人乙型腦(nao)炎(yan)病毒IgG抗體(ti)（JEV-IgG）說明書(shu)

檢(jian)測(ce)原理(li)

試劑盒采(cai)用雙抗壹(yi)步(bu)夾(jia)心法(fa)酶(mei)聯免疫(yi)吸附試驗(yan)（ELISA）。往(wang)預(yu)先包(bao)被乙型腦(nao)炎(yan)病毒抗原的(de)包被微孔中，依(yi)次加入標(biao)本(ben)、標(biao)準(zhun)品(pin)、HRP標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗體(ti)，經(jing)過(guo)溫(wen)育(yu)並徹(che)di洗(xi)滌(di)。用底物TMB顯色(se)，TMB在過(guo)氧化(hua)物酶(mei)的(de)催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化成藍(lan)色(se)，並在酸(suan)的(de)作用下(xia)轉(zhuan)化成最終的(de)黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣(yang)品(pin)中的(de)乙型腦(nao)炎(yan)病毒IgG抗體(ti)（JEV-IgG）呈正相(xiang)關。用酶(mei)標(biao)儀(yi)在450nm 波長下(xia)測(ce)定(ding)吸光度(du)（OD 值），計算(suan)樣品(pin)濃度。

樣品(pin)收(shou)集、處理(li)及保存方法(fa)

1.  血(xue)清(qing)：使用不含熱(re)原和內(nei)毒素的(de)試管，操(cao)作過(guo)程中避免(mian)任何細(xi)胞刺(ci)激，收(shou)集血(xue)液(ye)後，3000轉離(li)心10分鐘將血清和紅細胞迅速小(xiao)心(xin)地分離。

2.  血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽或肝(gan)素抗凝(ning)。3000轉離心30分鐘取(qu)上清(qing)。

3.  細胞上(shang)清液：3000轉離(li)心(xin)10分鐘去(qu)除顆粒(li)和聚(ju)合(he)物。

4.  組織勻漿(jiang)：將組織加入適(shi)量(liang)生理(li)鹽水搗(dao)碎(sui)。3000轉離心10分鐘取(qu)上清(qing)。

5.  保存(cun)：如果樣本(ben)收(shou)集後(hou)不及(ji)時檢(jian)測(ce)，請(qing)按壹(yi)次用量(liang)分裝，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反復(fu)凍融(rong)，在室(shi)溫下(xia)解(jie)凍並確保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻地(di)充分解(jie)凍。

自(zi)備(bei)物品(pin)

1. 酶(mei)標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精(jing)度(du)加(jia)樣(yang)器及(ji)槍(qiang)頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操(cao)作註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)

1. 試劑盒保存(cun)在2-8℃，使用前室溫(wen)平(ping)衡(heng)20分鐘。從(cong)冰(bing)箱取(qu)出(chu)的(de)濃縮洗滌(di)液會(hui)有(you)結晶(jing)，這(zhe)屬於(yu)正(zheng)常現(xian)象(xiang)，水浴(yu)加熱(re)使結(jie)晶(jing)wan全溶(rong)解(jie)後再(zai)使用。

2. 實驗(yan)中不用的(de)板條(tiao)應立即(ji)放(fang)回自(zi)封袋中，密封（低(di)溫幹燥）保存(cun)。

3. 濃度為(wei)0的(de)S0號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)即(ji)可視(shi)為(wei)陰性對(dui)照(zhao)或者(zhe)空白(bai)；按照(zhao)說明書(shu)操(cao)作時樣(yang)本(ben)已經稀釋(shi)5倍(bei)，最(zui)終結(jie)果(guo)乘以(yi)5才(cai)是樣本(ben)實際濃度。

4.  嚴格按照(zhao)說明書(shu)中標(biao)明的(de)時間、加液(ye)量(liang)及順(shun)序(xu)進行(xing)溫(wen)育操(cao)作。

5. 所(suo)有(you)液體(ti)組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

註：標(biao)準(zhun)品(pin)（S0-S5）濃度依次為(wei)：0、3、6、12、24、48 pg/mL

試劑的(de)準(zhun)備(bei)

