氫化(hua)酶(mei)（HYS）ELISA檢(jian)測試(shi)劑盒(he) @使用說明書(shu)

試(shi)劑盒(he)采(cai)用雙(shuang)抗體壹步夾(jia)心(xin)法酶(mei)聯免疫(yi)吸附(fu)試(shi)驗(yan)（ELISA）。往預(yu)先(xian)包被氫化(hua)酶(mei)（HYS）抗體的(de)包被微孔(kong)中(zhong)，依次(ci)加入標(biao)本、標準(zhun)品(pin)、HRP標(biao)記的(de)檢(jian)測抗體，經過溫(wen)育並(bing)徹(che)di洗(xi)滌。用底(di)物TMB顯色，TMB在(zai)過氧化(hua)物酶(mei)的(de)催化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍(lan)色，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作用下(xia)轉化(hua)成(cheng)最終的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深(shen)淺(qian)和樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)氫化(hua)酶(mei)（HYS）呈(cheng)正(zheng)相關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀(yi)在(zai)450nm 波(bo)長下(xia)測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)（OD 值(zhi)），計算樣(yang)品(pin)活(huo)性(xing)。

樣(yang)品(pin)收集、處理(li)及保(bao)存(cun)方法

1.  血(xue)清：使用不含(han)熱(re)原和內毒素(su)的(de)試(shi)管(guan)，操作過程中(zhong)避(bi)免任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺激(ji)，收集血(xue)液後(hou)，3000轉離心10分(fen)鐘將(jiang)血(xue)清和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速(su)小(xiao)心地(di)分(fen)離。

2.  血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)或(huo)肝素(su)抗凝(ning)。3000轉離心30分(fen)鐘取(qu)上清。

3.  細(xi)胞(bao)上清液(ye)：3000轉離心10分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚(ju)合物。

4.  組(zu)織勻漿：將組(zu)織加入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000轉離心10分(fen)鐘取(qu)上清。

5.  保(bao)存(cun)：如果(guo)樣(yang)本收集後(hou)不及時(shi)檢(jian)測，請(qing)按(an)壹次(ci)用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免反復凍(dong)融(rong)，在(zai)室(shi)溫下(xia)解凍並(bing)確保樣(yang)品(pin)均(jun)勻地(di)充分(fen)解凍。

自(zi)備(bei)物品(pin)

1. 酶(mei)標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精度(du)加(jia)樣(yang)器(qi)及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫(wen)箱

操作註意事(shi)項

1.  試(shi)劑盒(he)保(bao)存(cun)在(zai)2-8℃，使用前(qian)室(shi)溫(wen)平(ping)衡(heng)20分(fen)鐘。從冰箱取(qu)出(chu)的(de)濃縮洗滌液會(hui)有(you)結晶，這(zhe)屬於(yu)正(zheng)常現象(xiang)，水(shui)浴(yu)加(jia)熱(re)使結晶wan全(quan)溶(rong)解後(hou)再使用。

2.  實(shi)驗(yan)中(zhong)不用的(de)板(ban)條應立即(ji)放回自封(feng)袋中(zhong)，密封(feng)（低(di)溫幹(gan)燥）保存(cun)。

3.  濃度(du)為0的(de)S0號(hao)標準(zhun)品(pin)即(ji)可(ke)視(shi)為陰性(xing)對(dui)照或(huo)者(zhe)空白(bai)；按(an)照(zhao)說明書(shu)操作時(shi)樣(yang)本已經(jing)稀(xi)釋5倍(bei)，最終結果乘以5才是(shi)樣(yang)本實際濃度(du)。

4.  嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)說明書(shu)中(zhong)標明(ming)的(de)時(shi)間、加(jia)液(ye)量(liang)及(ji)順序進行(xing)溫(wen)育操作。

5.  所有(you)液(ye)體(ti)組(zu)分(fen)使用前(qian)充(chong)分(fen)搖勻(yun)。

試(shi)劑盒(he)組(zu)成(cheng)

註(zhu)：標(biao)準(zhun)品(pin)（S0-S5）濃度(du)依(yi)次(ci)為：0、100、200、400、800、1600 U/ml

試(shi)劑的(de)準(zhun)備(bei)

