ELISA實(shi)驗(yan)結果為什麽有時候(hou)會復測(ce)？

在ELISA實(shi)驗(yan)過程中時常(chang)會出(chu)現復測(ce)現象即我們(men)時常(chang)說的"花板(ban)"現象，這種(zhong)現象影響(xiang)檢(jian)驗(yan)結果的正確(que)判讀(du)，對工(gong)作(zuo)造(zao)成壹定的不利影響(xiang)，壹旦(dan)出(chu)現“花板"，實驗(yan)結果必(bi)須放(fang)棄，重(zhong)新(xin)進行(xing)，不(bu)僅(jin)浪(lang)費(fei)物料和時間(jian)，而(er)且(qie)還會出(chu)現樣本量缺(que)少(shao)、交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)、報告延遲(chi)等壹系(xi)列問題。

影響(xiang)因(yin)素分(fen)析如(ru)下(xia)：

壹、標本因(yin)素

正確(que)處(chu)理(li)標本，防止大規模溶(rong)血(xue)、血(xue)漿層異(yi)物、使(shi)用壹次(ci)性(xing)加(jia)樣槍(qiang)頭(tou)，防止交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。血(xue)清和血(xue)漿均可以用於(yu)檢(jian)測(ce)，但(dan)血(xue)清的分(fen)離應在(zai)抽(chou)血(xue)後等血(xue)液wan全(quan)凝(ning)固(gu)後再離心(xin)。

二、試(shi)劑因(yin)素

正確(que)保(bao)存及使(shi)用有(you)效試(shi)劑。使(shi)用過(guo)期試(shi)劑及底物(wu)接(jie)觸金屬(shu)容(rong)器、底物(wu)混(hun)合後放置時(shi)間(jian)較(jiao)長(chang)均(jun)影響(xiang)實(shi)驗(yan)結果的準(zhun)確(que)性(xing)。選擇(ze)試(shi)劑時應選(xuan)擇(ze)靈(ling)敏度(du)高(gao)、特(te)異(yi)性好、穩定性好，批間(jian)差小(xiao)的試(shi)劑。不同(tong)廠(chang)家的試(shi)劑不能(neng)混(hun)用，包(bao)括(kuo)底物(wu)和(he)洗(xi)滌(di)液。檢(jian)測(ce)前(qian)應將(jiang)試(shi)劑放置室(shi)溫平衡半(ban)小(xiao)時(shi)，洗(xi)滌(di)液應現用現配(pei)，同時觀(guan)察(cha)濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液中(zhong)有無結晶(jing)，若(ruo)有(you)結晶(jing)應放(fang)37℃水浴(yu)中(zhong)融化後才可使(shi)用。

三、技術(shu)人(ren)員操(cao)作(zuo)因(yin)素

嚴格(ge)按(an)照相關實驗(yan)SOP操(cao)作(zuo)實驗(yan)。加(jia)樣時(shi)應盡(jin)可能的垂直(zhi)加(jia)樣，並加(jia)在包(bao)被(bei)孔(kong)的底部(bu)（註(zhu)：勿(wu)應用力(li)過度破壞底部(bu)包(bao)被(bei)物質），不(bu)可加(jia)在孔(kong)的上部(bu)及外(wai)部(bu)。

四、溫浴(yu)的因(yin)素

使(shi)用水浴(yu)箱(xiang)作(zuo)為溫浴(yu)設(she)備(bei)時(shi)，應註(zhu)意水的深淺(qian)對結果的影響(xiang)，當(dang)水浴(yu)箱(xiang)中(zhong)水的的實測(ce)溫度(du)37℃時(shi)，則水面(mian)溫度(du)可能只有34℃，空(kong)氣(qi)溫度(du)更(geng)低(di)，甚至只有二十(shi)多(duo)度，所(suo)以當(dang)水浴(yu)箱(xiang)中(zhong)水位過低(di)時則(ze)酶(mei)標微(wei)孔(kong)板沒(mei)有(you)浸(jin)入(ru)水中，則反應溫度(du)會達不(bu)到(dao)37℃，相應的就會影響(xiang)酶(mei)促反(fan)應。為防止邊緣(yuan)效(xiao)應，酶(mei)標板(ban)應盡(jin)量(liang)浸(jin)入(ru)水中，以保(bao)證受(shou)熱(re)的均勻(yun)。水浴(yu)時(shi)，酶標板(ban)應封(feng)好(hao)，以免水滴(di)滴(di)入(ru)包(bao)被(bei)孔(kong)中，或(huo)陽性標本的蒸(zheng)發。嚴格(ge)掌握(wo)溫浴(yu)時(shi)間(jian)，不(bu)可為了早(zao)點出(chu)結果擅(shan)自縮(suo)短(duan)溫浴(yu)時(shi)間(jian)。

五、洗(xi)板機(ji)的因(yin)素

廢液瓶(ping)裝滿後應及時清空(kong)，以防止廢液回(hui)流(liu)對管(guan)道(dao)的汙染(ran)，而使(shi)洗(xi)滌(di)不(bu)che底，造(zao)成“花板(ban)"。洗(xi)板結束後應用蒸(zheng)餾水che底清(qing)洗(xi)管(guan)道(dao)，以防止廢液在(zai)管(guan)道(dao)中的殘留。同(tong)時(shi)應根(gen)據(ju)儀(yi)器維護保(bao)養(yang)程序，定期對洗(xi)板機(ji)進行(xing)維(wei)護(hu)保(bao)養(yang)。

六、酶標儀(yi)

酶標儀(yi)應安(an)置在(zai)避光(guang)條件下(xia)，比色(se)前(qian)應提(ti)前(qian)15-30分(fen)鐘開(kai)機(ji)預熱(re)，這樣測(ce)定結果會更(geng)穩定。為防止顯(xian)色(se)的加(jia)深或(huo)減弱，顯(xian)色(se)時(shi)間(jian)完(wan)成(cheng)後應立(li)即滴(di)加(jia)終(zhong)止液（避(bi)免氣泡(pao)產生(sheng)），並在(zai)10分(fen)鐘內(nei)完成(cheng)比色(se)。酶(mei)標板(ban)從(cong)水浴(yu)箱(xiang)取出(chu)後應擦凈孔(kong)底水滴(di)，若有(you)水滴(di)或紙屑(xie)殘留在(zai)孔(kong)底，會造(zao)成酶標儀(yi)讀(du)數(shu)錯誤，誤判定為“花板(ban)"。