小(xiao)鼠T細胞(bao)因(yin)子(zi)(RANTES/CCL5)ELISA試(shi)劑盒

檢(jian)測(ce)原(yuan)理(li)

試(shi)劑盒采用(yong)雙抗原(yuan)壹-步夾心法酶聯(lian)免(mian)疫吸附(fu)試(shi)驗(ELISA) 。往(wang)預先(xian)包被(bei)病(bing)毒性(xing)腹瀉病(bing)毒抗(kang)ti的包被(bei)微孔中，依次(ci)加入(ru)標(biao)本、HRP標(biao)記的檢(jian)測(ce)抗(kang)原(yuan)，經(jing)過溫育並(bing)徹(che)di洗(xi)滌。用底物(wu)TMB顯(xian)色(se)，TMB在(zai)過氧化(hua)物(wu)酶的催(cui)化下(xia)轉化(hua)成藍色(se)，並(bing)在(zai)suan的作用(yong)下轉(zhuan)化成(cheng)最終的黃(huang)色(se)。用酶標(biao)儀在450NM波長(chang)下測(ce)定(ding)吸光(guang)度(OD值(zhi)) ，與CUTOFF值(zhi)相比(bi)較(jiao)，從(cong)而判(pan)定(ding)標(biao)本中(zhong)豬(zhu)病(bing)毒性(xing)腹瀉病(bing)毒(BVDV) 的存在與否(fou)。

樣(yang)品收集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保存方(fang)法

1.血(xue)清(qing):使(shi)用不含熱(re)原(yuan)和(he)內毒素的試(shi)管(guan)，操作過程(cheng)中(zhong)避免(mian)任(ren)何細胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集(ji)血(xue)液(ye)後，3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細胞(bao)迅速(su)小(xiao)心地分(fen)離(li)。

2.血(xue)漿(jiang): EDTA、檸檬(meng)suan鹽(yan)或肝(gan)素抗(kang)凝(ning)。3000轉(zhuan)離(li)心(xin)30分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。

3.細胞(bao)上(shang)清(qing)液: 3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘去(qu)除(chu)顆(ke)粒和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。

4.組(zu)織勻(yun)漿(jiang):將(jiang)組織加入(ru)適量生理(li)鹽水(shui)搗碎。3000轉(zhuan) 離(li)心(xin)10分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。

5.保存:如(ru)果(guo)樣(yang)本收集(ji)後不及(ji)時檢(jian)測(ce)，請(qing)按(an)壹(yi)次(ci)用量(liang)分(fen)裝，凍存(cun)於(yu)-20°C， 避(bi)免反

復(fu)凍融(rong)，在(zai)室溫下解(jie)凍並(bing)確保樣品(pin)均(jun)勻(yun)地充(chong)分(fen)解(jie)凍。

自(zi)備物(wu)品

1.酶標(biao)儀(450NM)

2.高(gao)精度加樣器及(ji)槍頭(tou): 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒(heng)溫箱

操(cao)作註(zhu)意(yi)事(shi)項

1.試(shi)劑盒保存在(zai)2-8°C，使(shi)用前室溫平衡20分(fen)鐘。從(cong)冰箱(xiang)取(qu)出(chu)的濃縮(suo)洗滌(di)液會有結(jie)晶(jing)，這屬於(yu)正(zheng)常現象(xiang)，水(shui)浴加熱(re)使結(jie)晶(jing)完quan溶(rong)解(jie)後再使(shi)用。

2.實(shi)驗中不用的板條(tiao)應立即放回(hui)自(zi)封袋中(zhong)，密(mi)封(低(di)溫幹燥)保存。

3.預處(chu)理(li)後的樣本請(qing)按(an)照操作步驟(zhou)用(yong)樣ben稀(xi)釋(shi)ye適當稀(xi)釋(shi)以達(da)到試(shi)劑盒的的最jia檢(jian)測(ce)效(xiao)果(guo)。.