 20×洗(xi)滌緩沖液(ye)的(de)稀(xi)釋：蒸(zheng)餾(liu)水(shui)按(an)1：20稀(xi)釋，即(ji)1份(fen)的(de)20×洗(xi)滌緩沖液(ye)加(jia)19份的(de)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

洗(xi)板(ban)方法

1.  手工洗板(ban)：甩盡(jin)孔(kong)內液體(ti)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)1min後(hou)甩盡(jin)孔(kong)內液體(ti)，在(zai)吸(xi)水紙上拍幹(gan)，如(ru)此(ci)洗板(ban)5次(ci)。

2.  自(zi)動(dong)洗板(ban)機(ji)：每(mei)孔(kong)註(zhu)入(ru)洗(xi)液350μL，浸(jin)泡1min，洗板5次(ci)。

操作步驟

1.  從室(shi)溫(wen)平(ping)衡(heng)20min後(hou)的(de)鋁箔袋中(zhong)取出(chu)所需板條，剩余板條用自(zi)封袋密封(feng)放回4℃。

2.  設(she)置(zhi)標準(zhun)品(pin)孔(kong)和樣(yang)本孔(kong)，標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)各(ge)加不同濃度(du)的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)50μL；

3.  樣(yang)本孔(kong)先(xian)加(jia)待測樣(yang)本10μL，再(zai)加(jia)樣(yang)本稀釋液(ye)40μL；空(kong)白(bai)孔(kong)不加。

4.  除(chu)空(kong)白(bai)孔(kong)外，標準(zhun)品(pin)孔(kong)和樣(yang)本孔(kong)中(zhong)每孔(kong)加(jia)入(ru)辣根過氧化(hua)物酶(mei)（HRP）標(biao)記的(de)檢(jian)測抗體100μL，用封(feng)板膜封住(zhu)反應孔(kong)，37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)或恒(heng)溫箱溫(wen)育60min。

5.  棄(qi)去液(ye)體(ti)，吸水(shui)紙上拍幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)1min，甩(shuai)去洗(xi)滌液，吸(xi)水(shui)紙上拍幹(gan)，如(ru)此(ci)重復洗(xi)板(ban)5次(ci)（也(ye)可(ke)用洗(xi)板機洗板(ban)）。

6.  每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)底(di)物A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光(guang)孵育15min。

7.  每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)終止液50μL，15min內，在(zai)450nm波(bo)長處測定(ding)各(ge)孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

結果判斷(duan)

 繪(hui)制(zhi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)：在(zai)Excel工作表(biao)中(zhong)，以標(biao)準(zhun)品(pin)濃度(du)作橫(heng)坐(zuo)標(biao)，對(dui)應OD值作縱(zong)坐(zuo)標(biao)，繪(hui)制(zhi)出(chu)標(biao)準(zhun)品(pin)線(xian)性(xing)回歸(gui)曲(qu)線(xian)，按(an)曲(qu)線(xian)方程計算各(ge)樣(yang)本濃度(du)值(zhi)。 

試(shi)劑盒(he)性(xing)能

1.  準(zhun)確性：標(biao)準(zhun)品(pin)線(xian)性(xing)回歸(gui)與預(yu)期濃度(du)相(xiang)關系(xi)數(shu)R值(zhi)，大(da)於(yu)等(deng)於(yu)0.9900。

2.  靈(ling)敏(min)度(du)：最di檢(jian)測濃度(du)小(xiao)於10.0U/ml。

3.  特(te)異性：不與其(qi)它可溶(rong)性結構(gou)類似物交叉反應。

4.  重復性(xing)：板(ban)內、板間(jian)變(bian)異系(xi)數(shu)均(jun)小(xiao)於15%。

5.  貯藏：2-8℃，避(bi)光(guang)防潮(chao)保存(cun)。

6.  有(you)效(xiao)期(qi)：6個月

免責(ze)聲明(ming)

1.   試(shi)劑盒(he)僅(jin)供研究(jiu)使用，不得(de)用於(yu)臨(lin)床實驗(yan)或人(ren)體實(shi)驗(yan)，否則(ze)所產生的(de)壹切後(hou)果，由(you)實驗(yan)者(zhe)承擔，本公司(si)概不負責。

2.   嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)說明書(shu)操作，實驗(yan)者(zhe)違(wei)反說明書(shu)操作，後(hou)果由(you)實驗(yan)者(zhe)承擔。