植(zhi)物(wu)（Plant）肌醇半(ban)乳糖(tang)苷(gan)（galactinol）ELISA檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒說明書

試(shi)劑盒采用雙抗(kang)體(ti)壹(yi)步夾(jia)心法酶(mei)聯免疫吸(xi)附試(shi)驗（ELISA）。往(wang)預先(xian)包(bao)被(bei)肌(ji)醇半(ban)乳糖(tang)苷(gan)（galactinol）抗(kang)體(ti)的(de)包(bao)被(bei)微(wei)孔(kong)中，依(yi)次加入標本(ben)、標(biao)準(zhun)品、HRP標(biao)記的(de)檢(jian)測抗(kang)體(ti)，經(jing)過(guo)溫(wen)育(yu)並徹di洗(xi)滌(di)。用(yong)底物TMB顯(xian)色，TMB在(zai)過(guo)氧化物酶(mei)的催(cui)化下轉(zhuan)化成藍(lan)色(se)，並在酸(suan)的(de)作用(yong)下(xia)轉化成最(zui)終的黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣(yang)品中的肌(ji)醇半(ban)乳糖(tang)苷(gan)（galactinol）呈(cheng)正(zheng)相關。用酶(mei)標儀(yi)在450nm 波(bo)長下(xia)測定吸(xi)光(guang)度(du)（OD 值），計算樣(yang)品濃度(du)。

樣(yang)品收(shou)集(ji)、處理(li)及保(bao)存(cun)方(fang)法

1.  血(xue)清(qing)：使(shi)用不(bu)含熱(re)原(yuan)和內毒(du)素(su)的試(shi)管，操作過(guo)程中避免任何細(xi)胞(bao)刺激，收(shou)集(ji)血(xue)液(ye)後(hou)，3000轉(zhuan)離心10分(fen)鐘(zhong)將血(xue)清(qing)和紅細(xi)胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心地(di)分(fen)離。

2.  血(xue)漿：EDTA、檸檬(meng)酸鹽(yan)或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000轉(zhuan)離心30分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。

3.  細(xi)胞上(shang)清(qing)液：3000轉(zhuan)離心10分(fen)鐘(zhong)去除顆(ke)粒和聚(ju)合物(wu)。

4.  組(zu)織勻(yun)漿：將(jiang)組(zu)織加入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理鹽(yan)水搗碎。3000轉離心10分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。

5.  保(bao)存(cun)：如(ru)果樣本(ben)收集(ji)後(hou)不(bu)及時檢(jian)測，請(qing)按壹次用量(liang)分(fen)裝，凍存於-20℃，避免反復凍融，在室溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確保(bao)樣(yang)品均勻地(di)充分解(jie)凍。

自備(bei)物(wu)品(pin)

1. 酶(mei)標儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精度(du)加(jia)樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫(wen)箱

操作註意(yi)事(shi)項

1.  試(shi)劑盒保(bao)存(cun)在2-8℃，使(shi)用前室溫(wen)平衡20分鐘(zhong)。從冰(bing)箱取(qu)出的(de)濃縮(suo)洗滌(di)液(ye)會有(you)結(jie)晶(jing)，這屬於正(zheng)常現象，水浴加熱使(shi)結(jie)晶(jing)wan全(quan)溶(rong)解(jie)後(hou)再(zai)使(shi)用。

2.  實(shi)驗中不用(yong)的板(ban)條(tiao)應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回自封袋(dai)中，密封（低(di)溫(wen)幹燥）保(bao)存(cun)。

3.  濃(nong)度(du)為(wei)0的(de)S0號標準品即(ji)可(ke)視(shi)為(wei)陰(yin)性對照或(huo)者(zhe)空(kong)白；按照說(shuo)明書操作時(shi)樣(yang)本已經(jing)稀釋(shi)5倍(bei)，最(zui)終結(jie)果乘以(yi)5才是樣本實(shi)際(ji)濃(nong)度(du)。

4.  嚴(yan)格(ge)按照說(shuo)明書中標明的時(shi)間、加液量(liang)及順序進行(xing)溫(wen)育(yu)操作。

5.  所有(you)液(ye)體(ti)組(zu)分使(shi)用前充分搖(yao)勻(yun)。

試(shi)劑盒組成

註：標(biao)準(zhun)品（S0-S5）濃(nong)度(du)依(yi)次為(wei)：0、30、60、120、240、480 pg/mL

試(shi)劑的(de)準(zhun)備(bei)

 20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液(ye)的稀釋：蒸餾(liu)水按1：20稀釋(shi)，即(ji)1份的20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液(ye)加19份的蒸餾(liu)水。

