狗肉(rou)毒堿(jian)（Carnitine）ELISA檢測試(shi)劑盒 使(shi)用(yong)說明(ming)書

試(shi)劑盒采用(yong)雙抗(kang)體壹步夾(jia)心(xin)法酶聯免疫吸(xi)附試(shi)驗(yan)（ELISA）。往預先(xian)包被(bei)肉(rou)毒堿(jian)（Carnitine）抗(kang)體的(de)包被(bei)微(wei)孔(kong)中(zhong)，依次加(jia)入標本(ben)、標(biao)準(zhun)品、HRP標(biao)記的(de)檢(jian)測抗體(ti)，經(jing)過(guo)溫育(yu)並徹(che)di洗(xi)滌(di)。用(yong)底(di)物TMB顯色，TMB在過(guo)氧化(hua)物酶的催化(hua)下轉化(hua)成藍(lan)色，並(bing)在酸的(de)作用(yong)下轉化(hua)成最(zui)終(zhong)的黃(huang)色。顏(yan)色的(de)深淺(qian)和(he)樣品中的肉(rou)毒堿(jian)（Carnitine）呈(cheng)正相(xiang)關。用(yong)酶標儀在450nm 波(bo)長下測定(ding)吸(xi)光度(du)（OD 值(zhi)），計算(suan)樣品濃度(du)。

樣品收集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)

1.  血(xue)清：使(shi)用(yong)不含熱原(yuan)和(he)內毒(du)素的試(shi)管，操(cao)作(zuo)過(guo)程中(zhong)避(bi)免(mian)任何細胞刺(ci)激(ji)，收集(ji)血(xue)液(ye)後，3000轉(zhuan)離心(xin)10分(fen)鐘(zhong)將血清(qing)和(he)紅(hong)細胞迅速(su)小心地(di)分(fen)離。

2.  血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬酸(suan)鹽(yan)或肝(gan)素抗凝。3000轉離心30分(fen)鐘(zhong)取上清(qing)。

3.  細(xi)胞上(shang)清(qing)液(ye)：3000轉離(li)心10分(fen)鐘(zhong)去除顆粒(li)和(he)聚(ju)合物。

4.  組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將組織(zhi)加(jia)入適量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000轉(zhuan)離心(xin)10分(fen)鐘(zhong)取上清(qing)。

5.  保(bao)存(cun)：如果樣本(ben)收(shou)集(ji)後(hou)不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測(ce)，請按壹次用(yong)量分(fen)裝，凍存(cun)於-20℃，避(bi)免(mian)反復凍(dong)融，在室溫(wen)下解凍(dong)並確保(bao)樣品均(jun)勻地(di)充(chong)分(fen)解凍。

自(zi)備物(wu)品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度(du)加(jia)樣器(qi)及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫箱(xiang)

操(cao)作註(zhu)意事項(xiang)

1.  試(shi)劑盒保(bao)存(cun)在2-8℃，使(shi)用(yong)前(qian)室(shi)溫平衡(heng)20分(fen)鐘(zhong)。從冰箱(xiang)取出的(de)濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液(ye)會有結晶(jing)，這(zhe)屬(shu)於正常(chang)現象，水(shui)浴(yu)加(jia)熱使(shi)結晶(jing)wan全溶解(jie)後再(zai)使(shi)用(yong)。

2.  實(shi)驗(yan)中(zhong)不用(yong)的板(ban)條應(ying)立(li)即(ji)放回自(zi)封(feng)袋中(zhong)，密(mi)封（低溫幹燥）保(bao)存(cun)。

3.  濃(nong)度(du)為0的(de)S0號(hao)標準(zhun)品即可(ke)視為(wei)陰(yin)性對(dui)照或者空(kong)白(bai)；按照說明(ming)書操(cao)作(zuo)時(shi)樣本(ben)已(yi)經(jing)稀釋5倍(bei)，最終(zhong)結(jie)果(guo)乘(cheng)以(yi)5才是樣本(ben)實(shi)際(ji)濃度(du)。

4.  嚴(yan)格(ge)按照說明(ming)書中(zhong)標(biao)明(ming)的時(shi)間(jian)、加(jia)液(ye)量及順(shun)序(xu)進行溫育(yu)操(cao)作。

5.  所(suo)有液(ye)體組(zu)分(fen)使(shi)用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)搖勻。

試(shi)劑盒組成(cheng)

