艾滋(zi)病病毒（HIV）ELISA檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒 使用(yong)說明書

試劑(ji)盒(he)采用(yong)雙(shuang)抗(kang)壹步(bu)夾(jia)心(xin)法(fa)酶(mei)聯(lian)免疫(yi)吸(xi)附(fu)試驗(yan)（ELISA）。往預先(xian)包(bao)被抗人(ren)類(lei)免疫(yi)缺(que)陷(xian)病毒抗原微(wei)孔(kong)中，依次(ci)加(jia)入(ru)標(biao)本(ben)、HRP標(biao)記(ji)的檢(jian)測(ce)抗體，經過(guo)溫育並(bing)徹di洗(xi)滌(di)。用(yong)底(di)物TMB顯色，TMB在過氧化物酶(mei)的催化下轉化成(cheng)藍(lan)色(se)，並(bing)在酸的作(zuo)用(yong)下轉化成(cheng)最終的黃色(se)。用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)在450nm波長(chang)下測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度（OD 值(zhi)），與(yu)CUTOFF值(zhi)相(xiang)比(bi)較(jiao)，從(cong)而判定(ding)標(biao)本(ben)中艾滋(zi)病病毒（HIV）的存在與否。

樣(yang)品(pin)收集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保存方(fang)法(fa)

1.  血清(qing)：使用(yong)不(bu)含(han)熱原和(he)內(nei)毒素的試(shi)管，操(cao)作(zuo)過程(cheng)中避免任何細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集(ji)血(xue)液後，3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘將(jiang)血清(qing)和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速(su)小(xiao)心地(di)分離(li)。

2.  血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)或(huo)肝素(su)抗凝。3000轉(zhuan)離(li)心30分(fen)鐘取(qu)上清。

3.  細胞(bao)上清液：3000轉離(li)心10分(fen)鐘去(qu)除(chu)顆(ke)粒和(he)聚(ju)合物。

4.  組織勻漿(jiang)：將組織加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘取(qu)上清。

5.  保存：如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)收集(ji)後不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測(ce)，請(qing)按(an)壹次(ci)用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，凍存於(yu)-20℃，避免反復(fu)凍融(rong)，在室溫下解凍並(bing)確保樣(yang)品(pin)均(jun)勻地(di)充(chong)分(fen)解凍。

自備(bei)物品(pin)

1. 酶標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精(jing)度加(jia)樣(yang)器及(ji)槍(qiang)頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱(xiang)

操作(zuo)註(zhu)意事項

1.  試劑(ji)盒(he)保存在2-8℃，使用(yong)前(qian)室溫平(ping)衡(heng)20分鐘。從(cong)冰(bing)箱(xiang)取(qu)出的濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液會有結晶，這屬於正(zheng)常現(xian)象(xiang)，水浴加(jia)熱使結晶wan全溶(rong)解(jie)後再(zai)使用(yong)。

2.  實(shi)驗(yan)中不(bu)用(yong)的板(ban)條應(ying)立即放回自封袋(dai)中，密封（低溫幹燥(zao)）保存。

3.  預處(chu)理(li)後的樣(yang)本(ben)無(wu)需(xu)稀(xi)釋(shi)，直(zhi)接取(qu)50μL加(jia)樣(yang)即可(ke)。

4.  嚴格按照說明書中標(biao)明(ming)的時(shi)間、加(jia)液量(liang)及(ji)順(shun)序(xu)進行(xing)溫育操作(zuo)。

5.  所有(you)液體組分使用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)搖勻。

試劑(ji)盒(he)組成(cheng)

試劑(ji)的準(zhun)備(bei)

 20×洗滌(di)緩沖液的稀(xi)釋(shi)：蒸(zheng)餾水(shui)按(an)1：20稀(xi)釋(shi)，即1份的20×洗(xi)滌(di)緩沖液加(jia)19份的蒸(zheng)餾水(shui)。

洗板(ban)方(fang)法(fa)

