牛(niu)布病抗體（Brucellosis-Ab）@ ELISA檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

試(shi)劑(ji)盒(he)采(cai)用(yong)雙(shuang)抗壹(yi)步(bu)夾心(xin)法(fa)酶聯(lian)免疫(yi)吸附試(shi)驗（ELISA）。往預(yu)先(xian)包(bao)被(bei)布病抗原(yuan)的包(bao)被(bei)微孔(kong)中(zhong)，依(yi)次加入標本(ben)、標準(zhun)品、HRP標記(ji)的檢(jian)測抗體，經過(guo)溫(wen)育並(bing)徹(che)di洗滌(di)。用底物TMB顯色，TMB在過(guo)氧化物酶的(de)催化下(xia)轉化成藍(lan)色，並(bing)在酸(suan)的(de)作(zuo)用下(xia)轉化成最終(zhong)的(de)黃(huang)色。顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)和(he)樣品(pin)中(zhong)的布病抗體（Brucellosis-Ab）呈正相關。用酶(mei)標儀(yi)在450nm 波長(chang)下測定(ding)吸光度(du)（OD 值），計算樣品(pin)濃(nong)度(du)。

樣品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)

1.  血清(qing)：使用(yong)不含熱(re)原(yuan)和(he)內毒(du)素的試(shi)管，操作過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免任何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收集(ji)血液(ye)後，3000轉離心(xin)10分(fen)鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速小心(xin)地分(fen)離(li)。

2.  血漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝素抗凝。3000轉離心(xin)30分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。

3.  細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)：3000轉離心(xin)10分(fen)鐘去除(chu)顆粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量(liang)生理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎。3000轉離心(xin)10分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。

5.  保(bao)存(cun)：如(ru)果樣本(ben)收(shou)集後不及時(shi)檢(jian)測，請(qing)按壹(yi)次用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免反復凍融，在室(shi)溫(wen)下解凍並(bing)確保(bao)樣品(pin)均勻(yun)地充分(fen)解(jie)凍。

自備物品

1. 酶標儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精度(du)加(jia)樣器(qi)及槍(qiang)頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫(wen)箱

操作註(zhu)意事(shi)項(xiang)

1.  試(shi)劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)在2-8℃，使用(yong)前(qian)室(shi)溫(wen)平衡20分(fen)鐘。從冰(bing)箱取(qu)出(chu)的(de)濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液(ye)會(hui)有結晶(jing)，這屬於(yu)正常現象，水(shui)浴加(jia)熱(re)使結晶(jing)wan全(quan)溶解(jie)後再使用(yong)。

2.  實驗中(zhong)不用的(de)板(ban)條(tiao)應(ying)立(li)即(ji)放回(hui)自(zi)封袋(dai)中(zhong)，密封（低溫(wen)幹燥）保(bao)存(cun)。

3.  濃(nong)度(du)為(wei)0的S0號標準(zhun)品即(ji)可(ke)視為(wei)陰(yin)性對(dui)照或(huo)者(zhe)空白；按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)操作時(shi)樣本(ben)已(yi)經稀(xi)釋5倍，最終(zhong)結果(guo)乘(cheng)以5才(cai)是樣本(ben)實際(ji)濃(nong)度(du)。

4.  嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)中(zhong)標明(ming)的(de)時(shi)間(jian)、加(jia)液(ye)量(liang)及順(shun)序(xu)進(jin)行(xing)溫育操作。

5.  所(suo)有(you)液(ye)體組分(fen)使用(yong)前(qian)充分(fen)搖(yao)勻。

試(shi)劑(ji)盒(he)組成

註(zhu)：標準(zhun)品（S0-S5）濃(nong)度(du)依(yi)次為(wei)：0、3、6、12、24、48 pg/mL

試(shi)劑(ji)的(de)準(zhun)備

 20×洗滌(di)緩沖液(ye)的(de)稀釋：蒸餾水(shui)按1：20稀釋，即(ji)1份的20×洗(xi)滌(di)緩沖液(ye)加(jia)19份的蒸餾水(shui)。

