貝(bei)類（Shellfish）精(jing)氨酸(suan)酶(mei)（Arg）ELISA檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)

試(shi)劑盒(he)采(cai)用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)壹步(bu)夾心法(fa)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附(fu)試驗（ELISA）。往(wang)預(yu)先(xian)包被(bei)精(jing)氨酸(suan)酶(mei)（Arg）抗體(ti)的包(bao)被(bei)微(wei)孔(kong)中，依(yi)次(ci)加入標本、標(biao)準(zhun)品(pin)、HRP標記(ji)的檢(jian)測抗(kang)體(ti)，經過(guo)溫(wen)育(yu)並徹(che)di洗滌。用(yong)底(di)物(wu)TMB顯色，TMB在(zai)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍色，並在酸的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)轉化(hua)成(cheng)最終(zhong)的(de)黃(huang)色。顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)和(he)樣品(pin)中的精氨酸(suan)酶(mei)（Arg）呈(cheng)正相關(guan)。用(yong)酶(mei)標儀在450nm 波(bo)長下(xia)測定(ding)吸光(guang)度(du)（OD 值），計算(suan)樣品(pin)濃度。

樣品(pin)收集(ji)、處(chu)理及保存(cun)方(fang)法(fa)

1.  血清：使用(yong)不(bu)含(han)熱原(yuan)和(he)內毒素的(de)試管，操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避免任何細(xi)胞刺(ci)激(ji)，收集(ji)血液(ye)後(hou)，3000轉離(li)心10分(fen)鐘將(jiang)血清和(he)紅細(xi)胞迅(xun)速(su)小心(xin)地分(fen)離(li)。

2.  血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽或肝(gan)素抗(kang)凝。3000轉(zhuan)離(li)心30分(fen)鐘取上(shang)清。

3.  細(xi)胞上(shang)清液(ye)：3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒和(he)聚合(he)物。

4.  組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加入適量生(sheng)理(li)鹽水搗碎(sui)。3000轉離(li)心10分(fen)鐘取上(shang)清。

5.  保(bao)存(cun)：如果樣本(ben)收集(ji)後(hou)不(bu)及(ji)時檢(jian)測，請(qing)按(an)壹次用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避(bi)免反(fan)復凍融(rong)，在(zai)室溫下(xia)解凍並確保樣品(pin)均(jun)勻(yun)地充(chong)分(fen)解凍(dong)。

自(zi)備物品(pin)

1. 酶(mei)標儀（450nm）

2. 高精度加樣器(qi)及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫(wen)箱(xiang)

操作(zuo)註(zhu)意事項(xiang)

1.  試(shi)劑盒保(bao)存在(zai)2-8℃，使用(yong)前(qian)室溫平(ping)衡(heng)20分(fen)鐘。從(cong)冰箱取出的濃縮洗滌液會(hui)有結(jie)晶(jing)，這(zhe)屬於正常現(xian)象，水浴加熱使結(jie)晶wan全(quan)溶解(jie)後(hou)再使用(yong)。

2.  實驗中不(bu)用(yong)的(de)板條應(ying)立(li)即放回自封袋中，密封（低(di)溫幹燥）保(bao)存(cun)。

3.  濃度為0的S0號(hao)標準(zhun)品(pin)即可視(shi)為陰性對照(zhao)或者空白；按照(zhao)說(shuo)明(ming)書操作(zuo)時樣本(ben)已經稀(xi)釋5倍(bei)，最(zui)終(zhong)結(jie)果乘(cheng)以(yi)5才是樣本(ben)實際(ji)濃度。

4.  嚴格按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書中標明的(de)時間(jian)、加液量及順序(xu)進(jin)行溫(wen)育(yu)操(cao)作(zuo)。

5.  所(suo)有液(ye)體(ti)組分(fen)使用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)搖勻(yun)。

試(shi)劑(ji)盒(he)組(zu)成(cheng)

註(zhu)：標準(zhun)品(pin)（S0-S5）濃度依(yi)次(ci)為：0、10、20、40、80、160 pg/mL

試劑的(de)準備

20×洗滌緩(huan)沖(chong)液的稀釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水按1：20稀(xi)釋(shi)，即1份(fen)的20×洗滌緩(huan)沖(chong)液加19份的蒸餾(liu)水。

