雞(ji)免疫(yi)球(qiu)蛋(dan)白G(IgG)ELISA試劑(ji)盒

檢測原(yuan)理(li)

試劑盒采用雙抗原壹-步夾心法(fa)酶(mei)聯(lian)免疫(yi)吸附(fu)試(shi)驗(yan)(ELISA) 。往預先(xian)包(bao)被病(bing)毒(du)性(xing)腹(fu)瀉(xie)病(bing)毒(du)抗ti的包(bao)被微(wei)孔(kong)中，依次加入標(biao)本(ben)、HRP標記的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)原(yuan)，經(jing)過溫育(yu)並徹di洗滌(di)。用底(di)物(wu)TMB顯(xian)色，TMB在過氧(yang)化物酶(mei)的(de)催化下轉(zhuan)化成藍(lan)色(se)，並在suan的作用下轉(zhuan)化成最終的黃(huang)色(se)。用酶(mei)標(biao)儀在450NM波長(chang)下測(ce)定(ding)吸光度(du)(OD值) ，與CUTOFF值相比(bi)較(jiao)，從而(er)判定(ding)標(biao)本(ben)中豬(zhu)病毒(du)性(xing)腹(fu)瀉(xie)病(bing)毒(du)(BVDV) 的存在與(yu)否(fou)。

樣品收(shou)集(ji)、處(chu)理(li)及保(bao)存方(fang)法(fa)

1.血清:使(shi)用不(bu)含熱(re)原和(he)內毒(du)素(su)的試管，操(cao)作(zuo)過程(cheng)中避免任(ren)何細胞刺激(ji)，收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，3000轉離(li)心10分鐘將血清和(he)紅(hong)細胞迅速(su)小心地(di)分離(li)。

2.血漿(jiang): EDTA、檸檬suan鹽或肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000轉離(li)心30分鐘取上(shang)清。

3.細胞上(shang)清液(ye): 3000轉離(li)心10分鐘去除顆粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。

4.組織勻(yun)漿(jiang):將組織(zhi)加入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000轉 離(li)心10分鐘取上(shang)清。

5.保存:如果樣(yang)本(ben)收(shou)集(ji)後(hou)不(bu)及(ji)時(shi)檢測(ce)，請(qing)按(an)壹次用量(liang)分(fen)裝，凍存(cun)於-20°C， 避免反(fan)

復凍融(rong)，在室(shi)溫下解(jie)凍(dong)並確(que)保樣(yang)品均(jun)勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍(dong)。

自備(bei)物品(pin)

1.酶(mei)標(biao)儀(450NM)

2.高精度(du)加樣器(qi)及(ji)槍頭: 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒(heng)溫箱(xiang)

操(cao)作(zuo)註(zhu)意(yi)事項

1.試劑盒保(bao)存在2-8°C，使(shi)用前(qian)室溫平(ping)衡20分鐘。從冰箱(xiang)取出的濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液(ye)會(hui)有(you)結晶(jing)，這(zhe)屬於正常現象，水浴(yu)加熱(re)使(shi)結晶(jing)完quan溶解(jie)後(hou)再使(shi)用。

2.實驗(yan)中不(bu)用的(de)板(ban)條(tiao)應立(li)即放回(hui)自封(feng)袋中，密(mi)封(低溫幹(gan)燥(zao))保存。

3.預處(chu)理(li)後(hou)的樣本(ben)請(qing)按(an)照(zhao)操(cao)作(zuo)步(bu)驟用樣(yang)ben稀(xi)釋ye適(shi)當稀(xi)釋以達到(dao)試劑盒的(de)的最jia檢測效(xiao)果(guo)。.

4.嚴格(ge)按(an)照(zhao)說明書(shu)中標明的(de)時(shi)間、加液(ye)量(liang)及(ji)順(shun)序(xu)進行(xing)溫育(yu)操(cao)作(zuo)。

5.所有(you)液(ye)體(ti)組(zu)分(fen)使(shi)用前(qian)充分(fen)搖(yao)勻(yun)。

常用方(fang)法(fa)：

1. 夾心法(fa)：

夾心法(fa)常用於檢(jian)測大分子(zi)抗(kang)原(yuan)，壹般的(de)操(cao)作(zuo)步(bu)驟為:

a. 將具有(you)專(zhuan)壹性(xing)的(de)抗ti固著(zhu)（coating）於塑(su)膠孔(kong)盤上(shang)，完成後(hou)洗去多(duo)余(yu)抗ti

b. 加入待(dai)測(ce)檢體，檢體(ti)中若含有待(dai)測(ce)的抗原，則(ze)其會(hui)與(yu)塑(su)膠孔(kong)盤上(shang)的(de)抗ti進行(xing)專壹性(xing)鍵結

c. 洗去多(duo)余(yu)待(dai)測(ce)檢體，加入另(ling)壹種對抗原(yuan)專壹的壹次抗ti，與待(dai)測(ce)抗原進行(xing)鍵結

d. 洗去多(duo)余(yu)未(wei)鍵結壹次抗ti，加入帶(dai)有酶(mei)的(de)二(er)次抗ti，與壹次抗ti鍵結

e. 洗去多(duo)余(yu)未(wei)鍵結二(er)次抗ti，加入酶(mei)底(di)物(wu)使(shi)酵(jiao)素(su)呈(cheng)色(se)，以(yi)肉(rou)眼(yan)或儀器(qi)讀(du)取呈(cheng)色(se)結果(guo)