4.嚴(yan)格按(an)照說(shuo)明書中(zhong)標(biao)明的時間、加液量及(ji)順序(xu)進(jin)行(xing)溫育操作。

5.所(suo)有液體組(zu)分(fen)使用(yong)前充(chong)分(fen)搖(yao)勻(yun)。

常用方(fang)法：

1. 夾心法：

夾心法常用於(yu)檢(jian)測(ce)大(da)分(fen)子抗(kang)原(yuan)，壹(yi)般(ban)的操作步驟(zhou)為(wei):

a. 將(jiang)具有專(zhuan)壹性(xing)的抗(kang)ti固著（coating）於(yu)塑膠孔盤上(shang)，完(wan)成後洗去(qu)多(duo)余抗(kang)ti

b. 加入(ru)待(dai)測(ce)檢(jian)體，檢(jian)體中(zhong)若含(han)有待測(ce)的抗原(yuan)，則(ze)其(qi)會與塑膠孔盤上(shang)的抗(kang)ti進(jin)行專(zhuan)壹性(xing)鍵(jian)結(jie)

c. 洗(xi)去(qu)多(duo)余待(dai)測(ce)檢(jian)體，加入(ru)另(ling)壹(yi)種(zhong)對抗原(yuan)專(zhuan)壹的壹次(ci)抗(kang)ti，與待測(ce)抗(kang)原(yuan)進行(xing)鍵結

d. 洗(xi)去(qu)多(duo)余未鍵(jian)結壹(yi)次(ci)抗(kang)ti，加入(ru)帶(dai)有酶的二次(ci)抗(kang)ti，與壹次(ci)抗(kang)ti鍵(jian)結

e. 洗(xi)去(qu)多(duo)余未鍵(jian)結二次(ci)抗(kang)ti，加入(ru)酶底(di)物(wu)使酵(jiao)素呈(cheng)色(se)，以肉眼(yan)或儀器讀(du)取(qu)呈(cheng)色(se)結果(guo)

原(yuan)理(li)：針(zhen)對抗原(yuan)分(fen)子上(shang)2個不同抗原(yuan)決(jue)定(ding)簇的單克隆(long)抗(kang)ti分(fen)別作為(wei)固相抗(kang)ti和(he)酶標(biao)抗(kang)ti，將(jiang)大(da)分(fen)子抗(kang)原(yuan)分(fen)別制(zhi)備(bei)固相抗原(yuan)和(he)酶標(biao)抗原(yuan)結合(he)物(wu)。

2. 間接法

間接法常用於(yu)檢(jian)測(ce)抗(kang)ti，壹(yi)般(ban)的操作步驟(zhou)為(wei)：

a. 將(jiang)已知的抗原(yuan)固著於塑膠孔盤上(shang)，完(wan)成後洗去(qu)多(duo)余的抗原(yuan)。

b. 加入(ru)待(dai)測(ce)檢(jian)體，檢(jian)體中(zhong)若含(han)有待測(ce)的壹次(ci)抗(kang)ti，則(ze)其(qi)會與塑膠孔盤上(shang)的抗原(yuan)進行(xing)專(zhuan)壹性(xing)鍵(jian)結(jie)。

c. 洗(xi)去(qu)多(duo)余待(dai)測(ce)檢(jian)體，加入(ru)帶(dai)有酶的二次(ci)抗(kang)ti，與待測(ce)的壹次(ci)抗(kang)ti鍵(jian)結。

d. 洗(xi)去(qu)多(duo)余未鍵(jian)結二次(ci)抗(kang)ti，加入(ru)酶底(di)物(wu)使酶呈(cheng)色(se)，藉儀器（ELISA reader）測(ce)定(ding)塑膠盤中的吸光(guang)值（OD值(zhi)），以評估(gu)有色(se)終產(chan)物(wu)的含量即可測(ce)量(liang)待(dai)測(ce)抗(kang)ti的含量。

原(yuan)理(li)：利用酶標(biao)記的抗抗(kang)ti以(yi)檢(jian)測(ce)已(yi)與固相結合(he)的受檢(jian)抗(kang)ti。

3. 競爭法

競爭法是壹(yi)種(zhong)較(jiao)少(shao)用(yong)到的ELISA檢(jian)測(ce)機(ji)制，壹般(ban)用於(yu)檢(jian)測(ce)小(xiao)分(fen)子抗(kang)原(yuan)，其(qi)操(cao)作步驟(zhou)為(wei)：

a. 將(jiang)具有專(zhuan)壹性(xing)的抗(kang)ti固著於塑膠孔盤上(shang)，完(wan)成後洗去(qu)多(duo)余抗(kang)ti

b. 加入(ru)待(dai)測(ce)檢(jian)體，使(shi)檢(jian)體中(zhong)的待測(ce)抗(kang)原(yuan)與塑膠孔盤上(shang)的抗(kang)ti進(jin)行專(zhuan)壹性(xing)鍵(jian)結(jie)

