ELISA試劑盒(he)的(de)樣(yang)本應(ying)該(gai)如(ru)何(he)準(zhun)備(bei)

ELISA試(shi)劑盒(he)的(de)樣(yang)本應(ying)該(gai)如(ru)何(he)準(zhun)備(bei)

在收集樣(yang)本前(qian)都(dou)必須(xu)有壹(yi)個完整的計(ji)劃，必(bi)須(xu)清楚(chu)要(yao)檢測(ce)的成份(fen)是否(fou)足(zu)夠穩(wen)定。對(dui)收集後(hou)當(dang)天(tian)就(jiu)進行檢測(ce)的樣(yang)本，及(ji)時(shi)儲存在(zai)4℃備(bei)用。對(dui)於(yu)隔天(tian)再(zai)檢測(ce)的樣(yang)本，及(ji)時(shi)分裝(zhuang)後凍(dong)存在(zai)-20℃備用，有條(tiao)件的，最(zui)好(hao)-70℃凍存(cun)備用。標本應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)。

液(ye)體類標(biao)本: 包括(kuo)血清、血漿、尿(niao)液(ye)、胸(xiong)腹水、腦脊液(ye)、細(xi)胞培養上清等。

1.   血清：室(shi)溫(wen)血液自(zi)然(ran)凝固(gu)10-20分鐘，離心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔細收集上清，保存過程中(zhong)如(ru)出(chu)現(xian)沈澱，應再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。

2.   血漿：應(ying)根(gen)據(ju)標本的(de)要(yao)求(qiu)選(xuan)擇EDTA、檸檬酸(suan)鈉或肝(gan)素作(zuo)為(wei)抗凝(ning)劑，混合10-20分鐘後，離(li)心20分鐘左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔細收集上清，保存過程中(zhong)如(ru)有(you)沈澱形(xing)成，應(ying)該(gai)再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。

3.   尿液：用無菌管收集，離(li)心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔細收集上清，保存過程中(zhong)如(ru)有(you)沈澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。胸(xiong)腹水、腦脊液(ye)參照(zhao)此實(shi)行。

4.   細胞培養上清：檢測(ce)分泌性的(de)成份(fen)時(shi)，用無菌管收集。離(li)心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔細收集上清。

5.   培養細胞：檢測(ce)細胞內(nei)的成份(fen)時(shi)，用PBS（PH7.2-7.4）稀(xi)釋(shi)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，細胞濃(nong)度(du)達(da)到(dao)100萬(wan)/ml左右(you)。通(tong)過反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)或加入組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)萃取試(shi)劑，以(yi)使(shi)細胞破(po)壞(huai)並放(fang)出(chu)細(xi)胞內(nei)成份(fen)。離(li)心(xin)20分鐘左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔細收集上清。保存過程中(zhong)如(ru)有(you)沈澱形(xing)成，應(ying)再(zai)次(ci)離(li)心(xin)。

6.   組織標(biao)本：切(qie)割(ge)標(biao)本後(hou)，稱取(qu)重(zhong)量。加入壹(yi)定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備(bei)用。標本融(rong)化(hua)後(hou)仍(reng)然(ran)保持(chi)2-8℃的溫度(du)。加(jia)入壹(yi)定量的PBS（PH7.4），或組織蛋(dan)白(bai)萃取試(shi)劑，用手工(gong)或勻(yun)漿器(qi)將(jiang)標(biao)本勻(yun)漿化。離(li)心20分鐘左右(you)（2000-3000轉(zhuan)/分）。仔細收集上清。分裝(zhuang)後壹(yi)份(fen)待(dai)檢測(ce)，其余(yu)冷(leng)凍(dong)備(bei)用。

7.   標本采(cai)集(ji)後(hou)盡早進行提取(qu)，提取(qu)按(an)相關文獻進行，提取(qu)後(hou)應(ying)盡快進行實驗(yan)。若(ruo)不(bu)能(neng)馬上進行試驗(yan)，可(ke)將標(biao)本放(fang)於(yu)-20℃保存，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong).

8.   不(bu)能(neng)檢測(ce)含NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因(yin)NaN3抑制(zhi)辣(la)根(gen)過氧化(hua)物(wu)酶的(de)（HRP）活性。