按這個(ge)步(bu)驟(zhou)操(cao)作植(zhi)物(wu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)，既簡單(dan)又安全

在(zai)植(zhi)物(wu)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)檢(jian)測(ce)中除了(le)包(bao)被(bei)外(wai)，壹般(ban)需進行45加樣(yang)。在(zai)定(ding)性測(ce)定(ding)中有(you)時(shi)不強(qiang)調(tiao)加樣(yang)量的準(zhun)確(que)性，例(li)如(ru)規定(ding)為(wei)加樣(yang)壹(yi)滴。此時(shi)應該(gai)使(shi)用(yong)相(xiang)同(tong)口徑(jing)的滴(di)管(guan)，保持(chi)準(zhun)確(que)的(de)加樣(yang)姿勢(shi)，使(shi)每滴液體(ti)的(de)體(ti)積(ji)基本(ben)相(xiang)同(tong)。在定(ding)量測(ce)定(ding)中則加樣(yang)量應力求準(zhun)確(que)。標(biao)本(ben)和結合(he)物(wu)的稀(xi)釋液應按規定(ding)配制(zhi)。加樣(yang)時(shi)應將(jiang)液體(ti)加在(zai)孔底(di)，避(bi)免(mian)加在(zai)孔壁(bi)上(shang)部(bu)，並(bing)註意不(bu)可(ke)出(chu)現(xian)氣(qi)泡(pao)。

　　樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)：

　　1、血清(qing)：使(shi)用(yong)不含熱原和內毒(du)素的(de)試(shi)管(guan)，操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免(mian)任(ren)何細(xi)胞(bao)刺激(ji)，收(shou)集血液後，3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘將(jiang)血清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速小心地(di)分(fen)離(li)。

　　2、血漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuan)離(li)心30分(fen)鐘取上清。

　　3、細(xi)胞(bao)上清液：3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒和聚合(he)物(wu)。

　　4、組(zu)織(zhi)勻漿：將(jiang)組織(zhi)加入適(shi)量生理(li)鹽水搗碎(sui)。3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘取上清。

　　5、保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣本(ben)收(shou)集後不及時(shi)檢測(ce)，請按壹次用(yong)量分裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確保(bao)樣品(pin)均勻地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍(dong)。

　　植(zhi)物(wu)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)檢(jian)測(ce)的操(cao)作步(bu)驟(zhou)：

　　1、從(cong)室(shi)溫平衡20min後的鋁(lv)箔袋中取出所需板(ban)條(tiao)，剩余板(ban)條(tiao)用(yong)自(zi)封袋密(mi)封放(fang)回4℃；

　　2、設(she)置標(biao)準(zhun)品(pin)孔和樣本(ben)孔，標(biao)準(zhun)品(pin)孔各(ge)加不(bu)同(tong)濃度(du)的標(biao)準(zhun)品(pin)50μL；

　　3、樣(yang)本(ben)孔先(xian)加待(dai)測(ce)樣本(ben)10μL，再(zai)加樣(yang)本(ben)稀(xi)釋液40μL；空(kong)白(bai)孔不(bu)加；

　　4、除空(kong)白(bai)孔外(wai)，標準(zhun)品(pin)孔和樣本(ben)孔中每孔加入辣(la)根(gen)過(guo)氧化物酶（HRP）標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗體(ti)100μL，用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)住(zhu)反(fan)應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱(xiang)溫育(yu)60min；

　　5、棄(qi)去(qu)液體(ti)，吸(xi)水紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，每(mei)孔加滿(man)洗(xi)滌液，靜置1min，甩去(qu)洗滌(di)液，吸水紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，如(ru)此重復(fu)洗板(ban)5次；

　　6、每(mei)孔加入底(di)物(wu)A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光孵育(yu)15min；

　　7、每(mei)孔加入終止(zhi)液50μL，15min內(nei)，在(zai)450nm波(bo)長(chang)處(chu)測(ce)定(ding)各(ge)孔的(de)OD值(zhi)。