海(hai)藻(zao)糖(tang)-6-磷酸（T6P）ELISA檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he) 使用說(shuo)明(ming)書(shu)

試劑盒(he)采用雙抗(kang)體(ti)壹步(bu)夾(jia)心(xin)法(fa)酶聯免疫吸附(fu)試驗（ELISA）。往(wang)預先包被海(hai)藻(zao)糖(tang)-6-磷酸（T6P）抗體(ti)的(de)包被微(wei)孔(kong)中(zhong)，依次加入(ru)標(biao)本、標(biao)準品(pin)、HRP標(biao)記的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)，經過(guo)溫育(yu)並(bing)徹di洗滌。用底物(wu)TMB顯(xian)色，TMB在過(guo)氧(yang)化物(wu)酶的(de)催(cui)化下轉化成藍(lan)色，並(bing)在酸的(de)作用下轉化成最(zui)終的(de)黃(huang)色。顏色的(de)深(shen)淺和樣品(pin)中(zhong)的(de)海(hai)藻(zao)糖(tang)-6-磷酸（T6P）呈正相(xiang)關(guan)。用酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm 波長(chang)下測(ce)定(ding)吸光度(du)（OD 值），計算樣品(pin)濃度(du)。

樣品(pin)收集(ji)、處(chu)理及(ji)保(bao)存(cun)方法(fa)

1.  樣本不(bu)能(neng)含疊氮(dan)鈉（NaN3），因為疊氮(dan)鈉（NaN3）是辣根(gen)過(guo)氧(yang)化物(wu)酶（HRP）的(de)抑(yi)制(zhi)劑。

2.  標(biao)本采集後盡早(zao)進(jin)行(xing)提取(qu)，提(ti)取(qu)按(an)相(xiang)關(guan)文獻(xian)進(jin)行(xing)。

3.  植物(wu)萃取(qu)液(ye)或其(qi)它相(xiang)關(guan)樣本：請(qing)1000 x g離心20分鐘，取(qu)上(shang)清(qing)即可檢(jian)測(ce)。

4.  保存(cun)：如果(guo)樣本收集(ji)後不(bu)及(ji)時檢(jian)測(ce)，請(qing)按(an)壹(yi)次用量分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充分解(jie)凍(dong)。

自備(bei)物(wu)品(pin)

1. 酶標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精度加樣器及槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫箱

操作註(zhu)意事(shi)項

1.  試劑盒(he)保存(cun)在2-8℃，使用前室(shi)溫平(ping)衡(heng)20分鐘。從冰(bing)箱取(qu)出(chu)的(de)濃縮(suo)洗滌液(ye)會(hui)有結(jie)晶，這(zhe)屬(shu)於(yu)正常現象(xiang)，水(shui)浴(yu)加(jia)熱使結晶(jing)wan全(quan)溶(rong)解(jie)後(hou)再使(shi)用。

2.  實驗中(zhong)不(bu)用的(de)板(ban)條(tiao)應(ying)立(li)即放(fang)回自(zi)封袋(dai)中(zhong)，密(mi)封（低(di)溫幹(gan)燥）保(bao)存(cun)。

3.  濃度(du)為0的(de)S0號(hao)標(biao)準品(pin)即可視(shi)為陰性對照或(huo)者空白(bai)；按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)操作時樣本已(yi)經稀釋(shi)5倍，最(zui)終結果乘(cheng)以5才是樣本實(shi)際(ji)濃度(du)。

4.  嚴(yan)格(ge)按照說(shuo)明(ming)書(shu)中(zhong)標(biao)明的(de)時間(jian)、加(jia)液(ye)量及(ji)順(shun)序進(jin)行(xing)溫育(yu)操作。

5.  所(suo)有液(ye)體(ti)組分使用前充分搖(yao)勻(yun)。

試劑盒(he)組成(cheng)

註(zhu)：標(biao)準品(pin)（S0-S5）濃度(du)依次為：0、0.75、1.5、3、6、12 ng/ml

試劑的(de)準(zhun)備(bei)

 20×洗滌緩沖(chong)液(ye)的(de)稀釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水(shui)按1：20稀釋(shi)，即1份的(de)20×洗滌緩沖(chong)液(ye)加19份(fen)的(de)蒸(zheng)餾水(shui)。