1.  手工(gong)洗(xi)板(ban)：甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內(nei)液體，每孔加(jia)滿(man)洗滌(di)液，靜(jing)置(zhi)1min後甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內(nei)液體，在吸(xi)水紙(zhi)上拍(pai)幹，如此洗板(ban)5次(ci)。

2.  自動(dong)洗板(ban)機：每孔註入(ru)洗(xi)液350μL，浸泡(pao)1min，洗(xi)板5次(ci)。

操作(zuo)步(bu)驟(zhou)

1.  從(cong)室溫平(ping)衡(heng)20min後的鋁(lv)箔袋(dai)中取(qu)出所需(xu)板條，剩(sheng)余(yu)板條用(yong)自封袋(dai)密(mi)封(feng)放回4℃。

2.  設(she)置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)孔和(he)樣(yang)本(ben)孔，陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)孔中加(jia)入(ru)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)各(ge)50μL；

3.  待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)孔加(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)50μL；

4.  隨後陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)孔和(he)樣(yang)本(ben)孔中每孔加(jia)入(ru)辣根(gen)過氧(yang)化物酶(mei)（HRP）標(biao)記(ji)的檢(jian)測(ce)抗(kang)原100μL，用(yong)封(feng)板(ban)膜封(feng)住反應(ying)孔，37℃水浴(yu)鍋(guo)或(huo)恒溫箱(xiang)溫育60min。

5.  棄去(qu)液體，吸(xi)水紙(zhi)上拍(pai)幹，每孔加(jia)滿(man)洗滌(di)液，靜(jing)置(zhi)1min，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液，吸(xi)水紙(zhi)上拍(pai)幹，如此重復(fu)洗(xi)板(ban)5次(ci)（也(ye)可(ke)用(yong)洗(xi)板(ban)機洗(xi)板）。

6.  每孔加(jia)入(ru)底(di)物A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光(guang)孵(fu)育15min。

7.  每孔加(jia)入(ru)終止液50μL，15min內(nei)，在450nm波長(chang)處測(ce)定(ding)各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)。

結果(guo)判斷(duan)

 1.  試驗(yan)有(you)效性：陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)孔OD值平均(jun)值(zhi)≥1.00；

                陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)孔OD值平(ping)均(jun)值(zhi)≤0.15。

2.  臨界(jie)值(zhi)（Cut off）計算(suan)：臨界(jie)值(zhi)=陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)孔平均(jun)值(zhi)+0.15

3.  陰(yin)性(xing)判斷(duan)：樣(yang)品(pin)OD值＜臨界(jie)值(zhi)（Cut off），樣(yang)品(pin)為陰(yin)性(xing)

4.  陽(yang)性(xing)判斷(duan)：樣(yang)品(pin)OD值＞臨界(jie)值(zhi)（Cut off），樣(yang)品(pin)為陽(yang)性(xing)

試劑(ji)盒(he)性能(neng)

1.  準(zhun)確(que)性(xing)：陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)孔OD值平(ping)均(jun)值(zhi)≥1.00；陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)孔OD值平均(jun)值(zhi)≤0.15，說明試驗(yan)結果(guo)有效。

2.  特(te)異(yi)性：不(bu)與(yu)其它可(ke)溶性(xing)結(jie)構類似(si)物交(jiao)叉(cha)反應(ying)。

3.  重復(fu)性(xing)：板內(nei)、板間變(bian)異(yi)系(xi)數均(jun)小(xiao)於15%。

4.  貯藏：2-8℃，避光(guang)防潮保存。

5.  有效期(qi)：6個月(yue)

免責聲(sheng)明

1.   試劑(ji)盒(he)僅供研究使用(yong)，不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨床實(shi)驗(yan)或人(ren)體(ti)實(shi)驗(yan)，否則(ze)所(suo)產(chan)生(sheng)的壹(yi)切(qie)後果(guo)，由實(shi)驗(yan)者(zhe)承(cheng)擔(dan)，本(ben)公司概(gai)不(bu)負(fu)責。

2.   嚴格按照說明書操(cao)作，實(shi)驗(yan)者(zhe)違(wei)反說明書操(cao)作，後果(guo)由實(shi)驗(yan)者(zhe)承(cheng)擔(dan)。