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          ELISA法是(shi)免(mian)疫(yi)診斷中的(de)壹(yi)項(xiang)新技術(shu),現(xian)已成功地(di)應用於多(duo)種(zhong)病原微(wei)生(sheng)物(wu)所(suo)引起(qi)的(de)傳染病、寄生(sheng)蟲(chong)病及(ji)非(fei)傳(chuan)染(ran)病等方(fang)面(mian)的(de)免疫(yi)診斷。也(ye)已應用於大分子(zi)抗(kang)原(yuan)和(he)小分子(zi)抗(kang)原(yuan)的(de)定量測(ce)定,根據已經(jing)使用的(de)結果,認(ren)為ELISA法具有靈敏(min)、特(te)異、簡單、快(kuai)速(su)、穩(wen)定及(ji)易於自(zi)動化(hua)操(cao)作(zuo)等特(te)點。不(bu)僅(jin)適(shi)用於(yu)臨床(chuang)標(biao)本的(de)檢查(zha),而且(qie)由於(yu)壹(yi)天(tian)之內可(ke)以(yi)檢查(zha)幾百甚(shen)至(zhi)上千份(fen)標本,因(yin)此,也(ye)適(shi)合(he)於(yu)血清流(liu)行病學調(tiao)查(zha)。本法不(bu)僅(jin)可(ke)以(yi)用來測(ce)定抗(kang)ti,而且(qie)也(ye)可(ke)用於測(ce)定體(ti)液(ye)中的(de)循(xun)環抗(kang)原(yuan),所(suo)以(yi)也(ye)是(shi)壹(yi)種(zhong)早期(qi)診斷的(de)良好(hao)方法。因(yin)此ELISA法在(zai)生(sheng)物(wu)醫(yi)學各領(ling)域(yu)的(de)應用範圍日益(yi)擴(kuo)大,

          組(zu)成結構(gou)

          1、血清:操作(zuo)過程中避(bi)免任何(he)細胞(bao)刺(ci)激。使(shi)用不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)du素的(de)試(shi)管(guan)。收(shou)集血(xue)液(ye)後,1000×g離心10分鐘(zhong)將血(xue)紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速(su)小心地(di)分離。

          2、2、血漿:EDTA、檸檬(meng)suan鹽、肝素血漿可(ke)用於檢測(ce)。1000×g離心30分鐘(zhong)去除顆(ke)粒(li)。

          3、細胞(bao)上清液(ye):1000×g離心10分鐘(zhong)去除顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。

          4、組(zu)織勻漿:將組(zu)織加入適量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎。1000×g離心10分鐘(zhong),取(qu)上清液(ye)。

          5、保存:如(ru)果樣品不(bu)立(li)即(ji)使(shi)用(yong),應將其(qi)分成(cheng)小部(bu)分-70℃保存,避(bi)免反(fan)復冷凍(dong)。盡(jin)可(ke)能的(de)不(bu)要(yao)使用溶血。如果血清中大(da)量(liang)顆(ke)粒(li),檢測(ce)前先(xian)離心或(huo)過(guo)濾(lv)。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或更(geng)高的(de)溫(wen)度(du)加熱(re)解(jie)凍(dong)。應在(zai)室溫(wen)下解凍(dong)並(bing)確保樣品均(jun)勻地(di)充分解(jie)凍(dong)。

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          微(wei)生(sheng)物(wu)c1酶 (C1-enzyme)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

          操(cao)作(zuo)步驟(zhou):

          1、使(shi)用(yong)前,將所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)充分混(hun)勻。不(bu)要(yao)使液(ye)體(ti)產(chan)生(sheng)大(da)量(liang)的(de)泡(pao)沫(mo),以(yi)免加(jia)樣(yang)時加入大量的(de)氣泡(pao),產(chan)生(sheng)加(jia)樣(yang)上的(de)誤差。

          2、根據待(dai)測(ce)樣品數(shu)量加上標準(zhun)品的(de)數量決定所(suo)需(xu)的(de)板條數。每個(ge)標準品和(he)空(kong)白孔建(jian)議(yi)做(zuo)復(fu)孔(kong)。每個(ge)樣品根據自(zi)己(ji)的(de)數量來定(ding),能使(shi)用復孔的(de)盡量做復孔。

          3、加(jia)入稀釋(shi)好(hao)後的(de)標準品50ul於(yu)反(fan)應孔、加入待(dai)測(ce)樣品50ul於(yu)反(fan)應孔內。立(li)即(ji)加(jia)入50ul標記(ji)的(de)抗(kang)體(ti)。蓋上膜板(ban),輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混勻(yun),37℃溫(wen)育(yu)45分鐘(zhong)。

          4、甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液(ye)體(ti),每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye),振蕩(dang)30秒(miao),甩去(qu)洗(xi)滌液(ye),用(yong)吸(xi)水(shui)紙拍幹。重(zhong)復(fu)此操作(zuo)4次。如(ru)果用洗(xi)板機(ji)洗(xi)滌,洗(xi)滌次數(shu)增加壹(yi)次(ci)。