c. 加入(ru)帶(dai)有酶的抗原(yuan)，此抗(kang)原(yuan)也(ye)可與塑膠孔盤上(shang)的抗(kang)ti進(jin)行專(zhuan)壹性(xing)鍵(jian)結(jie)，由於(yu)塑膠孔盤上(shang)固著的抗(kang)ti數量(liang)有限(xian)，因(yin)此(ci)當(dang)檢(jian)體中(zhong)抗原(yuan)的量越多(duo)，則(ze)帶(dai)有酶的抗原(yuan)可鍵(jian)結的固著抗(kang)ti就(jiu)越少，亦即，兩種(zhong)抗(kang)原(yuan)皆競相與塑膠孔盤上(shang)抗(kang)ti鍵(jian)結，即所謂(wei)競爭法之由來(lai)。

d. 洗(xi)去(qu)檢(jian)體與帶(dai)有酶的抗原(yuan)，加入(ru)酶底(di)物(wu)使酶呈(cheng)色(se)，當檢(jian)體中(zhong)抗原(yuan)量越(yue)多(duo)，代(dai)表(biao)塑膠孔盤內留下(xia)之(zhi)帶(dai)有酶的抗原(yuan)越少(shao)，顯(xian)色(se)也(ye)就越(yue)淺(qian)。

e. 當(dang)需(xu)要偵測(ce)無法獲得兩種(zhong)以(yi)上(shang)單(dan)壹性(xing)抗(kang)ti的抗原(yuan)，或是不易(yi)得到足(zu)夠的純(chun)化抗(kang)ti以(yi)固著於孔(kong)盤上(shang)時(shi)，壹般(ban)會考(kao)慮使(shi)用(yong)競爭法ELISA。

免責聲(sheng)明：

1. 試(shi)劑盒僅供研(yan)究(jiu)使(shi)用，不得用於臨床(chuang)實(shi)驗或人(ren)體實(shi)驗，否(fou)則(ze)所(suo)產生的壹切(qie)後果(guo)，由實(shi)驗者承擔(dan)，本(ben)公司概不負(fu)責(ze)。

2. 嚴(yan)格按(an)照說(shuo)明書操(cao)作，實(shi)驗者違反說(shuo)明書操(cao)作，後果(guo)由實(shi)驗者承擔(dan)。

公司其(qi)他產品(pin)：

人(ren)β-神(shen)經(jing)生長(chang)因(yin)子(zi)(β-NGF)elisa試(shi)劑盒

人(ren)鈣(gai)聯接(jie)蛋白(bai)(CLGN)elisa試(shi)劑盒

人(ren)基質蛋白(bai)Del-1(Del-1)elisa試(shi)劑盒

人(ren)轉錄因(yin)子(zi)SOX5(SOX5)elisa試(shi)劑盒

人(ren)抑制(zhi)素β-B(Inhbb)elisa試(shi)劑盒

人(ren)6-磷酸(suan)葡萄(tao)糖(tang)脫氫(qing)酶(6PGD)elisa試(shi)劑盒

人(ren)鈣(gai)粘連(lian)蛋白(bai)(H-Cad)elisa試(shi)劑盒

人(ren)鎂離(li)子(zi)轉(zhuan)運蛋白(bai)1(MAGT1)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠抗(kang)紅(hong)細胞(bao)抗體(RBC)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠9型腺(xian)相(xiang)關病(bing)毒(AAV9)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠硒(xi)蛋白(bai)P(Se-P)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠B-細胞(bao)激(ji)活因(yin)子(zi)受(shou)體(BAFFR)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠血(xue)清(qing)反應因(yin)子(zi)(SRF)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠視(shi)紫(zi)質(RHO)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠乳腺(xian)癌(ai)標(biao)誌(zhi)物(wu)-CA153(CA153)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠克(ke)拉拉細胞(bao)蛋白(bai)(CC16)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠支(zhi)鏈(lian)氨(an)基酸(suan)轉氨(an)酶(BCAT)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠支(zhi)鏈(lian)α-酮(tong)酸(suan)脫氨(an)酶(BCKD)elisa試(shi)劑盒

大(da)鼠蛋氨(an)酸(suan)腺(xian)苷(gan)轉移(yi)酶(MAT)elisa試(shi)劑盒