大鼠（t-PAIC） ELISA檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

試劑(ji)盒(he)采(cai)用(yong)雙抗體(ti)壹步夾(jia)心(xin)法(fa)酶(mei)聯免疫吸附試驗(yan)（ELISA）。往預(yu)先(xian)包(bao)被組織(zhi)型(xing)纖溶(rong)酶(mei)原激活物-纖溶(rong)酶(mei)原激活抑制(zhi)物-1復合(he)物(wu)（t-PAIC）抗體(ti)的包(bao)被(bei)微孔(kong)中，依(yi)次加(jia)入(ru)標本、標(biao)準品、HRP標記(ji)的檢測抗(kang)體(ti)，經過(guo)溫(wen)育並(bing)徹(che)di洗滌。用(yong)底(di)物TMB顯色(se)，TMB在過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)的催(cui)化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色(se)，並(bing)在酸(suan)的作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成最(zui)終(zhong)的黃(huang)色(se)。顏(yan)色(se)的深(shen)淺(qian)和(he)樣品(pin)中(zhong)的組織(zhi)型(xing)纖溶(rong)酶(mei)原激活物-纖溶(rong)酶(mei)原激活抑制(zhi)物-1復合(he)物(wu)（t-PAIC）呈(cheng)正相關。用(yong)酶(mei)標儀在450nm 波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)（OD 值），計(ji)算樣品(pin)濃(nong)度。

樣品(pin)收集(ji)、處理及(ji)保(bao)存(cun)方法(fa)

1.  血清：使用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管，操(cao)作(zuo)過(guo)程中(zhong)避(bi)免任何(he)細胞刺(ci)激，收集(ji)血液後，3000轉(zhuan)離心(xin)10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清和紅細(xi)胞迅(xun)速(su)小心(xin)地(di)分(fen)離。

2.  血漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗凝。3000轉(zhuan)離心(xin)30分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。

3.  細胞上(shang)清液：3000轉(zhuan)離心(xin)10分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒(li)和聚(ju)合物(wu)。

4.  組織(zhi)勻(yun)漿：將組(zu)織加(jia)入(ru)適(shi)量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000轉(zhuan)離心(xin)10分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。

5.  保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣本(ben)收集(ji)後不及(ji)時檢測，請按(an)壹次用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於-20℃，避(bi)免反復凍(dong)融，在室(shi)溫(wen)下解(jie)凍並(bing)確保(bao)樣品(pin)均(jun)勻地(di)充(chong)分解(jie)凍。

自備(bei)物品(pin)

1. 酶(mei)標儀（450nm）

2. 高精度加(jia)樣器(qi)及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫(wen)箱

操(cao)作(zuo)註(zhu)意事(shi)項

1.  試劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)在2-8℃，使用(yong)前(qian)室(shi)溫(wen)平衡20分鐘(zhong)。從冰(bing)箱(xiang)取(qu)出(chu)的濃(nong)縮洗滌液會(hui)有結(jie)晶(jing)，這屬(shu)於(yu)正常(chang)現象，水(shui)浴(yu)加(jia)熱使(shi)結(jie)晶(jing)wan全(quan)溶(rong)解(jie)後再(zai)使(shi)用(yong)。

2.  實驗(yan)中(zhong)不用(yong)的板(ban)條應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回自(zi)封(feng)袋(dai)中(zhong)，密(mi)封(feng)（低(di)溫(wen)幹燥(zao)）保(bao)存(cun)。

3.  濃(nong)度為0的S0號(hao)標(biao)準品即(ji)可(ke)視為陰(yin)性對(dui)照或(huo)者空(kong)白；按(an)照說(shuo)明(ming)書操(cao)作(zuo)時(shi)樣本(ben)已經(jing)稀釋(shi)5倍，最(zui)終(zhong)結(jie)果(guo)乘以(yi)5才(cai)是樣本(ben)實(shi)際濃(nong)度。

4.  嚴(yan)格(ge)按(an)照說(shuo)明(ming)書中(zhong)標明(ming)的時(shi)間(jian)、加(jia)液量及(ji)順序進(jin)行溫(wen)育操(cao)作(zuo)。

5.  所有液體(ti)組分(fen)使(shi)用(yong)前(qian)充(chong)分搖勻(yun)。

試劑(ji)盒(he)組(zu)成

註(zhu)：標準品（S0-S5）濃(nong)度依(yi)次為：0、0.25、0.5、1、2、4 IU/mL

試劑(ji)的準備(bei)

