ELISA試劑盒檢測血清的(de)詳(xiang)細(xi)留(liu)意(yi)事項

ELISA試(shi)劑盒檢測血清的(de)詳(xiang)細(xi)留(liu)意(yi)事項
  
  ELISA是酶聯(lian)接免(mian)疫(yi)吸(xi)附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的(de)簡(jian)稱。它是繼(ji)免(mian)疫(yi)熒(ying)光和(he)放(fang)射(she)免疫(yi)技(ji)術(shu)之後發(fa)展(zhan)起來(lai)的(de)壹(yi)種(zhong)免(mian)疫(yi)酶技(ji)術(shu)。
  
  在檢測時(shi)，受(shou)檢標(biao)本(ben)（測定其(qi)中(zhong)的抗原）與(yu)固相載體(ti)表(biao)面(mian)的抗(kang)體(ti)反(fan)應(ying)。洗(xi)滌後加(jia)入酶標(biao)記的(de)抗(kang)體(ti)，通(tong)過(guo)反(fan)應(ying)結合(he)在固相載體(ti)上(shang)。加(jia)入酶反(fan)應(ying)的底(di)物後，底(di)物被酶催化成(cheng)為有(you)色(se)產(chan)物，產(chan)物的量與(yu)標(biao)本(ben)中(zhong)受(shou)檢物質的量直(zhi)接相(xiang)關，可(ke)根據(ju)呈(cheng)色(se)的深(shen)淺(qian)進(jin)行定性(xing)或(huo)定(ding)量(liang)分析。
  
  1. 要留意(yi)防止(zhi)呈(cheng)現嚴(yan)峻溶血(xue)。血紅(hong)蛋白中(zhong)含(han)有(you)血(xue)紅素基(ji)團，其(qi)有(you)類似(si)過(guo)氧化(hua)物的活(huo)性，因(yin)而，在以HRP為符號(hao)酶的(de)ELISA測定中(zhong)，如血(xue)清標(biao)本(ben)中(zhong)血紅蛋(dan)白濃(nong)度較高(gao)，則其(qi)就很(hen)簡(jian)單(dan)在溫育過程(cheng)中(zhong)吸附於(yu)固相，然(ran)後與(yu)後邊(bian)參(can)加(jia)的(de)HRP底(di)物反(fan)應(ying)顯色(se)。
  
  2. 冰(bing)凍(dong)保(bao)存(cun)的(de)血(xue)清標(biao)本(ben)須(xu)留(liu)意防止(zhi)因(yin)停(ting)電(dian)等(deng)形成(cheng)的重(zhong)復(fu)凍(dong)融(rong)。標(biao)本(ben)的(de)重(zhong)復(fu)凍(dong)融(rong)所(suo)發(fa)生的機(ji)械剪(jian)切力(li)將(jiang)對標(biao)本(ben)中(zhong)的蛋白等(deng)分(fen)子(zi)發(fa)生損壞(huai)效果，然(ran)後引(yin)起(qi)假(jia)陰(yin)性結(jie)果。此外，凍融(rong)標(biao)本(ben)的(de)混勻(yun)亦(yi)應(ying)留意(yi)，不(bu)要(yao)進(jin)行劇烈振(zhen)蕩(dang)，重(zhong)復(fu)倒置混勻(yun)即可(ke)。
  
  3. 標(biao)本(ben)在保(bao)存(cun)中(zhong)如呈(cheng)現細(xi)菌汙(wu)染所(suo)造成(cheng)的的(de)混濁或(huo)絮(xu)狀(zhuang)物時(shi)，應(ying)離心(xin)沈積(ji)後取上(shang)清檢(jian)測。
  
  4. 樣(yang)本(ben)的收集(ji)及(ji)血清別(bie)離中(zhong)要留意(yi)盡量防止(zhi)細菌汙(wu)染，壹(yi)則細菌的(de)成(cheng)長(chang)，其(qi)所(suo)分(fen)泌的壹些酶可(ke)能會(hui)對抗(kang)原抗體(ti)等蛋(dan)白發(fa)生分化(hua)效果;二則壹些細菌的(de)內(nei)源(yuan)性酶如大腸桿菌的(de)β-半(ban)乳(ru)糖苷酶本(ben)身會(hui)對用(yong)相應(ying)酶作(zuo)符號(hao)的(de)測定方法發(fa)生非特異(yi)性攪擾(rao)。
  
  5. 血(xue)清標(biao)本(ben)如是以(yi)無(wu)菌操(cao)作(zuo)別(bie)離，則可以(yi)在2～8℃下保(bao)存(cun)壹(yi)周(zhou)，如為有(you)菌操(cao)作(zuo)，則(ze)主張冰(bing)凍(dong)保(bao)存(cun)。樣(yang)本(ben)的長(chang)期保(bao)存(cun)，應(ying)在-70℃以下。