洗板(ban)方(fang)法(fa)

1.  手工洗(xi)板：甩盡孔(kong)內液體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)1min後甩(shuai)盡孔(kong)內液體(ti)，在吸水紙上(shang)拍幹，如此洗(xi)板(ban)5次。

2.  自(zi)動洗板(ban)機：每(mei)孔(kong)註(zhu)入洗(xi)液(ye)350μL，浸泡(pao)1min，洗板(ban)5次(ci)。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟

1.  從室溫平(ping)衡(heng)20min後的鋁(lv)箔袋中取出所(suo)需板(ban)條(tiao)，剩(sheng)余(yu)板(ban)條用(yong)自(zi)封袋密(mi)封放回4℃。

2.  設置(zhi)標準(zhun)品(pin)孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)，標準(zhun)品(pin)孔(kong)各加不(bu)同(tong)濃度的(de)標(biao)準品(pin)50μL；

3.  樣本(ben)孔(kong)先加待(dai)測樣本(ben)10μL，再加樣本(ben)稀釋液(ye)40μL；空白(bai)孔(kong)不(bu)加。

4.  除空白孔(kong)外，標(biao)準品(pin)孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)中每(mei)孔(kong)加入辣根過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)（HRP）標記(ji)的檢(jian)測抗(kang)體(ti)100μL，用(yong)封板(ban)膜(mo)封住反應(ying)孔(kong)，37℃水浴鍋(guo)或恒溫(wen)箱(xiang)溫育(yu)60min。

5.  棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，吸水紙上(shang)拍幹，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)1min，甩去(qu)洗滌液，吸水紙上(shang)拍幹，如此重(zhong)復(fu)洗板(ban)5次（也可用(yong)洗(xi)板機洗板）。

6.  每(mei)孔(kong)加入底(di)物(wu)A、B各50μL，37℃避光(guang)孵育(yu)15min。

7.  每(mei)孔(kong)加入終止液(ye)50μL，15min內，在450nm波(bo)長處測定(ding)各(ge)孔(kong)的OD值。

結果判(pan)斷(duan)

繪(hui)制(zhi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)：在Excel工(gong)作(zuo)表中，以標準(zhun)品(pin)濃度作(zuo)橫坐(zuo)標，對應(ying)OD值作(zuo)縱(zong)坐(zuo)標，繪(hui)制(zhi)出(chu)標(biao)準(zhun)品(pin)線(xian)性回歸曲(qu)線(xian)，按曲(qu)線(xian)方程(cheng)計算(suan)各(ge)樣本(ben)濃度值。

試劑盒性能(neng)

1.  準確(que)性：標(biao)準品(pin)線(xian)性回歸與(yu)預(yu)期(qi)濃度相關(guan)系數(shu)R值，大(da)於等(deng)於(yu)0.9900。

2.  靈(ling)敏度(du)：zui低(di)檢(jian)測濃度小於(yu)1.0 pg/mL。

3.  特異性：不(bu)與(yu)其它(ta)可溶性結(jie)構類(lei)似物交(jiao)叉反應(ying)。

4.  重(zhong)復(fu)性：板(ban)內、板間(jian)變異系(xi)數均(jun)小於(yu)15%。

5.  貯(zhu)藏：2-8℃，避(bi)光(guang)防潮保(bao)存(cun)。

6.  有效(xiao)期：6個月(yue)

免責(ze)聲(sheng)明

1.   試(shi)劑盒(he)僅(jin)供研(yan)究(jiu)使用(yong)，不(bu)得用(yong)於(yu)臨床實驗或貝類體(ti)實驗，否則(ze)所(suo)產生(sheng)的(de)壹切後果，由實驗者承(cheng)擔，本(ben)公司(si)概(gai)不(bu)負(fu)責(ze)。

嚴格按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書操作(zuo)，實驗者違反說(shuo)明(ming)書操作(zuo)，後果由實驗者承(cheng)擔。