          5、每孔(kong)加(jia)入100ul的(de)親和(he)鏈(lian)酶素(su)-HRP,輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混勻(yun),37℃溫(wen)育(yu)30分鐘(zhong)。

          6、甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液(ye)體(ti),每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye),振蕩(dang)30秒(miao),甩去(qu)洗(xi)滌液(ye),用(yong)吸(xi)水(shui)紙拍幹。重(zhong)復(fu)此操作(zuo)4次。如(ru)果用洗(xi)板機(ji)洗(xi)滌,洗(xi)滌次數(shu)增加壹(yi)次(ci)。

          7、每孔(kong)加(jia)入底物(wu)A、B各50ul,輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混勻(yun),37℃溫(wen)育(yu)5分鐘(zhong)。避(bi)免光(guang)照。

          8、取(qu)出酶標(biao)板(ban),迅(xun)速(su)加(jia)入50ul終止液(ye),加(jia)入終止液(ye)後應立(li)即(ji)測(ce)定結(jie)果。

          9、在(zai)450nm波(bo)長(chang)處測(ce)定各孔(kong)的(de)OD值。

          操(cao)作(zuo)註意(yi)事(shi)項(xiang):

          1、試(shi)劑(ji)應按(an)標(biao)簽(qian)說明書(shu)儲存(cun),使(shi)用(yong)前(qian)恢復(fu)到(dao)室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過後的(de)標準品應丟棄(qi),不(bu)可(ke)保存

          2、實(shi)驗(yan)中不(bu)用的(de)板條應立(li)即(ji)放回(hui)包(bao)裝袋(dai)中,密(mi)封保存,以(yi)免變質(zhi)。

          3、不(bu)用的(de)其(qi)它(ta)試(shi)劑(ji)應包(bao)裝好(hao)或蓋(gai)好(hao)。不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)的(de)試(shi)劑(ji)不(bu)要(yao)混用。保質(zhi)前使(shi)用(yong)。

          4、使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性的(de)吸(xi)頭(tou)以(yi)免交(jiao)叉汙染,吸(xi)取(qu)終(zhong)止液(ye)和(he)底(di)物(wu)A、B液(ye)時,避(bi)免使用(yong)帶金(jin)屬部(bu)分的(de)加樣器。

          5、使(shi)用(yong)幹凈的(de)塑料(liao)容器配(pei)置洗(xi)滌液(ye)。使(shi)用(yong)前(qian)充分混(hun)勻試(shi)劑(ji)盒裏的(de)各種(zhong)成(cheng)份(fen)及(ji)樣品。

          6、底(di)物(wu)A應揮發,避(bi)免長(chang)時間打(da)開蓋子(zi)。底(di)物(wu)B對(dui)光(guang)敏(min)感,避(bi)免長(chang)時間暴(bao)露(lu)於光(guang)下。避(bi)免用手接(jie)觸(chu),有(you)毒(du)。實(shi)驗(yan)完(wan)成(cheng)後應立(li)即(ji)讀取(qu)OD值。

          7、加(jia)入試(shi)劑(ji)的(de)順序應壹(yi)致,以(yi)保證(zheng)所(suo)有(you)反(fan)應板孔溫(wen)育(yu)的(de)時間壹(yi)樣(yang)。按(an)照(zhao)說明書(shu)中標(biao)明(ming)的(de)時間、加(jia)液(ye)的(de)量及(ji)順序進(jin)行溫(wen)育(yu)操(cao)作(zuo)。

          壹(yi)般(ban)來講(jiang),96T能檢測(ce)90個(ge)樣本,48T能檢測(ce)42個(ge)樣本,這裏面需要(yao)用標樣(yang)來做(zuo)標準曲線,所(suo)以(yi)各位(wei)需(xu)要(yao)做實(shi)驗(yan)的(de)老師們,請在(zai)購(gou)買(mai)ELISA試(shi)劑(ji)盒的(de)時候(hou)註意(yi),需要(yao)做多(duo)少(shao)個(ge)樣本,在(zai)決定(ding)買(mai)多(duo)大(da)規(gui)格(ge)的(de)試(shi)劑(ji)盒,以(yi)免做(zuo)實(shi)驗(yan)時出現試(shi)劑(ji)盒不(bu)夠用或(huo)者浪費!

          原(yuan)理(li):將特(te)異性(xing)抗(kang)體(ti)包(bao)被於(yu)固(gu)相載(zai)體表(biao)面,經(jing)洗(xi)滌後分成(cheng)兩組(zu):壹(yi)組(zu)加酶標(biao)記(ji)抗(kang)原(yuan)和(he)被(bei)測(ce)抗(kang)原(yuan)的(de)混合液(ye),另(ling)壹(yi)組(zu)只加(jia)酶標(biao)記(ji)抗(kang)原(yuan),經(jing)孵育(yu)洗(xi)滌後加底(di)物(wu)顯色(se),這兩組(zu)底物(wu)降解(jie)量之差,即(ji)為所(suo)要(yao)測(ce)定的(de)未知(zhi)抗(kang)原(yuan)的(de)量。


          蘋果花葉(ye)病毒(APMV)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒

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