20×洗(xi)滌(di)緩沖液的(de)稀釋(shi)：蒸餾(liu)水(shui)按1：20稀(xi)釋(shi)，即(ji)1份(fen)的(de)20×洗滌(di)緩沖液加(jia)19份(fen)的(de)蒸餾(liu)水(shui)。

洗板(ban)方(fang)法(fa)

1. 手(shou)工(gong)洗板：甩盡孔內液體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液，靜置1min後甩盡孔內液體(ti)，在吸水紙(zhi)上拍幹，如此(ci)洗板(ban)5次。

2. 自(zi)動洗(xi)板(ban)機(ji)：每(mei)孔(kong)註入洗(xi)液(ye)350μL，浸泡1min，洗板5次。

操(cao)作步(bu)驟(zhou)

1. 從室溫(wen)平衡(heng)20min後的(de)鋁箔(bo)袋中取(qu)出(chu)所需板條(tiao)，剩(sheng)余(yu)板(ban)條(tiao)用自(zi)封袋密封放(fang)回4℃。

2.  設置標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)和樣(yang)本(ben)孔(kong)，標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)各(ge)加(jia)不同濃度的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)50μL；

3.  樣(yang)本(ben)孔(kong)先加(jia)待(dai)測(ce)樣本(ben)10μL，再(zai)加樣本(ben)稀(xi)釋(shi)液(ye)40μL；空(kong)白(bai)孔不加(jia)。

4. 除空白(bai)孔外(wai)，標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)和樣(yang)本(ben)孔(kong)中每(mei)孔(kong)加入辣根(gen)過(guo)氧化(hua)物酶(mei)（HRP）標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗體(ti)100μL，用封板膜封住(zhu)反應孔(kong)，37℃水(shui)浴(yu)鍋或恒溫箱溫(wen)育(yu)60min。

5. 棄去(qu)液(ye)體(ti)，吸水紙(zhi)上拍幹，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液，靜置1min，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液，吸水紙(zhi)上拍幹，如此(ci)重復洗(xi)板5次（也(ye)可用洗板機(ji)洗(xi)板）。

6. 每(mei)孔(kong)加入底(di)物A、B各(ge)50μL，37℃避光(guang)孵(fu)育15min。

7. 每(mei)孔(kong)加入終止液(ye)50μL，15min內(nei)，在450nm波長處測(ce)定(ding)各(ge)孔(kong)的(de)OD值。

結(jie)果判(pan)斷(duan)

繪(hui)制標(biao)準(zhun)曲線：在Excel工(gong)作表(biao)中，以(yi)標(biao)準(zhun)品(pin)濃度作橫(heng)坐(zuo)標(biao)，對(dui)應OD值(zhi)作(zuo)縱(zong)坐(zuo)標(biao)，繪(hui)制出(chu)標(biao)準(zhun)品(pin)線性回(hui)歸(gui)曲線，按(an)曲(qu)線方(fang)程計算(suan)各(ge)樣(yang)本(ben)濃度值。

試劑盒性能(neng)

1. 準(zhun)確性：標(biao)準(zhun)品(pin)線性回(hui)歸(gui)與預(yu)期濃度相(xiang)關系(xi)數(shu)R值(zhi)，大(da)於(yu)等(deng)於(yu)0.9900。

2. 靈(ling)敏度：最(zui)di檢(jian)測(ce)濃度小於(yu)0.1 pg/mL。

3. 特(te)異(yi)性：不與(yu)其它(ta)可溶(rong)性結(jie)構類(lei)似(si)物交叉反應。

4. 重復性：板(ban)內(nei)、板間變異(yi)系(xi)數(shu)均(jun)小於(yu)15%。

5. 貯(zhu)藏(zang)：2-8℃，避光(guang)防(fang)潮保(bao)存。

6. 有(you)效(xiao)期：6個月

免責(ze)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得(de)用於(yu)臨(lin)床實驗(yan)或人(ren)體(ti)實驗(yan)，否(fou)則所產生的(de)壹切(qie)後果(guo)，由(you)實驗(yan)者(zhe)承(cheng)擔(dan)，本(ben)公(gong)司概不負(fu)責(ze)。

2. 嚴格按照(zhao)說明書(shu)操(cao)作，實驗(yan)者(zhe)違反說明書(shu)操(cao)作，後(hou)果(guo)由(you)實驗(yan)者(zhe)承(cheng)擔(dan)。