科(ke)研(yan)ELISA試劑盒(he)的常(chang)用類(lei)型及(ji)步(bu)驟(zhou)

科研(yan)ELISA試劑盒(he)的常(chang)用類(lei)型及(ji)步(bu)驟(zhou)
ELISA，即“酶(mei)聯免疫吸(xi)附實(shi)驗(yan)"，是(shi)壹種(zhong)常(chang)用的(de)生物(wu)分(fen)析技(ji)術(shu)，通過(guo)檢(jian)測樣(yang)品(pin)中(zhong)特定蛋白(bai)質的含(han)量(liang)，來幫(bang)助(zhu)研(yan)究(jiu)人員(yuan)在(zai)生(sheng)命科學中(zhong)開展(zhan)多種(zhong)實(shi)驗(yan)。然(ran)而，要完成(cheng)ELISA實(shi)驗(yan)需要用到(dao)壹整套(tao)試劑(ji)盒(he)，其中(zhong)常(chang)用的(de)試劑(ji)盒(he)種類有很(hen)多。本(ben)文(wen)將從試劑(ji)盒(he)的分類、用途、常(chang)用步(bu)驟(zhou)、質量控(kong)制4個(ge)方面，詳細(xi)介(jie)紹在(zai)科(ke)研(yan)實(shi)驗(yan)中(zhong)常(chang)使(shi)用的(de)ELISA試劑(ji)盒(he)。
壹、試(shi)劑(ji)盒(he)的分類
根據(ju)檢(jian)測原(yuan)理(li)不同，ELISA試劑(ji)盒(he)可(ke)分為直接ELISA試劑盒(he)、間接ELISA試劑盒(he)、夾(jia)心ELISA試劑(ji)盒(he)、競爭(zheng)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)、免疫層析試(shi)劑(ji)盒(he)、光學顯微鏡試(shi)劑盒(he)等多種(zhong)。其中(zhong)，直接ELISA試劑盒(he)是最jian便(bian)的壹種(zhong)，也(ye)是最(zui)早應(ying)用的(de)壹種(zhong)；夾(jia)心ELISA試劑(ji)盒(he)則是目前應(ying)用zui廣fan的類(lei)型，采用夾(jia)心法可(ke)以很精(jing)確地(di)定量測定某(mou)種蛋白(bai)質的含(han)量(liang)；競爭(zheng)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)用來測(ce)定低濃度(du)的多肽激(ji)素(su)和(he)抗體(ti)，具(ju)有更(geng)高(gao)的(de)靈敏(min)度(du)。在(zai)選(xuan)擇(ze)試(shi)劑(ji)盒(he)時(shi)需要了解(jie)其適用範(fan)圍(wei)、檢(jian)測靈敏(min)度(du)和(he)穩定性等指(zhi)標，確定(ding)是否符合(he)實(shi)驗(yan)的(de)需要。
二(er)、試劑(ji)盒(he)的用途
ELISA試(shi)劑盒(he)廣泛應(ying)用於生命科學、醫學(xue)診斷(duan)、藥(yao)物(wu)研(yan)發、食品(pin)安(an)全(quan)、環(huan)境(jing)保(bao)護等多個(ge)領域。例如(ru)，在(zai)生(sheng)命科學領域中(zhong)，科(ke)研(yan)人員(yuan)可(ke)以利用它來測(ce)定某(mou)種蛋白(bai)質的含(han)量(liang)、研(yan)究(jiu)免疫系(xi)統(tong)和(he)感染病(bing)毒(du)的機(ji)制。在(zai)醫學(xue)診斷(duan)領域中(zhong)，ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)常(chang)被用於檢(jian)測血(xue)清中(zhong)腫瘤標誌物(wu)的含(han)量。在(zai)食(shi)品(pin)安(an)全(quan)領域中(zhong)，ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)可(ke)用來檢(jian)測食(shi)品(pin)中(zhong)的(de)殘留物(wu)和(he)汙(wu)染物(wu)等(deng)。
三(san)、ELISA試劑(ji)盒(he)的常(chang)用步(bu)驟(zhou)
1.塗(tu)覆