洗(xi)板(ban)方(fang)法

1.  手(shou)工(gong)洗板(ban)：甩(shuai)盡孔(kong)內液體(ti)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置(zhi)1min後(hou)甩(shuai)盡孔(kong)內液體(ti)，在(zai)吸(xi)水紙(zhi)上拍(pai)幹，如(ru)此洗(xi)板(ban)5次。

2.  自動洗(xi)板(ban)機：每(mei)孔(kong)註入(ru)洗(xi)液350μL，浸泡(pao)1min，洗(xi)板(ban)5次。

操作步(bu)驟(zhou)

1.  從室(shi)溫(wen)平衡20min後(hou)的(de)鋁(lv)箔袋(dai)中取(qu)出所需板(ban)條(tiao)，剩(sheng)余板(ban)條(tiao)用(yong)自封袋(dai)密封放(fang)回4℃。

2.  設(she)置標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)和(he)樣本孔(kong)，標(biao)準品(pin)孔(kong)各(ge)加不同濃度(du)的(de)標準(zhun)品(pin)50μL；

3.  樣(yang)本孔(kong)先(xian)加待(dai)測樣(yang)本(ben)10μL，再(zai)加樣(yang)本稀(xi)釋(shi)液(ye)40μL；空(kong)白孔(kong)不(bu)加。

4.  除空(kong)白孔(kong)外，標(biao)準品(pin)孔(kong)和(he)樣本孔(kong)中每(mei)孔(kong)加(jia)入辣根(gen)過(guo)氧化物酶(mei)（HRP）標(biao)記的(de)檢(jian)測抗(kang)體(ti)100μL，用(yong)封板(ban)膜(mo)封(feng)住(zhu)反應(ying)孔(kong)，37℃水浴鍋或(huo)恒溫(wen)箱溫(wen)育(yu)60min。

5.  棄(qi)去液(ye)體(ti)，吸(xi)水紙(zhi)上拍(pai)幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置(zhi)1min，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液(ye)，吸(xi)水紙(zhi)上拍(pai)幹，如(ru)此重復(fu)洗板(ban)5次（也(ye)可(ke)用洗(xi)板(ban)機洗(xi)板(ban)）。

6.  每(mei)孔(kong)加(jia)入底物A、B各(ge)50μL，37℃避光(guang)孵(fu)育(yu)15min。

7.  每(mei)孔(kong)加(jia)入終止液50μL，15min內，在450nm波(bo)長(chang)處測定各(ge)孔(kong)的(de)OD值。

結(jie)果判斷(duan)

 繪(hui)制(zhi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)：在Excel工(gong)作表中，以標(biao)準品(pin)濃度(du)作(zuo)橫坐(zuo)標，對應(ying)OD值作縱(zong)坐(zuo)標，繪制(zhi)出(chu)標(biao)準(zhun)品線(xian)性回歸(gui)曲(qu)線(xian)，按曲(qu)線(xian)方(fang)程計算各(ge)樣本濃度(du)值。 

試(shi)劑盒性能

1.  準(zhun)確性(xing)：標(biao)準(zhun)品(pin)線(xian)性回歸(gui)與預期(qi)濃(nong)度(du)相(xiang)關系(xi)數(shu)R值，大於等於0.9900。

2.  靈(ling)敏(min)度(du)：最(zui)di檢測濃(nong)度(du)小(xiao)於1.0 pg/mL。

3.  特(te)異(yi)性(xing)：不與其它(ta)可(ke)溶性(xing)結(jie)構(gou)類(lei)似物(wu)交(jiao)叉反(fan)應(ying)。

4.  重復(fu)性：板(ban)內、板(ban)間變(bian)異(yi)系(xi)數(shu)均小(xiao)於15%。

5.  貯(zhu)藏(zang)：2-8℃，避(bi)光防(fang)潮保(bao)存(cun)。

6.  有(you)效(xiao)期(qi)：6個(ge)月

免責(ze)聲明

1.   試(shi)劑盒僅(jin)供研究(jiu)使(shi)用，不(bu)得用(yong)於臨床(chuang)實(shi)驗(yan)或(huo)人(ren)體(ti)實(shi)驗，否(fou)則(ze)所產生(sheng)的壹(yi)切(qie)後(hou)果，由(you)實(shi)驗者(zhe)承(cheng)擔，本(ben)公(gong)司(si)概(gai)不負(fu)責(ze)。

2.   嚴(yan)格(ge)按照說(shuo)明書操作，實(shi)驗(yan)者(zhe)違(wei)反說(shuo)明書操作，後(hou)果由(you)實(shi)驗者(zhe)承(cheng)擔。