原理(li)：針對抗原(yuan)分子(zi)上(shang)2個不(bu)同(tong)抗(kang)原決定(ding)簇(cu)的(de)單(dan)克(ke)隆(long)抗ti分別作(zuo)為(wei)固相抗ti和(he)酶(mei)標(biao)抗ti，將大分(fen)子(zi)抗(kang)原(yuan)分(fen)別(bie)制備(bei)固相抗(kang)原和(he)酶(mei)標(biao)抗原(yuan)結合(he)物。

2. 間接法(fa)

間接法(fa)常用於檢(jian)測抗ti，壹般的(de)操(cao)作(zuo)步(bu)驟為：

a. 將已知(zhi)的(de)抗(kang)原(yuan)固著(zhu)於塑(su)膠孔(kong)盤上(shang)，完成後(hou)洗去多(duo)余(yu)的抗(kang)原。

b. 加入待(dai)測(ce)檢體，檢體(ti)中若含有待(dai)測(ce)的壹次抗ti，則其會(hui)與(yu)塑(su)膠孔(kong)盤上(shang)的(de)抗(kang)原(yuan)進(jin)行(xing)專壹性(xing)鍵結。

c. 洗去多(duo)余(yu)待(dai)測(ce)檢體，加入帶(dai)有酶(mei)的(de)二(er)次抗ti，與待(dai)測(ce)的壹次抗ti鍵結。

d. 洗去多(duo)余(yu)未(wei)鍵結二(er)次抗ti，加入酶(mei)底(di)物(wu)使(shi)酶(mei)呈(cheng)色(se)，藉(ji)儀(yi)器(qi)（ELISA reader）測定(ding)塑(su)膠盤中的吸光值（OD值），以評(ping)估有(you)色(se)終產物的(de)含量即可測量待(dai)測(ce)抗ti的含量。

原理(li)：利用酶(mei)標(biao)記的(de)抗抗ti以檢測(ce)已(yi)與(yu)固相結合(he)的受(shou)檢(jian)抗ti。

3. 競爭(zheng)法(fa)

競爭(zheng)法(fa)是(shi)壹種較(jiao)少用到(dao)的(de)ELISA檢測機(ji)制，壹般用於檢(jian)測小分(fen)子(zi)抗(kang)原(yuan)，其操(cao)作(zuo)步(bu)驟為：

a. 將具有(you)專(zhuan)壹性(xing)的(de)抗ti固著(zhu)於塑(su)膠孔(kong)盤上(shang)，完成後(hou)洗去多(duo)余(yu)抗ti

b. 加入待(dai)測(ce)檢體，使(shi)檢(jian)體(ti)中的待(dai)測(ce)抗原與塑(su)膠孔(kong)盤上(shang)的(de)抗ti進行(xing)專壹性(xing)鍵結

c. 加入帶(dai)有酶(mei)的(de)抗原(yuan)，此抗原也可(ke)與塑(su)膠孔(kong)盤上(shang)的(de)抗ti進行(xing)專壹性(xing)鍵結，由(you)於塑(su)膠孔(kong)盤上(shang)固著(zhu)的(de)抗ti數量(liang)有限，因(yin)此當檢體中抗原的(de)量越多(duo)，則帶(dai)有(you)酶(mei)的(de)抗原(yuan)可鍵結的(de)固著(zhu)抗ti就(jiu)越少，亦(yi)即，兩(liang)種抗原(yuan)皆競相與(yu)塑(su)膠孔(kong)盤上(shang)抗ti鍵結，即所謂(wei)競爭(zheng)法(fa)之(zhi)由(you)來(lai)。

d. 洗去檢(jian)體(ti)與帶(dai)有酶(mei)的(de)抗原(yuan)，加入酶(mei)底(di)物(wu)使(shi)酶(mei)呈(cheng)色(se)，當檢體中抗原量(liang)越多(duo)，代表(biao)塑(su)膠孔(kong)盤內留下之(zhi)帶(dai)有酶(mei)的(de)抗原(yuan)越少，顯(xian)色也(ye)就(jiu)越淺(qian)。

e. 當需(xu)要偵測(ce)無(wu)法(fa)獲(huo)得兩(liang)種以上(shang)單(dan)壹性(xing)抗ti的抗原(yuan)，或(huo)是(shi)不(bu)易得到(dao)足夠的純化抗ti以固著(zhu)於孔(kong)盤上(shang)時(shi)，壹般會(hui)考(kao)慮使(shi)用競(jing)爭(zheng)法(fa)ELISA。

免責(ze)聲明(ming)：

1. 試劑(ji)盒僅(jin)供(gong)研究使(shi)用，不(bu)得用於臨(lin)床實驗(yan)或人(ren)體實驗(yan)，否(fou)則(ze)所產生的(de)壹切(qie)後(hou)果，由實(shi)驗(yan)者承(cheng)擔(dan)，本(ben)公(gong)司(si)概(gai)不(bu)負責(ze)。

2. 嚴格(ge)按(an)照(zhao)說明書(shu)操(cao)作(zuo)，實(shi)驗(yan)者違反說明書(shu)操(cao)作(zuo)，後(hou)果由實(shi)驗(yan)者承(cheng)擔(dan)。

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