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          ELISA法(fa)是(shi)免疫(yi)診斷中的(de)壹(yi)項(xiang)新技術(shu),現已成(cheng)功(gong)地(di)應(ying)用於多種(zhong)病(bing)原(yuan)微(wei)生(sheng)物所(suo)引起(qi)的(de)傳染(ran)病(bing)、寄(ji)生(sheng)蟲(chong)病(bing)及(ji)非(fei)傳染(ran)病(bing)等方面(mian)的(de)免(mian)疫(yi)診斷。也已應(ying)用於大(da)分子抗(kang)原和(he)小(xiao)分子抗(kang)原的(de)定(ding)量測(ce)定(ding),根據已經(jing)使用的(de)結(jie)果(guo),認為(wei)ELISA法(fa)具有(you)靈(ling)敏(min)、特異(yi)、簡單(dan)、快速(su)、穩定(ding)及(ji)易(yi)於自動化操(cao)作等特點(dian)。不(bu)僅適用於臨床(chuang)標(biao)本的(de)檢(jian)查(zha),而且由於壹天(tian)之內(nei)可(ke)以(yi)檢查(zha)幾(ji)百甚(shen)至(zhi)上千(qian)份(fen)標(biao)本,因(yin)此(ci),也適合於血清流行病(bing)學(xue)調查。本(ben)法(fa)不(bu)僅可以(yi)用來(lai)測(ce)定(ding)抗(kang)ti,而且也(ye)可用於測(ce)定(ding)體液中(zhong)的(de)循(xun)環抗(kang)原,所(suo)以(yi)也是(shi)壹種早期(qi)診斷的(de)良(liang)好方法(fa)。因(yin)此(ci)ELISA法(fa)在(zai)生(sheng)物醫學(xue)各(ge)領(ling)域的(de)應(ying)用範(fan)圍(wei)日(ri)益(yi)擴大(da),

          組(zu)成(cheng)結(jie)構(gou)

          1、血清:操作過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任何細胞(bao)刺激(ji)。使用不(bu)含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)du素的(de)試(shi)管(guan)。收集(ji)血液後(hou),1000×g離心(xin)10分鐘(zhong)將血紅細胞(bao)迅速(su)小(xiao)心地(di)分離。

          2、2、血漿(jiang):EDTA、檸檬suan鹽、肝(gan)素血漿(jiang)可用於檢測(ce)。1000×g離心(xin)30分鐘(zhong)去除(chu)顆粒。

          3、細(xi)胞(bao)上清(qing)液(ye):1000×g離心(xin)10分鐘(zhong)去除(chu)顆粒和(he)聚(ju)合物(wu)。

          4、組(zu)織勻(yun)漿(jiang):將組(zu)織加(jia)入適(shi)量生(sheng)理鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。1000×g離心(xin)10分鐘(zhong),取上清(qing)液(ye)。

          5、保(bao)存:如果(guo)樣品不(bu)立即(ji)使用,應(ying)將其(qi)分成(cheng)小(xiao)部分-70℃保存,避(bi)免(mian)反復冷(leng)凍。盡(jin)可能(neng)的(de)不(bu)要使用溶血。如果(guo)血清中大(da)量顆粒,檢(jian)測(ce)前(qian)先(xian)離心(xin)或(huo)過濾(lv)。不(bu)要在(zai)37℃或(huo)更高的(de)溫度(du)加(jia)熱解凍。應(ying)在(zai)室溫下(xia)解凍並確保樣品均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分解凍。


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          操作步驟(zhou):

          1、使用前(qian),將所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)充(chong)分混勻(yun)。不(bu)要使液(ye)體產(chan)生(sheng)大(da)量的(de)泡(pao)沫(mo),以(yi)免加(jia)樣時加(jia)入大(da)量的(de)氣(qi)泡(pao),產(chan)生(sheng)加(jia)樣上的(de)誤差。

          2、根據待(dai)測(ce)樣品數(shu)量加(jia)上標(biao)準品(pin)的(de)數(shu)量決(jue)定(ding)所(suo)需(xu)的(de)板(ban)條(tiao)數(shu)。每(mei)個(ge)標(biao)準品(pin)和(he)空(kong)白孔建(jian)議(yi)做(zuo)復(fu)孔。每(mei)個樣品根據自己的(de)數(shu)量來(lai)定(ding),能使用復(fu)孔的(de)盡(jin)量做(zuo)復(fu)孔。

          3、加(jia)入稀(xi)釋(shi)好後(hou)的(de)標(biao)準品(pin)50ul於反應(ying)孔、加(jia)入待(dai)測(ce)樣品50ul於反應(ying)孔內(nei)。立即(ji)加(jia)入50ul標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體。蓋上膜(mo)板(ban),輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun),37℃溫育(yu)45分鐘(zhong)。

