)上2個不同抗(kang)原決(jue)定簇(cu)的單(dan)克(ke)隆抗(kang)ti分別(bie)作為固相抗(kang)ti和(he)酶(mei)標(biao)抗(kang)ti，將大(da)分子(zi)抗(kang)原分別(bie)制(zhi)備固(gu)相抗(kang)原(yuan)和(he)酶(mei)標(biao)抗原結(jie)合物。

2. 間(jian)接法(fa)

間(jian)接法(fa)常用(yong)於(yu)檢(jian)測抗(kang)ti，壹般(ban)的操(cao)作步驟(zhou)為：

a. 將已(yi)知(zhi)的抗原(yuan)固(gu)著於(yu)塑膠孔盤上，完成後洗去多(duo)余(yu)的抗原(yuan)。

b. 加入(ru)待(dai)測檢(jian)體，檢(jian)體中若含有待(dai)測的壹次(ci)抗(kang)ti，則其會(hui)與(yu)塑膠孔盤上的抗原進(jin)行專(zhuan)壹性鍵結。

c. 洗去多(duo)余(yu)待(dai)測檢(jian)體，加入(ru)帶(dai)有酶(mei)的(de)二(er)次(ci)抗(kang)ti，與(yu)待(dai)測的壹次(ci)抗(kang)ti鍵(jian)結(jie)。

d. 洗去多(duo)余(yu)未(wei)鍵(jian)結二(er)次(ci)抗(kang)ti，加入(ru)酶(mei)底(di)物使酶(mei)呈(cheng)色(se)，藉儀(yi)器（ELISA reader）測定塑膠盤中(zhong)的(de)吸光值(zhi)（OD值(zhi)），以評(ping)估有色(se)終產物(wu)的含量(liang)即可測量(liang)待(dai)測抗(kang)ti的(de)含量(liang)。

原(yuan)理(li)：利(li)用(yong)酶標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)抗(kang)ti以檢(jian)測已與(yu)固相結(jie)合的受(shou)檢(jian)抗(kang)ti。

3. 競爭法(fa)

競爭法(fa)是壹種(zhong)較(jiao)少(shao)用(yong)到的(de)ELISA檢(jian)測機制，壹般(ban)用(yong)於(yu)檢(jian)測小分子(zi)抗(kang)原，其(qi)操作步驟(zhou)為：

a. 將具(ju)有專(zhuan)壹性的抗(kang)ti固(gu)著(zhu)於(yu)塑膠孔盤上，完成後洗去多(duo)余(yu)抗(kang)ti

b. 加入(ru)待(dai)測檢(jian)體，使檢(jian)體中的(de)待(dai)測抗原(yuan)與(yu)塑膠孔盤上的抗(kang)ti進(jin)行專(zhuan)壹性鍵結

c. 加入(ru)帶(dai)有酶(mei)的(de)抗原，此抗(kang)原(yuan)也(ye)可與(yu)塑膠孔盤上的抗(kang)ti進(jin)行專(zhuan)壹性鍵結，由(you)於(yu)塑膠孔盤上固著的抗(kang)ti數(shu)量(liang)有限(xian)，因(yin)此當(dang)檢(jian)體中抗(kang)原(yuan)的(de)量(liang)越多(duo)，則帶(dai)有酶(mei)的(de)抗原可鍵結(jie)的(de)固(gu)著抗(kang)ti就(jiu)越(yue)少，亦即，兩(liang)種抗(kang)原皆競相與(yu)塑膠孔盤上抗(kang)ti鍵(jian)結(jie)，即所謂競爭法(fa)之由(you)來(lai)。

d. 洗去檢(jian)體與(yu)帶(dai)有酶(mei)的(de)抗原，加入(ru)酶(mei)底(di)物使酶(mei)呈(cheng)色(se)，當(dang)檢(jian)體中抗(kang)原(yuan)量(liang)越多(duo)，代表(biao)塑膠孔盤內(nei)留下之(zhi)帶(dai)有酶(mei)的(de)抗原越少(shao)，顯(xian)色(se)也(ye)就越(yue)淺。

e. 當(dang)需要(yao)偵測無(wu)法獲(huo)得(de)兩種(zhong)以上單(dan)壹性抗(kang)ti的(de)抗(kang)原，或(huo)是不易得(de)到足(zu)夠的純(chun)化(hua)抗(kang)ti以固(gu)著於(yu)孔盤上時，壹般(ban)會(hui)考慮使用(yong)競爭法(fa)ELISA。

免責(ze)聲明：

1. 試劑盒(he)僅供(gong)研究使用(yong)，不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床實驗(yan)或(huo)人(ren)體實驗(yan)，否則所產生(sheng)的壹切(qie)後果，由(you)實驗(yan)者承擔，本(ben)公司(si)概不負(fu)責(ze)。

2. 嚴格(ge)按照(zhao)說明書操(cao)作，實驗(yan)者違反說明書操(cao)作，後果由(you)實驗(yan)者承擔。

公司(si)其(qi)他(ta)產(chan)品(pin)：

人(ren)β-神(shen)經(jing)生(sheng)長因子(β-NGF)elisa試劑盒(he)

人(ren)鈣(gai)聯接蛋(dan)白(bai)(CLGN)elisa試劑盒(he)

人(ren)基(ji)質(zhi)蛋(dan)白(bai)Del-1(Del-1)elisa試劑盒(he)

人(ren)轉錄(lu)因(yin)子(zi)SOX5(SOX5)elisa試劑盒(he)

人(ren)抑(yi)制素(su)β-B(Inhbb)elisa試劑盒(he)

人(ren)6-磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄糖脫(tuo)氫(qing)酶(6PGD)elisa試劑盒(he)

人(ren)鈣(gai)粘連(lian)蛋(dan)白(bai)(H-Cad)elisa試劑盒(he)

人(ren)鎂(mei)離(li)子轉運蛋(dan)白(bai)1(MAGT1)elisa試劑盒(he)

大(da)鼠(shu)抗紅(hong)細胞抗(kang)體(ti)(RBC)elisa試劑盒(he)

大(da)鼠(shu)9型(xing)腺相關病毒(du)(AAV9)elisa試劑盒(he)