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          ELISA法(fa)是(shi)免疫診(zhen)斷中(zhong)的壹(yi)項新(xin)技術,現已成(cheng)功地(di)應(ying)用(yong)於多(duo)種(zhong)病(bing)原微生物所(suo)引起的(de)傳(chuan)染病(bing)、寄生蟲病(bing)及(ji)非(fei)傳(chuan)染病(bing)等(deng)方面的免疫診(zhen)斷。也(ye)已應(ying)用(yong)於大(da)分(fen)子抗原和(he)小(xiao)分(fen)子抗原的(de)定量測(ce)定,根據(ju)已經(jing)使用(yong)的結(jie)果(guo),認(ren)為ELISA法(fa)具(ju)有(you)靈(ling)敏(min)、特異、簡單(dan)、快(kuai)速、穩定及(ji)易(yi)於(yu)自動(dong)化操作(zuo)等(deng)特點(dian)。不(bu)僅適(shi)用(yong)於臨(lin)床標(biao)本的(de)檢(jian)查(zha),而(er)且(qie)由於(yu)壹(yi)天(tian)之內(nei)可以(yi)檢(jian)查(zha)幾百(bai)甚至(zhi)上千(qian)份(fen)標(biao)本,因此,也(ye)適(shi)合於(yu)血(xue)清(qing)流(liu)行(xing)病學調查(zha)。本法(fa)不僅可以(yi)用(yong)來(lai)測定ti,而(er)且(qie)也(ye)可用(yong)於測(ce)定體液(ye)中(zhong)的循(xun)環抗原,所(suo)以(yi)也(ye)是壹(yi)種早(zao)期診斷的(de)良好(hao)方法。因此ELISA法(fa)在(zai)生物醫(yi)學各(ge)領(ling)域(yu)的應(ying)用(yong)範(fan)圍(wei)日(ri)益(yi)擴(kuo)大,

          組(zu)成(cheng)結(jie)構

          1、血(xue)清(qing):操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免任何(he)細胞(bao)刺激(ji)。使用(yong)不含(han)熱(re)原和(he)內du素的(de)試(shi)管。收(shou)集血(xue)液後(hou),1000×g離(li)心10分(fen)鐘將(jiang)血(xue)紅細胞(bao)迅速小(xiao)心地分(fen)離(li)。

          2、2、血(xue)漿(jiang):EDTA、檸(ning)檬suan鹽、肝(gan)素血(xue)漿(jiang)可用(yong)於檢(jian)測(ce)。1000×g離(li)心30分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒。

          3、細(xi)胞(bao)上清(qing)液(ye):1000×g離(li)心10分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒和(he)聚合(he)物。

          4、組織勻(yun)漿(jiang):將(jiang)組(zu)織加(jia)入適(shi)量生理鹽水搗碎(sui)。1000×g離(li)心10分(fen)鐘,取(qu)上清(qing)液(ye)。

          5、保(bao)存:如(ru)果(guo)樣(yang)品(pin)不(bu)立即使(shi)用(yong),應(ying)將(jiang)其(qi)分(fen)成(cheng)小(xiao)部(bu)分(fen)-70℃保存(cun),避免反復(fu)冷(leng)凍(dong)。盡可能的(de)不(bu)要(yao)使用(yong)溶血(xue)。如(ru)果(guo)血(xue)清(qing)中(zhong)大量(liang)顆粒(li),檢(jian)測(ce)前(qian)先(xian)離(li)心或過(guo)濾(lv)。不要(yao)在37℃或更高的溫(wen)度(du)加(jia)熱解凍(dong)。應(ying)在室溫下(xia)解凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充分(fen)解凍(dong)。

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          微生物逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)(RT)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          操作(zuo)步(bu)驟:

          1、使用(yong)前(qian),將(jiang)所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)充分(fen)混勻(yun)。不(bu)要(yao)使液體產生大量(liang)的泡(pao)沫,以(yi)免加(jia)樣(yang)時加(jia)入大量的(de)氣泡(pao),產生加(jia)樣(yang)上的(de)誤(wu)差(cha)。

          2、根據(ju)待測(ce)樣(yang)品(pin)數(shu)量加(jia)上標(biao)準品(pin)的(de)數(shu)量決定所(suo)需(xu)的板條數(shu)。每個(ge)標(biao)準品(pin)和(he)空白孔建(jian)議(yi)做(zuo)復(fu)孔(kong)。每個(ge)樣(yang)品(pin)根據(ju)自己(ji)的數(shu)量來(lai)定,能使(shi)用(yong)復孔(kong)的(de)盡(jin)量做復(fu)孔。

          3、加(jia)入稀釋好(hao)後的(de)標(biao)準品(pin)50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔、加(jia)入待測樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反(fan)應(ying)孔內。立即加(jia)入50ul標(biao)記的(de)抗體。蓋(gai)上膜(mo)板(ban),輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun),37℃溫(wen)育(yu)45分(fen)鐘。

          4、甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液體(ti),每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液,振蕩(dang)30秒(miao),甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液,用(yong)吸水紙拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此操作(zuo)4次。如(ru)果(guo)用(yong)洗板(ban)機(ji)洗(xi)滌(di),洗滌(di)次數(shu)增加(jia)壹(yi)次。

          5、每孔(kong)加(jia)入100ul的親(qin)和(he)鏈酶(mei)素-HRP,輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun),37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘。

          6、甩(shuai)去(qu)孔內(nei)液體(ti),每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液,振蕩(dang)30秒(miao),甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液,用(yong)吸水紙拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此操作(zuo)4次。如(ru)果(guo)用(yong)洗板(ban)機(ji)洗(xi)滌(di),洗滌(di)次數(shu)增加(jia)壹(yi)次。

          7、每孔(kong)加(jia)入底(di)物A、B各(ge)50ul,輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun),37℃溫(wen)育(yu)5分(fen)鐘。避免光照。

          8、取(qu)出(chu)酶標(biao)板,迅速加(jia)入50ul終止(zhi)液(ye),加(jia)入終止(zhi)液(ye)後應(ying)立即測(ce)定結(jie)果(guo)。

          9、在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測(ce)定各孔(kong)的OD值(zhi)。

          操作(zuo)註(zhu)意事(shi)項(xiang):

          1、試(shi)劑(ji)應(ying)按(an)標(biao)簽(qian)說(shuo)明(ming)書儲(chu)存,使(shi)用(yong)前(qian)恢復(fu)到室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀過(guo)後(hou)的(de)標(biao)準品(pin)應(ying)丟棄(qi),不可保存(cun)

          2、實驗(yan)中(zhong)不用(yong)的板(ban)條(tiao)應(ying)立即放(fang)回包(bao)裝袋中(zhong),密封保(bao)存,以(yi)免變質(zhi)。

          3、不用(yong)的其(qi)它(ta)試(shi)劑(ji)應(ying)包裝好或蓋好。不同批號的試(shi)劑(ji)不(bu)要(yao)混用(yong)。保質(zhi)前(qian)使用(yong)。

          4、使用(yong)壹(yi)次性(xing)的吸頭以(yi)免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran),吸(xi)取(qu)終(zhong)止(zhi)液(ye)和(he)底(di)物A、B液時(shi),避免使用(yong)帶金屬(shu)部分(fen)的加(jia)樣(yang)器。

          5、使用(yong)幹(gan)凈(jing)的(de)塑(su)料(liao)容(rong)器(qi)配置洗滌(di)液。使(shi)用(yong)前(qian)充分(fen)混勻(yun)試(shi)劑(ji)盒(he)裏的各種(zhong)成(cheng)份(fen)及(ji)樣(yang)品(pin)。