洗板(ban)方(fang)法(fa)

1.  手(shou)工(gong)洗板(ban)：甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內液(ye)體，每孔(kong)加滿(man)洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi)1min後甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內液(ye)體，在吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍(pai)幹，如此洗(xi)板(ban)5次。

2.  自動(dong)洗(xi)板(ban)機：每孔(kong)註(zhu)入洗液(ye)350μL，浸泡(pao)1min，洗(xi)板(ban)5次。

操作步(bu)驟(zhou)

1.  從室(shi)溫(wen)平衡20min後的鋁箔袋(dai)中(zhong)取出(chu)所(suo)需(xu)板(ban)條(tiao)，剩余(yu)板(ban)條(tiao)用自(zi)封袋(dai)密封放回(hui)4℃。

2.  設(she)置(zhi)標準(zhun)品孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)，標準(zhun)品孔(kong)各加(jia)不同濃(nong)度(du)的(de)標準(zhun)品50μL；

3.  樣本(ben)孔(kong)先(xian)加(jia)待測樣本(ben)10μL，再加樣本(ben)稀(xi)釋液(ye)40μL；空白孔(kong)不加。 

4.  除空白孔(kong)外(wai)，標準(zhun)品孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)中(zhong)每孔(kong)加入辣根過(guo)氧化物酶（HRP）標記(ji)的檢(jian)測抗體100μL，用封板(ban)膜封住(zhu)反應(ying)孔(kong)，37℃水(shui)浴鍋(guo)或(huo)恒溫箱溫(wen)育60min。

5.  棄(qi)去液(ye)體，吸水(shui)紙上(shang)拍(pai)幹，每孔(kong)加滿(man)洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi)1min，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液(ye)，吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍(pai)幹，如此重(zhong)復洗(xi)板(ban)5次（也可(ke)用(yong)洗板(ban)機洗板(ban)）。

6.  每孔(kong)加入底物A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

7.  每孔(kong)加入終(zhong)止液(ye)50μL，15min內，在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定(ding)各孔(kong)的OD值。

結果(guo)判斷(duan)

 繪制(zhi)標準(zhun)曲線(xian)：在Excel工作(zuo)表(biao)中(zhong)，以標準(zhun)品濃(nong)度(du)作(zuo)橫坐標，對(dui)應(ying)OD值作(zuo)縱坐標，繪制(zhi)出(chu)標準(zhun)品線(xian)性回(hui)歸曲線(xian)，按(an)曲線(xian)方(fang)程(cheng)計算各樣本(ben)濃(nong)度(du)值。

試(shi)劑(ji)盒(he)性能(neng)

1.  準(zhun)確性：標準(zhun)品線(xian)性回(hui)歸與預(yu)期濃(nong)度(du)相(xiang)關(guan)系數R值，大(da)於等於0.9900。

2.  靈敏度(du)：最(zui)di檢(jian)測濃(nong)度(du)小(xiao)於(yu)1.0 pg/mL。

3.  特異(yi)性：不與其它(ta)可(ke)溶(rong)性結構(gou)類似(si)物交叉(cha)反應(ying)。

4.  重(zhong)復性：板(ban)內、板(ban)間(jian)變(bian)異系(xi)數均小(xiao)於(yu)15%。

5.  貯藏(zang)：2-8℃，避(bi)光防潮保(bao)存(cun)。

6.  有效(xiao)期：6個月(yue)

免責聲(sheng)明(ming)

1.   試(shi)劑(ji)盒(he)僅(jin)供(gong)研(yan)究(jiu)使用(yong)，不得用於臨(lin)床(chuang)實驗或(huo)牛(niu)體實驗，否則(ze)所(suo)產(chan)生的壹(yi)切後果，由實驗者(zhe)承擔，本(ben)公司(si)概(gai)不負(fu)責。

2.   嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)操作，實驗者(zhe)違反說明(ming)書(shu)操作，後果由實驗者(zhe)承擔。