          4、甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液(ye)體,每孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye),振蕩(dang)30秒(miao),甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye),用吸(xi)水(shui)紙拍(pai)幹。重復此操作(zuo)4次(ci)。如(ru)果(guo)用洗(xi)板機(ji)洗(xi)滌(di),洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增(zeng)加(jia)壹次(ci)。

          5、每孔加(jia)入100ul的(de)親和(he)鏈(lian)酶素-HRP,輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun),37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。

          6、甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液(ye)體,每孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye),振蕩(dang)30秒(miao),甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye),用吸(xi)水(shui)紙拍(pai)幹。重復此操作(zuo)4次(ci)。如(ru)果(guo)用洗(xi)板機(ji)洗(xi)滌(di),洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)增(zeng)加(jia)壹次(ci)。

          7、每孔加(jia)入底物(wu)A、B各(ge)50ul,輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun),37℃溫育(yu)5分鐘(zhong)。避(bi)免(mian)光(guang)照(zhao)。

          8、取出(chu)酶標(biao)板,迅速(su)加(jia)入50ul終止液(ye),加(jia)入終止液(ye)後(hou)應(ying)立即(ji)測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)。

          9、在(zai)450nm波長(chang)處(chu)測(ce)定(ding)各(ge)孔的(de)OD值(zhi)。

          操作註意(yi)事項(xiang):

          1、試(shi)劑(ji)應(ying)按標(biao)簽(qian)說(shuo)明(ming)書(shu)儲存,使用前(qian)恢(hui)復到(dao)室溫。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的(de)標(biao)準品(pin)應(ying)丟(diu)棄(qi),不(bu)可(ke)保存

          2、實(shi)驗(yan)中(zhong)不(bu)用的(de)板(ban)條(tiao)應(ying)立即(ji)放(fang)回包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中,密(mi)封(feng)保(bao)存,以(yi)免變(bian)質(zhi)。

          3、不(bu)用的(de)其(qi)它(ta)試(shi)劑(ji)應(ying)包裝(zhuang)好或(huo)蓋好。不(bu)同(tong)批(pi)號的(de)試(shi)劑(ji)不(bu)要混用。保(bao)質(zhi)前使用。

          4、使用壹(yi)次(ci)性的(de)吸(xi)頭(tou)以(yi)免交(jiao)叉汙(wu)染,吸取(qu)終止液(ye)和(he)底物(wu)A、B液時,避(bi)免(mian)使用帶(dai)金(jin)屬部(bu)分的(de)加(jia)樣器。

          5、使用幹(gan)凈(jing)的(de)塑(su)料(liao)容(rong)器(qi)配置洗(xi)滌(di)液(ye)。使用前(qian)充(chong)分混勻(yun)試(shi)劑(ji)盒裏(li)的(de)各(ge)種成(cheng)份(fen)及(ji)樣品。

          6、底物(wu)A應(ying)揮發(fa),避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)打開蓋子。底物(wu)B對光(guang)敏(min)感,避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴露於光(guang)下(xia)。避(bi)免(mian)用手(shou)接觸,有(you)毒(du)。實(shi)驗(yan)完(wan)成(cheng)後(hou)應(ying)立即(ji)讀(du)取(qu)OD值。

          7、加(jia)入試(shi)劑(ji)的(de)順(shun)序(xu)應(ying)壹致(zhi),以(yi)保證(zheng)所(suo)有(you)反(fan)應(ying)板孔溫育(yu)的(de)時(shi)間(jian)壹樣。按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)中標(biao)明(ming)的(de)時(shi)間(jian)、加(jia)液的(de)量及(ji)順(shun)序(xu)進行溫育(yu)操作(zuo)。

          壹般來講(jiang),96T能檢測(ce)90個(ge)樣本,48T能(neng)檢(jian)測(ce)42個(ge)樣本,這裏(li)面(mian)需(xu)要用標(biao)樣來做(zuo)標(biao)準曲(qu)線(xian),所(suo)以(yi)各(ge)位需(xu)要做(zuo)實(shi)驗(yan)的(de)老師(shi)們(men),請在(zai)購(gou)買(mai)ELISA試(shi)劑(ji)盒的(de)時(shi)候(hou)註(zhu)意(yi),需(xu)要做(zuo)多(duo)少個樣本,在(zai)決(jue)定(ding)買(mai)多大(da)規(gui)格的(de)試(shi)劑(ji)盒,以(yi)免做(zuo)實(shi)驗(yan)時(shi)出(chu)現試(shi)劑(ji)盒不(bu)夠(gou)用或(huo)者(zhe)浪(lang)費!


          煙(yan)草脈(mai)帶花(hua)葉(ye)病(bing)毒(du)(TVBMV)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

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          硝(xiao)酸(suan)鹽(yan)還原酶(mei)(NR)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

          黃(huang)素單(dan)核(he)苷酸(FMN)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

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          口(kou)蹄(ti)疫(yi)O型(xing)抗(kang)體(FMD-O-Ab)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒


















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