洗板(ban)方法(fa)

1.  手工(gong)洗板(ban)：甩盡(jin)孔(kong)內液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗滌液(ye)，靜(jing)置(zhi)1min後甩(shuai)盡孔(kong)內液(ye)體(ti)，在吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹(gan)，如(ru)此(ci)洗板(ban)5次。

2.  自動(dong)洗板(ban)機(ji)：每(mei)孔(kong)註(zhu)入(ru)洗液(ye)350μL，浸(jin)泡1min，洗板(ban)5次。

操作步(bu)驟(zhou)

1.  從室溫平(ping)衡(heng)20min後的(de)鋁(lv)箔袋(dai)中(zhong)取(qu)出(chu)所(suo)需板(ban)條(tiao)，剩余板(ban)條(tiao)用自封(feng)袋(dai)密(mi)封放(fang)回4℃。

2.  設置(zhi)標(biao)準品(pin)孔(kong)和樣本孔(kong)，標(biao)準品(pin)孔(kong)各加(jia)不(bu)同(tong)濃度(du)的(de)標(biao)準品(pin)50μL；

3.  樣本孔(kong)先加(jia)待測(ce)樣本10μL，再加(jia)樣本稀釋(shi)液(ye)40μL；空白(bai)孔(kong)不(bu)加(jia)。

4.  除(chu)空白(bai)孔(kong)外，標(biao)準品(pin)孔(kong)和樣本孔(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)加入(ru)辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化物(wu)酶（HRP）標(biao)記的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)100μL，用封板(ban)膜封住反(fan)應(ying)孔(kong)，37℃水(shui)浴(yu)鍋或(huo)恒(heng)溫箱溫育(yu)60min。

5.  棄去液(ye)體(ti)，吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗滌液(ye)，靜(jing)置(zhi)1min，甩去洗滌液(ye)，吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹(gan)，如(ru)此(ci)重復洗板(ban)5次（也(ye)可用洗板(ban)機(ji)洗板(ban)）。

6.  每(mei)孔(kong)加入(ru)底(di)物(wu)A、B各50μL，37℃避(bi)光孵(fu)育15min。

7.  每(mei)孔(kong)加入(ru)終止液(ye)50μL，15min內，在(zai)450nm波長(chang)處(chu)測(ce)定(ding)各孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

結果(guo)判斷

 繪制(zhi)標(biao)準曲(qu)線：在Excel工(gong)作表中(zhong)，以標(biao)準品(pin)濃度(du)作橫坐(zuo)標(biao)，對應OD值作縱坐(zuo)標(biao)，繪制出(chu)標(biao)準品(pin)線性回歸曲(qu)線，按曲(qu)線方程(cheng)計算各樣本濃度(du)值。 

試劑盒(he)性能

1.  準確(que)性：標(biao)準品(pin)線性回歸與(yu)預期(qi)濃度(du)相關(guan)系數R值，大(da)於等(deng)於0.9900。

2.  靈敏(min)度：最(zui)di檢測(ce)濃度(du)小於0.1ng/ml。

3.  特(te)異(yi)性：不(bu)與(yu)其(qi)它可(ke)溶(rong)性結構類(lei)似(si)物(wu)交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。

4.  重復性：板(ban)內、板(ban)間(jian)變(bian)異(yi)系數均(jun)小於15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防(fang)潮保(bao)存(cun)。

6.  有效(xiao)期(qi)：6個月(yue)

免責(ze)聲(sheng)明

1.   試劑盒(he)僅供研究(jiu)使用，不(bu)得(de)用於臨(lin)床(chuang)實驗或人(ren)體(ti)實驗，否則(ze)所(suo)產(chan)生的(de)壹(yi)切後果(guo)，由實(shi)驗者承(cheng)擔，本(ben)公(gong)司(si)概(gai)不(bu)負責(ze)。

2.   嚴(yan)格(ge)按照說(shuo)明(ming)書(shu)操作，實驗者違反說(shuo)明(ming)書(shu)操作，後果由實(shi)驗者承(cheng)擔。