首(shou)先(xian)，將特定抗原(yuan)塗(tu)覆在(zai)微孔板(ban)表(biao)面，壹般(ban)選(xuan)擇(ze)質地緊(jin)密、透亮、表(biao)面光潔的微孔板(ban)。抗原(yuan)的含(han)量、塗(tu)覆時(shi)間(jian)和(he)溫(wen)度(du)都會(hui)影(ying)響檢(jian)測結(jie)果。
2.阻斷(duan)
塗(tu)覆後(hou)的微孔板(ban)表(biao)面還有空(kong)隙(xi)，容易(yi)發生非(fei)特異(yi)性(xing)吸(xi)附，從而影(ying)響檢(jian)測結(jie)果。因此，需要在(zai)塗(tu)覆過(guo)程中(zhong)加(jia)入較低濃度(du)的牛(niu)血清(qing)蛋白(bai)（BSA）、明膠等蛋(dan)白(bai)，阻塞(sai)未被試劑(ji)占(zhan)據(ju)的(de)空(kong)位(wei)。
3.樣品(pin)加(jia)入
加(jia)入待測試的樣(yang)品(pin)或標準物質。若是(shi)多個(ge)樣品(pin)，需分(fen)別在(zai)不(bu)同的孔(kong)板(ban)中(zhong)加(jia)入。
4.加(jia)入檢(jian)測抗體(ti)
加(jia)入特異(yi)性(xing)檢(jian)測抗體(ti)，可(ke)與樣(yang)品(pin)中(zhong)特定蛋白(bai)質結合(he)。
5.加(jia)入二(er)抗及(ji)底(di)物
加(jia)入二(er)抗和(he)顯色底(di)物，可(ke)以將檢(jian)測抗體(ti)和(he)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)目(mu)標蛋白(bai)質結合(he)，產生(sheng)壹定(ding)的(de)信(xin)號(hao)，如(ru)顏(yan)色。
6.結果(guo)判(pan)讀(du)
通過(guo)光譜分(fen)析或(huo)比(bi)色法(fa)測量各孔(kong)位(wei)色素(su)的吸(xi)收(shou)率(lv)或(huo)發(fa)光強度(du)，從而計(ji)算出(chu)樣品(pin)中(zhong)含(han)有的(de)目(mu)標蛋白(bai)質含量(liang)。
四(si)、質量控(kong)制
ELISA試(shi)劑盒(he)在(zai)使(shi)用過(guo)程中(zhong)應(ying)該註(zhu)意質量控(kong)制。比(bi)如(ru)，在(zai)樣(yang)品(pin)和(he)試(shi)劑的(de)制備(bei)中(zhong)要求熟(shu)練掌(zhang)握(wo)各種(zhong)實(shi)驗(yan)技(ji)巧(qiao)，保(bao)證實(shi)驗(yan)的(de)穩定和(he)準確性；在(zai)檢(jian)測過(guo)程中(zhong)，要按程序(xu)和(he)結(jie)果質量要求執(zhi)行實(shi)驗(yan)，符合(he)實(shi)驗(yan)操作(zuo)規(gui)範(fan)。同時(shi)，在(zai)使(shi)用過(guo)程中(zhong)嚴(yan)格控制卡(ka)扣、儲存試(shi)劑(ji)、保(bao)證實(shi)驗(yan)室(shi)環(huan)境(jing)等(deng)方面也要註(zhu)意給予齊(qi)全的(de)保(bao)障(zhang)，避(bi)免實(shi)驗(yan)過(guo)程中(zhong)的(de)誤差幹擾(rao)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)。
綜(zong)上(shang)所(suo)述(shu)，ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)是生物分析技(ji)術(shu)的重(zhong)要代(dai)表(biao)，其分類(lei)和(he)用途各有側(ce)重(zhong)，在(zai)實(shi)驗(yan)過(guo)程中(zhong)掌(zhang)握(wo)常(chang)用步(bu)驟(zhou)和(he)質量控(kong)制，可(ke)以保證實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)準確可(ke)靠(kao)，為科研(yan)人員(yuan)的(de)實(shi)驗(yan)研(yan)究(jiu)提(ti)供重(zhong)要幫助(zhu)。