          6、底(di)物A應(ying)揮發(fa),避免長(chang)時間打開蓋子。底(di)物B對(dui)光敏(min)感,避免長(chang)時間暴露於(yu)光下(xia)。避免用(yong)手接(jie)觸(chu),有(you)毒。實驗(yan)完成(cheng)後應(ying)立即讀(du)取(qu)OD值(zhi)。

          7、加(jia)入試(shi)劑(ji)的(de)順序應(ying)壹(yi)致,以(yi)保(bao)證(zheng)所(suo)有(you)反應(ying)板孔溫育的時(shi)間壹(yi)樣(yang)。按(an)照說(shuo)明(ming)書中(zhong)標(biao)明(ming)的(de)時(shi)間(jian)、加(jia)液的(de)量及(ji)順序進行(xing)溫(wen)育操作(zuo)。

          壹(yi)般(ban)來(lai)講,96T能檢(jian)測(ce)90個(ge)樣(yang)本,48T能檢(jian)測(ce)42個(ge)樣(yang)本,這裏面需要(yao)用(yong)標(biao)樣(yang)來(lai)做標(biao)準曲(qu)線,所(suo)以(yi)各(ge)位(wei)需(xu)要(yao)做實驗(yan)的老(lao)師們,請在購買ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)時(shi)候註(zhu)意,需(xu)要(yao)做多少個(ge)樣(yang)本,在(zai)決定買多(duo)大規格(ge)的試(shi)劑(ji)盒(he),以(yi)免做實驗(yan)時出(chu)現試(shi)劑(ji)盒(he)不(bu)夠(gou)用(yong)或者(zhe)浪費(fei)!

          原理(li):將(jiang)特(te)異性(xing)抗體包(bao)被於(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)表(biao)面,經(jing)洗滌(di)後分(fen)成(cheng)兩組(zu):壹(yi)組加(jia)酶標(biao)記抗原和(he)被測(ce)抗原的(de)混(hun)合液(ye),另(ling)壹(yi)組只加(jia)酶標(biao)記抗原,經(jing)孵育(yu)洗滌(di)後加(jia)底(di)物顯(xian)色(se),這兩組(zu)底(di)物降(jiang)解量之(zhi)差(cha),即為所(suo)要(yao)測定的未(wei)知抗原的(de)量(liang)。

          蘋(ping)果花(hua)葉(ye)病毒(APMV)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          蘋(ping)果褪(tui)綠(lv)葉(ye)斑(ban)病毒(ACLSV)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          蘋(ping)果莖溝病(bing)毒(ASGV)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          蘋(ping)果銹(xiu)果(guo)類(lei)病毒(ASSVd)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          蘋(ping)果莖痘病(bing)毒(ASPV)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          禽牛結(jie)核(he)(Mycobacterium bovis)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          蛇蛇毒因子(CVF)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          樹(shu)鼩(鼩)Ⅰ型膠(jiao)原交(jiao)聯(lian)羧基(ji)端肽(tai)(CTXI)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          樹(shu)鼩(鼩)盤(pan)狀結(jie)構域(yu)受體家(jia)族成(cheng)員2(DDR2)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          樹(shu)鼩(鼩)乙型肝炎(yan)E抗原(HBeAg)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          水貂幹(gan)擾(rao)素R(IFN-r)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          水牛乳(ru)糖酶(mei)(Lactase)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          水牛酪蛋(dan)白αs1(CSN1S1)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          梭(suo)子蟹卵黃蛋(dan)白(Vn)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          土(tu)壤(rang)脫氫酶(DHO)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          土(tu)壤(rang)脲(niao)酶(UE)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          土(tu)壤(rang)核(he)酮(tong)糖(tang)-1,5-二(er)磷(lin)酸(suan)羧化酶(Rubisco)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          土(tu)壤(rang)GABA合(he)成(cheng)酶(GABA-S)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          土(tu)壤(rang)水解脫氫酶(HDHO)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)













































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