 20×洗滌緩(huan)沖(chong)液的稀釋(shi)：蒸餾水按(an)1：20稀釋(shi)，即(ji)1份(fen)的20×洗滌緩(huan)沖(chong)液加(jia)19份的蒸餾水。

洗板(ban)方法(fa)

1.  手工(gong)洗板(ban)：甩(shuai)盡(jin)孔內(nei)液體(ti)，每孔加(jia)滿(man)洗滌液，靜(jing)置1min後甩(shuai)盡(jin)孔內(nei)液體(ti)，在吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，如(ru)此(ci)洗板(ban)5次。

2.  自動(dong)洗板(ban)機：每孔註(zhu)入(ru)洗液350μL，浸泡1min，洗板(ban)5次。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)

1.  從室溫(wen)平衡20min後的鋁箔(bo)袋中(zhong)取出(chu)所需(xu)板(ban)條，剩(sheng)余(yu)板(ban)條用(yong)自(zi)封(feng)袋(dai)密(mi)封(feng)放(fang)回4℃。

2.  設置標準品孔和(he)樣本(ben)孔(kong)，標準品孔各(ge)加(jia)不同濃(nong)度的標(biao)準品50μL；

3.  樣本(ben)孔(kong)先加(jia)待測樣本(ben)10μL，再(zai)加(jia)樣本(ben)稀釋(shi)液40μL；空(kong)白孔不加(jia)。

4.  除空(kong)白孔外，標準品孔和(he)樣本(ben)孔(kong)中每孔加(jia)入(ru)辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)（HRP）標記(ji)的檢測抗(kang)體(ti)100μL，用(yong)封(feng)板(ban)膜封(feng)住(zhu)反應孔(kong)，37℃水浴(yu)鍋或恒溫(wen)箱溫(wen)育60min。

5.  棄去液體(ti)，吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，每孔加(jia)滿(man)洗滌液，靜(jing)置1min，甩(shuai)去洗滌液，吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，如(ru)此(ci)重(zhong)復洗板(ban)5次（也(ye)可(ke)用(yong)洗板(ban)機洗板(ban)）。

6.  每孔加(jia)入(ru)底(di)物A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

7.  每孔加(jia)入(ru)終(zhong)止液50μL，15min內(nei)，在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測(ce)定(ding)各(ge)孔(kong)的OD值。

結(jie)果(guo)判斷

 繪制(zhi)標準曲(qu)線：在Excel工作(zuo)表(biao)中(zhong)，以(yi)標(biao)準品濃(nong)度作(zuo)橫(heng)坐(zuo)標，對應OD值作(zuo)縱(zong)坐標(biao)，繪(hui)制(zhi)出標準品線性回歸(gui)曲(qu)線，按(an)曲(qu)線方程計(ji)算各樣本(ben)濃(nong)度值。 

試劑(ji)盒(he)性(xing)能(neng)

1.  準確性(xing)：標準品線性回歸(gui)與(yu)預期濃(nong)度相關系數(shu)R值，大於等(deng)於(yu)0.9900。

2.  靈(ling)敏度(du)：最(zui)di檢測濃(nong)度小於(yu)0.1 IU/mL。

3.  特(te)異性：不與其(qi)它(ta)可(ke)溶(rong)性結(jie)構類(lei)似(si)物(wu)交叉反應。

4.  重復(fu)性(xing)：板(ban)內(nei)、板(ban)間變異系數(shu)均(jun)小於(yu)15%。

5.  貯藏(zang)：2-8℃，避(bi)光防潮保(bao)存(cun)。

6.  有效期：6個(ge)月(yue)

免責聲(sheng)明(ming)

1.   試劑(ji)盒(he)僅(jin)供(gong)研(yan)究使(shi)用(yong)，不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)實(shi)驗(yan)或(huo)人體(ti)實驗(yan)，否(fou)則(ze)所產生(sheng)的壹切(qie)後(hou)果(guo)，由(you)實驗(yan)者承(cheng)擔，本公(gong)司(si)概(gai)不(bu)負責。

2.   嚴(yan)格(ge)按(an)照說(shuo)明(ming)書操(cao)作(zuo)，實(shi)驗(yan)者違反說明(ming)書操(cao)作(zuo)，後(hou)果(guo)由(you)實驗(yan)者承(cheng)擔。