註(zhu)：標(biao)準(zhun)品（S0-S5）濃(nong)度(du)依次為(wei)：0、7.5、15、30、60、120μmol/ L

試(shi)劑的(de)準(zhun)備

 20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖(chong)液(ye)的稀(xi)釋：蒸(zheng)餾水(shui)按(an)1：20稀釋，即(ji)1份(fen)的20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖(chong)液(ye)加(jia)19份(fen)的蒸(zheng)餾水(shui)。

洗(xi)板(ban)方法(fa)

1.  手工洗(xi)板(ban)：甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內液(ye)體，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置(zhi)1min後(hou)甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內液(ye)體，在吸(xi)水(shui)紙(zhi)上拍(pai)幹(gan)，如此(ci)洗(xi)板(ban)5次。

2.  自(zi)動(dong)洗(xi)板(ban)機(ji)：每(mei)孔(kong)註(zhu)入洗(xi)液(ye)350μL，浸泡(pao)1min，洗(xi)板(ban)5次。

操(cao)作步驟(zhou)

1.  從室溫(wen)平衡(heng)20min後(hou)的鋁箔袋中(zhong)取出所(suo)需(xu)板(ban)條，剩余板(ban)條用(yong)自封(feng)袋密(mi)封(feng)放回(hui)4℃。

2.  設(she)置(zhi)標準(zhun)品孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)，標(biao)準(zhun)品孔(kong)各(ge)加(jia)不同(tong)濃度(du)的標(biao)準(zhun)品50μL；

3.  樣本(ben)孔(kong)先(xian)加(jia)待(dai)測(ce)樣本(ben)10μL，再(zai)加(jia)樣本(ben)稀(xi)釋液(ye)40μL；空(kong)白(bai)孔(kong)不(bu)加(jia)。

4.  除空白(bai)孔(kong)外(wai)，標(biao)準(zhun)品孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)中(zhong)每孔(kong)加(jia)入辣根過(guo)氧化(hua)物酶（HRP）標(biao)記的(de)檢(jian)測抗體(ti)100μL，用(yong)封板(ban)膜封(feng)住(zhu)反(fan)應(ying)孔(kong)，37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)或恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫育(yu)60min。

5.  棄(qi)去液(ye)體，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上拍(pai)幹(gan)，每孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置(zhi)1min，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye)，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上拍(pai)幹(gan)，如此(ci)重復洗(xi)板(ban)5次（也可(ke)用(yong)洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)板(ban)）。

6.  每(mei)孔(kong)加(jia)入底(di)物A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光孵(fu)育15min。

7.  每(mei)孔(kong)加(jia)入終止(zhi)液(ye)50μL，15min內，在450nm波長處(chu)測定(ding)各(ge)孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

結(jie)果判斷

 繪(hui)制標準(zhun)曲(qu)線：在Excel工(gong)作表(biao)中(zhong)，以標準(zhun)品濃度(du)作橫(heng)坐標(biao)，對(dui)應(ying)OD值(zhi)作縱坐標(biao)，繪(hui)制出標(biao)準(zhun)品線性回(hui)歸曲(qu)線，按曲(qu)線方程計算(suan)各樣本(ben)濃(nong)度(du)值(zhi)。 

試(shi)劑盒性能(neng)

1.  準(zhun)確性(xing)：標準(zhun)品線性回(hui)歸與預期(qi)濃(nong)度(du)相(xiang)關系數(shu)R值(zhi)，大於等於0.9900。

2.  靈(ling)敏度(du)：最di檢(jian)測濃(nong)度(du)小於1.0μmol/L。

3.  特異性：不與(yu)其它(ta)可(ke)溶性(xing)結(jie)構類似物交(jiao)叉(cha)反應(ying)。

4.  重(zhong)復性(xing)：板(ban)內、板(ban)間(jian)變異(yi)系數(shu)均(jun)小於15%。

5.  貯(zhu)藏：2-8℃，避(bi)光防(fang)潮(chao)保(bao)存(cun)。

6.  有效期(qi)：6個(ge)月(yue)

免(mian)責聲(sheng)明(ming)

1.   試(shi)劑盒僅供(gong)研究(jiu)使(shi)用(yong)，不得(de)用(yong)於臨(lin)床實(shi)驗(yan)或狗體(ti)實(shi)驗(yan)，否(fou)則所產(chan)生(sheng)的(de)壹切後果，由(you)實(shi)驗(yan)者承(cheng)擔(dan)，本(ben)公(gong)司概不(bu)負(fu)責。

2.   嚴(yan)格(ge)按照說明(ming)書操(cao)作(zuo)，實(shi)驗(yan)者違反(fan)說(shuo)明(ming)書操(cao)作(zuo)，後(hou)果(guo)由(you)實(shi)驗(yan)者承(cheng)擔(dan)。